CVA10候选疫苗病毒株的分离、鉴定及其致病性和免疫保护性研究

目的分离、筛选柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CVA10)病毒候选疫苗株,并对其免疫原性及免疫保护性进行评价,为CVA10疫苗的研制奠定基础。方法本研究从北京市儿童医院、军事医学研究院、北京市疾控中心共收集80个手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)标本,通过细胞培养法、RT-PCR的方法分离、鉴定CVA10病毒株。对病毒进行嗜斑纯化,各纯化病毒株与Al(OH)3(0.5 g/ml)佐剂混合后制备原疫苗,免疫Balb/c小鼠,收集血清。应用交叉中和实验及抗体阳转率实验筛选候选CVA10疫苗株。筛选后T9疫苗株免疫ICR乳鼠,观察ICR乳鼠的致病情况。结果共分离出14株CVA10病毒株。交叉中和实验筛选得到4株候选疫苗株。最后阳转率实验确定T9为候选疫苗株。Al(OH)3+CVA10灭活抗原在Balb/c小鼠体内能诱生高滴度的特异性抗体,该抗体对Balb/c小鼠有保护作用。T9病毒免疫ICR乳鼠后,对乳鼠完全致死。结论筛选1株CVA10病毒候选疫苗株,CVA10候选疫苗对ICR乳鼠动物模型有致病性。

2018-2021年广东汕头手足口病病原谱及CVA6/CVA10基因特征分析

本研究旨在通过对手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)病例的病原学标本进行肠道病毒分型鉴定,和对CVA6和CVA10开展VP1基因全长序列分析,探究广东省汕头市HFMD病原谱及CVA6和CVA10基因进化特征,为当地HFMD肠道病毒监测及预警提供一定的技术支撑。将汕头市病原监测哨点医院2018-2021年的HFMD样本进行RT-PCR肠道病毒病原学分型,筛选出CVA6和CVA10样本进行VP1区全长基因扩增和测序,并通过系统进化分析、同源性和突变位点分析了解其遗传进化特征。结果显示,2018-2021年共监测到HFMD阳性样本706份,其主要病原体为CVA6和CVA10。CVA6和CVA10流行株分别属于D3和C2亚型。CVA6样本VP1核苷酸和氨基酸的相似性分别为91.37%~100.00%和92.79%~100.00%,与2010年的中国台湾株高度同源(GenBank:JQ946055.1)。CVA10样本VP1核苷酸和氨基酸的相似性分别为92.28%~100.00%和96.98%~100.00%,与2014年的广东株高度同源(GenBank:MN451243.1)。与同型别原型株相比,CVA6样本有2个高频的非同义氨基酸突变位点造成了氨基酸极性或带电性的改变(F305S、T14A),CVA10样本则有9个(D25N、A33T、F148Y、Q223L、A291S、A78T、N27E、V240E、V107T)。以上结果提示当地需密切关注病毒流行谱和动态监测HFMD患者临床症状,以防病毒蛋白结构和功能的改变,加重其毒性和感染力。