柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。

C家族趋化因子XCL1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用

为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果。将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生。结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答。5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%。3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶。提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生。

反复CVB3m感染对小鼠心肌的影响

目的 研究反复病毒感染对小鼠心肌的损伤 ,观察转化生长因子β1(TGF-β1)在反复病毒性心肌损伤心肌基质胶原重建中的作用。方法 通过 3次反复且增量 CVB3 m病毒感染小鼠 ,建立慢性心肌损伤模型 ,于首次感染后第 74d处死小鼠 ,病理、组织化学及电镜分析心肌病理损伤和胶原系统改变 ,计算胶原容积分数。用EL ISA法测定血清 TGF-β1含量。结果 反复病毒感染后小鼠心功能降低 ,心肌胶原容积分数高于对照组 (P <0 .0 5) ,基质胶原明显增生重建 ,主要表现为瘢痕修复和间质纤维化。反复病毒感染组血清 TGF-β1含量 (0 .10 3 5± 1.2 70 0 ) μg/L 高于对照组 (P <0 .0 5)。结论 反复病毒感染对小鼠心肌的影响主要是基质胶原系统的增生重建 ,持续病毒感染和

柴胡 黄芩 炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究

目的 探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法 用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型 ,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗 ,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理变化。结果 柴胡组小鼠在感染后第 5 ,7,10天心肌病理积分为 1.33±0 .82 ,1.6 0± 0 .6 3和 1.87± 0 .74 ,明显低于对照组 (2 .2 2± 1.37,3.2 7± 0 .96 ,2 .6 0± 1.0 6 ) (P <0 .0 5或 0 .0 1)。炙甘草组小鼠在感染后第 5 ,7天心肌病理积分为 1.2 6± 0 .88和 1.80± 0 .6 8,明显低于相应对照组 (P <0 .0 5或0 .0 1)。黄芩组小鼠在感染第 14 ,2 1天后心肌病理积分 (1.5 3± 0 .74 ,0 .80± 0 .5 6 )与对照组 (2 .33± 0 .98,1.4 0±0 .83)比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 单剂柴胡、黄芩。

黄芩 柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3m RNA复制及IFNm RNA表达的影响

目的:研究黄芩、柴胡及其配伍提取物对心肌炎小鼠心肌组织CVB3mRNA复制及IFNmRNA表达的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为:柴胡组、黄芩组、配伍组,模型组和正常对照组。腹腔注射CVB3m病毒诱导Balb/c小鼠心肌炎模型,采用RT-PCR技术,检测各组小鼠给药后不同时间点心肌组织中CVB3m RNA的复制和IFNm RNA的表达情况。结果:3个给药组心肌组织中CVB3m-RNA的量明显低于模型对照组,其中黄芩组和配伍物组抗病毒作用明显;柴胡组和配伍组均可诱生干扰素,与模型组比较有显著差异。结论:黄芩提取物组具有明显抗病毒作用;柴胡在疾病早期具有明显抗病毒作用,且具有明显诱生干扰素的作用;配伍提取物组具有明显抗病毒和诱生干扰素作用,在疾病极期表现明显优势。

酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白

目的以CVB3VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LI M结构域结合蛋白1),NADH脱氢酶亚单位4。将筛选的GOLGA2cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用。结论本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4。

不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义

目的 确定新型chitosan DNA疫苗的有效免疫途径。方法 将chitosan pcDNA3 VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻 3种免疫方式免疫Balb c小鼠 ;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA ,评估其特异性体液免疫应答 ;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫 ;以 5LD50 致死剂量CVB3攻击免疫小鼠 ,评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果 ①在诱导CVB3特异性体液免疫方面 :chitosan pcDNA3 VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG ,但未能诱生黏膜IgA ;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA ,未能诱生特异性IgM和IgG ;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面 :仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性 ;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱 ;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用 :滴鼻组可保护 33.3%小鼠长期存活 ;口服组仅达到 16 .7%的保护率 ;肌注组无保护作用。结论 滴鼻免疫途径可能是chitosan pcDNA3

MDSCs诱导调节性T细胞改善CVB3诱导的病毒性心肌炎

目的探讨骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)在CVB3诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)中的保护作用。方法通过流式细胞术分选获得足量MDSCs,体外证实具有免疫抑制功能后行体内转输实验,观察疗效及免疫机制。结果与对照PBS组相比,MDSCs处理组体质量呈上升趋势,肌酸激酶(CK)活性明显降低(P<0.001),心脏局部炎症浸润及坏死病灶显著减少,7天生存率高达70%(P<0.01),而心肌病毒滴度无明显改变,却上调了CD4+FoxP3+调节性T细胞比例。结论 MDSCs可显著改善CVB3诱导的病毒性心肌炎,有望成为心肌炎防治的新型策略和手段。

