柯萨奇B_4和B_(3M)病毒重叠感染对低硒昆明鼠T细胞亚群的影响

目的：观察低硒，补硒鼠先后感染ＣＶＢ４，ＣＶＢ３Ｍ两种病毒七天后，小鼠脾脏Ｔ细胞亚群的变化。方法：小鼠先后感染ＣＶＢ４，ＣＶＢ３Ｍ两种病毒七天后，检测脾脏Ｔ细胞亚群细胞数，血清中和抗体及心肌组织病毒滴度。结果：在低硒感染组ＣＤ４，ＣＤ８，ＣＤ３均显著下降，而补硒感染组ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８Ｔ淋巴细胞亚群都明显升高，心肌组织病毒，病变程序及检出率低硒病毒组显著重于补硒组。血清中和抗体效价低硒组显著低于补硒组。结论：硒缺乏可以导致机体免疫功能的低下，而ＣＶＢ４，ＣＶＢ３Ｍ病毒的二重感染导致低硒鼠的免疫功能进一步低下。

柯萨奇B4病毒非结构蛋白P_2C重组质粒的构建

目的:构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。方法:用RT-PCR技术,从柯萨奇B4病毒中钓取非结构蛋白P2CcDNA片段,克隆入PUCm-T载体,转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒。结果:以柯萨奇B4病毒的总RNA为模板,扩增出987bp大小的片段,克隆入PUCm-T载体,用BamHⅠ、HindⅢ双酶切鉴定,与非结构蛋白P2C的PCR扩增产物片段大小一致。结论:成功地构建了柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。

连花清瘟胶囊抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药连花清瘟胶囊进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药连花清瘟胶囊对CVB4有直接灭活作用,并能阻止CVB4的吸附细胞和抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度(IC50)分别为410.00,343.13和410.32μg/mL,治疗指数(TI)分别为2.67,3.20和2.66.其中抗病毒吸附作用最强(P<0.01).在100～1600μg/mL范围内连花清瘟胶囊与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.05),在500μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖大于50%.研究表明中药连花清瘟胶囊能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用表现为直接灭活病毒,阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.

2013～2014年山东省4株柯萨奇B4型分离株遗传分析

尽管柯萨奇病毒B4（Coxsackievirus B4,CVB4）分离率不高,但是在我国引起儿童脑炎的病例屡屡报道。目前人们对CVB4基因组的遗传变异了解并不多,GenBank公共数据库仅仅存储有20几个CVB4全基因组序列,分离自我国的CVB4基因组序列不足10条。本研究对2013~2014年山东省分离的4株CVB4阳性样本进行高通量测序,测得其全基因组序列,利用Mega 5.1对CVB4型毒株全基因组及VP1片段进行系统发生及同源性分析,用RDP3和SimPlot 3.5.1软件进行基因重组分析。结果显示这4株病毒为柯萨奇病毒B4（Coxsackievirus B4,CVB4）型,全基因组序列长度分别为7 372bp、7 389bp、7 389bp和7 391bp,核苷酸同源性为97.1%~99.9%,氨基酸同源性为98.5%~99.9%。与2013年温州CVB4分离株CVB4/P11/2013/China（GenBank登录号：KP289433）分离株同源性最高,核苷酸及氨基酸同源性分别为97.1%~98.3%和98.6%~99.4%。对VP1基因进行系统发育树分析表明,VP1基因可划分成5个基因型,基因型内部序列距离小于15%,而基因型间距离均大于15%。另外,4株CVB4分离株VP1的进化关系较近,同近年来国内其他分离株单成一簇,属于基因型V分支。经RDP3和SimPlot 3.5.1软件分析发现,这四个CVB4分离株均发生了基因重组,分离株SDJN/CHN/2013可能发生了两次基因重组。综上,这4个CVB4分离株基因组高度相似,均位于基因型V分支,且基因组发生了基因重组。