CVB3-VP1基因免疫诱导特异性抗病毒免疫应答及保护作用

目的 :构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗 ,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增VP1基因 ,克隆于真核表达载体 pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其表达情况 ;以 5 0 μgpcDNA3 VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答。间隔 4wk以 5×LD50 的CVB3攻击小鼠 ,观察攻击后小鼠的存活情况。结果 :构建了重组质粒 pcDNA3 VP1,并在体外获得有效表达。以该质粒肌肉免疫BALB/c小鼠 ,可诱生高水平的IgM和IgG ,VP1多肽特异性淋巴细胞增殖反应及CTL活性均显著高于 pcDNA3免疫的对照组。病毒攻击试验表明 ,pcDNA3 VP1免疫组33.3%小鼠可长期存活 ,其心肌组织未见明显的病理学改变 ;而对照小鼠平均仅存活 6 .7d ,心肌显示大量的局灶性坏死和炎性细胞浸润。结论 :pcDNA3 VP1免疫可诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答 。

IL-15基因真核表达质粒的构建及其对CVB3 VP1基因疫苗的免疫增强作用

目的探讨人白细胞介素 15 (humaninterleukin 15 ,hIL 15 )基因佐剂对柯萨奇B3病毒 (CoxsackievirusB3 ,CVB3 )VP1基因疫苗的免疫增强效果。方法从人胚肺二倍体细胞提取hIL 15的mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)扩增出cDNA ,构建成真核表达克隆 pcDNA3 IL 15。将pcDNA3 VP1、pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15、pcDNA3 IL 15、pcDNA3和盐水分别肌内注射Balb/c小鼠 ,每次免疫后 6天取血清用微量中和试验测CVB3中和抗体 ,3次免疫后用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察小鼠的生存率。结果 pcDNA3 IL 15重组质粒的目的基因与hIL 15基因序列相同 ;pcDNA3 VP1和pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15能诱导小鼠产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;pcDNA3 VP1+ pcDNA3 IL 15组抗体滴度和生存率均高于 pcDNA3 VP1组。结论本研究成功构建了hIL 15重组质粒 ,该质粒对真核表达重组质粒 pcDNA3

黄芪三萜皂苷对CVB3病毒所致细胞凋亡的保护作用

目的应用分子生物学技术探讨黄芪三萜皂苷(total extract of astragalus,TEA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)致细胞凋亡的保护作用。方法利用CVB3感染Vero细胞建立细胞凋亡模型并使用TEA对模型进行治疗,检测DNA Ladder以了解凋亡细胞DNA断裂情况;通过TUNNEL标记法、Annexin-V/PI染色、Hoechst33258染色观察细胞凋亡程度,比较各组间细胞凋亡的差异。结果 CVB3感染后,Vero细胞DNA的紫外成像呈现阶梯状条带,TEA组可观察到DNA断裂程度降低;TUNNEL检测可看到凋亡存在,病毒组显色较深,细胞凋亡程度较TEA组严重;Annexin-V/PI染色可见病毒组Vero细胞膜呈绿色荧光,细胞核显红色,核凝聚及裂解,并有凋亡小体存在,TEA组细胞状态改善;Hoechst33258染色结果表明,病毒组Vero细胞核显蓝色荧光,可看到凋亡中期核染色质凝聚、边缘化及晚期凋亡小体的典型变化。TEA组细胞状态改善,凋亡细胞数目减少。正常细胞对照组的细胞贴壁状态良好。流式细胞仪检测结果表明,黄芪三萜皂苷能够显著的降低试验组Vero细胞的凋亡率。结论 TEA对CVB3病毒感染的Vero细胞具有一定的保护作用,抑制细胞凋亡,其作用机制尚需做进一步探讨。

CVB3感染通过MCP-1介导病毒性心肌炎小鼠单个核细胞迁移

目的:研究B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染与病毒性心肌炎(VMC)炎症细胞迁移的关系及机制。方法:采用差异贴壁法分离小鼠心肌细胞;趋化试验分析心肌细胞培养上清对VMC小鼠外周血单个核细胞(PMNC)的趋化性;实时定量RT PCR分析心肌细胞MCP 1的表达。结果:( 1)CVB3感染心肌细胞培养上清对VMC小鼠PMNC的趋化性明显增强。( 2 )CVB3感染2小时后MCP 1的表达开始升高,至6小时达到高峰,8小时下降;随着CVB3感染量的增加,MCP 1的表达明显升高。( 3)2 5 μg/ml抗MCP 1抗体处理后,CVB3感染心肌细胞培养上清对VMC小鼠PMNC的趋化性下降5 4 % (P <0 0 1) ;5 μg/ml抗MCP 1抗体处理后,趋化性下降的幅度与2 5 μg/ml抗MCP 1抗体处理的相比未见明显差异(P >0 0 5 )。结论:CVB3感染通过MCP 1介导VMC小鼠单个核细胞迁移。

酵母双杂交筛选与CVB33A相互作用的人心脏蛋白

目的以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等实验将阳性克隆归类,并通过测序、相似性比对分析和回返配合实验去除假阳性蛋白。结果成功构建诱饵质粒pGBKT7-3A,Western Blot结果表明,pGBKT7-3A重组质粒在酵母菌中成功表达3A融合蛋白;经双杂交筛选和回返配合实验,获得了7个相互作用的蛋白,分别为:兰尼碱受体2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信号肽酶2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24protein transport domain containing 4,TMED4),细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),细胞色素c氧化酶亚基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脱氢酶亚基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD)。结论应用酵母双杂交技术,以CVB3 3A为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得7种不同的阳性基因:RyR2、SPCS2、TMED4、COX1、COX3、MYH7和SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能。

FasL在CVB3心肌炎小鼠心肌浸润细胞中表达及其与心肌病变关系

目的探讨Ｆａｓ／Ｆａｓ配体（ｌｉｇａｎｄ，Ｌ）介导的细胞毒效应在小鼠柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）性心肌炎发病中的作用。方法４０只小鼠等分为实验组即ＣＶＢ３感染组及对照组即非感染组；所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏；采用ＲＴ－ＰＣＲ及免疫组化技术检测心肌浸润细胞中ＦａｓＬ的表达，并用原位杂交方法检测心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ；半定量分析ＦａｓＬ抗原及ＣＶＢ３ＲＮＡ水平，并分析ＦａｓＬ表达水平与心肌中ＣＶＢ３复制及病变程度的关系。结果①实验组存活小鼠心肌均可见单核细胞浸润和坏死等病变，而对照组小鼠心肌均未见任何损害；②实验组存活小鼠心肌中均见ＦａｓＬ抗原阳性细胞浸润，而对照组则无；③ＲＴ－ＰＣＲ检测显示实验组ＦａｓｍＲＮＡ阳性率明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；④ＦａｓＬ抗原阳性信号指数与ＣＶＢ３ＲＮＡ杂交阳性信号指数无显著相关（ｒ＝－０．２５，Ｐ＞０．０５），与心肌病变积分呈显著负相关（ｒ＝０．７２，Ｐ＜０．０５）。结论ＣＶＢ３心肌炎小鼠心肌浸润细胞可表达ＦａｓＬ；Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞毒效应可能无抗病毒作用，但可能通过调节细胞介导的细胞毒作用对心肌细胞起一定的保护作用。

CVB3m病毒致低硒低维生素E鼠心肌损伤的发病机制

目的 为深入研究CVB3m病毒感染导致的低Se低VE鼠心肌病变中氧化损伤的作用。方法 1周龄乳鼠给予低Se低VE饲料喂养 ,4周后腹腔接种病毒 ,7d后处死 ,测定全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性以及肝脏中脂质过氧化物 (LPO)含量 ,光镜下观察心肌的病理改变。结果 Se和VE联合缺乏鼠感染CVB3m病毒 7d后 ,小鼠全血GSH -Px活性下降 ,肝脏中LPO水平增加 ,光镜下小鼠心肌病变检出率和严重程度均高于补Se常VE病毒组。

Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用

目的 :构建新型粘膜基因疫苗 ,诱生CVB3VP1特异性粘膜免疫应答 ,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用 ,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础。方法 :抽提CVB3RNA ,以RT PCR扩增得VP1基因 ,插入真核表达载体pcDNA3中 ,构建质粒pcDNA3 VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan DNA基因疫苗。将该质粒转染Hela细胞 ,观察其体外表达情况。以 5 0 μgDNA剂量的Chitosan DNA疫苗滴鼻免疫BALB C小鼠 3次 ,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答 ;隔 4周以 5LD50 活CVB3致死攻击小鼠 ,观察攻击后存活情况。结果 :制备了直径为 80～ 10 0nm的Chitosan DNA复合物颗粒 ,体外转染证实Chitosan DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3 VP1质粒 Lipofectamine的表达水平。该疫苗滴鼻 3次免疫后 ,不仅诱生了高水平的IgG ,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体 ,第 6周抗体P N值分别达 3.5和 3.2。特异性细胞免疫应答研究发现 ,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用 ,并显著高于pcDNA3 VP1和pcDNA3组。CVB3攻击后 ,可保护 33.3%小鼠长期存活 ,而pcDNA3和pcDNA3 VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为 8.5和 10 .8天。病理学研究显示 :Chitosan DNA免疫小鼠心肌组织基本正常 ,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润。结论

酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白

目的从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白VP3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-VP3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-cMyc-VP3融合蛋白自激活,应用酵母双杂交筛选与CVB3VP3相互作用的人心脏蛋白。对阳性候选克隆进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP3与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果诱饵质粒pGBKT7-VP3构建成功,检测到BD-cMyc-VP3融合蛋白在AH109中表达,且诱饵蛋白VP3在酵母中不存在自激活,从人心脏cDNA文库中筛选到10个与CVB3VP3相互作用的蛋白:真核翻译起始因子4A2、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3、肌钙蛋白I3型、平滑肌蛋白3、线粒体乙醛脱氢酶2等。结论本研究成功应用酵母双杂交技术筛选出与CVB3VP3相互作用的10个蛋白。为研究CVB3引起心肌炎和心肌疾病的分子致病机制提供了一些新的线索。

CVB3m对免疫功能低下小鼠心肌损伤的病理观察

目的 观察免疫功能低下小鼠感染 CVB3m后心肌损伤的特点。方法 雄性昆明小鼠随机分成 4组 ,I对照组 ; 照射组 ; 病毒组 ; 照射 +病毒组。照射组 4Gy X-射线全身照射 ;病毒组常规腹腔接种 CVB3m;照射 +病毒组先照射 ,于照射后次日接种 CVB3m。观察各组小鼠接种病毒后第 3、7、14、2 1天心肌光镜改变 ,及第 14天心肌电镜改变。结果 病毒组小鼠注射病毒后第 7天 ,病变最重 ,病毒性心肌炎 (VMC)检出率为 5 7% ,以后逐渐恢复 ;照射 +病毒组第 7天 VMC检出率为 6 4.7% ,第 14天为 87.5 % ,第 2 1天为 10 0 % ,呈逐渐加重趋势。第14天电镜观察 :照射 +病毒组线粒体明显肿胀 ,嵴断裂 ,并伴有严重的空泡变。结论 全身照射条件下小鼠感染CVB3m后 ,VMC检出率增高 。

柴胡提取物对CVB3m感染小鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨柴胡提取物调节心肌细胞凋亡的作用机制.方法以柯萨奇病毒嗜心肌株(CVB3m)腹腔注射诱导BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型,将实验小鼠分为正常对照组、模型组、柴胡提取物组,柴胡提取物组每天予0.2ml/10g的浓度为2mg/ml的柴胡提取物灌胃,正常对照组、模型组予以等量生理盐水灌胃,于造模后第10天处死,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,采用免疫组化、RT-PCR法检测各组小鼠心肌中Fas、Bcl-2、Caspase3表达.结果正常组小鼠心肌未检测到凋亡的心肌细胞,Fas、Bcl-2、Caspase3均有不同程度表达,模型组可见大量心肌细胞凋亡,且Fas、Bcl-2、Caspase3表达均强于对照组(P＜0.01),柴胡提取物组心肌细胞凋亡明显减少,与模型组比较差异显著(P＜0.01),Fas、Caspase3表达明显降低,Bcl-2表达轻度升高.结论柴胡提取物可以抑制病毒性心肌炎时心肌细胞凋亡,明显下调Fas及Caspase3表达,轻微上调Bcl-2表达.

柴胡 黄芩提取物对CVB3m感染小鼠心肌损伤影响的实验研究

目的:观察柴胡、黄芩提取物对CVB3m感染小鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法:通过建立CVB3m腹腔注射诱导的BALB/c小鼠VMC模型,观察柴胡、黄芩提取物对CVB3m感染小鼠发病后症状积分、各组小鼠VMC的发病率和死亡率、心脏重量系数、心肌病理组织学、心脏超微结构变化影响,全面评价柴胡、黄芩提取物对VMC小鼠的整体保护作用.结果:1.感染小鼠多在3～4天后出现病态表现,症状严重者可导致死亡,死亡多发生在3～7天.模型组100%发病,总死亡率70%,平均生存时间为8.9天;柴胡提取物组的发病率与模型组无显著差异,而死亡率明显低于模型组:黄芩提取物组的发病率及死亡率均明显低于模型组.2.病毒感染后,小鼠心脏重量增加,体重下降,心脏重量系数增高,发病症状积分也渐增高,模型组尤为明显,与正常组比较有差异显著(P＜0.05).柴胡提取物组、黄芩提取物组对感染小鼠心肌病理组织学、电镜超微结构改变均有明显改善作用.结论:柴胡、黄芩提取物对感染小鼠有明显的整体保护作用,使小鼠死亡率明显降低,生存质量明显提高,对心肌细胞损伤有明显保护作用.