皮损组织Cx26蛋白及信使RNA表达与PV患者PASI评分的关联性

目的分析皮损组织Cx26蛋白含量及信使RNA表达与寻常型银屑病(PV)患者皮损面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评分的关联性。方法2018年7月-2019年7月选取本院PV患者60例作为研究组,另选同期健康体检者32例作为对照组,分析皮损组织Cx26蛋白、信使RNA水平与PV患者PASI评分的关联性。结果研究组Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平均高于对照组(P<0.05);研究组轻度患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平低于中度,中度患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平低于重度(P<0.05);经Spearman分析可知,PASI评分与Cx26蛋白含量(r=0.625)及信使RNA表达水平(r=0.541)存在明显正相关关系(P<0.05)。结论PV患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平与PASI评分密切相关,可作为评判疾病进展、预后指标,为临床治疗提供指导依据。

CX26第86位氨基酸多态性与遗传性聋相关性分析

目的本研究在细胞生物学水平,对第86位氨基酸分别为Thr,Ser,Arg的CX26蛋白的膜定位生物学功能进行鉴定,进而结合临床数据分析该位点不同多态性突变的潜在致聋可能性。方法本研究借助GFP融合型慢病毒表达系统,分别将第86位氨基酸为Thr,Ser,Arg的CX26-GFP融合蛋白在小鼠螺旋神经节细胞中进行表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的细胞膜定位现象。结果第86位氨基酸发生Ser突变后,CX26蛋白仍能够正常定位于细胞膜表面,并形成间隙链接结构,这一表型与(第86位氨基酸为Thr的)野生型CX26蛋白并无明显差异;只有当第86位氨基酸突变为Arg时,导致CX26蛋白功能丧失。结论这些现象表明CX26 T86R可能为潜在致聋突变,而CX26 T86S为不影响蛋白功能的氨基酸多态性突变。该结论与临床筛查经验性结果一致。

CX26不同结构域错义突变体的表达和定位

目的探讨CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理。方法在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),应用重叠区扩增基因拼接法和长引物快速法,构建成与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的载体,野生型CX26-EGFP作对照,脂质体转染HeLa细胞,Westernblot分析蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察各突变体在细胞膜上有无间隙连接斑形成。结果 CX26的9个结构域上的各1个错义突变体在HeLa细胞中均有表达,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vR165W突变体能在细胞膜上表达并形成间隙连接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体在细胞浆中表达,在细胞膜无表达,无间隙连接斑形成。结论 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突变体在细胞内能被转运到细胞膜并形成间隙连接,而p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体失去被转运到细胞膜的功能,不能形成间隙连接。CX26的不同错义突变的致聋机制可能不同,与突变点所在的结构域可能没有相关性。

宫内慢性缺氧对子代大鼠Cx26表达及内耳发育改变的研究

目的探讨SD大鼠孕期宫内慢性缺氧(CIH)后,其子代大鼠(简称为子鼠)内耳Cx26表达水平及内耳发育改变。方法选择12只健康SD孕大鼠为研究对象,并随机分为CIH组及正常组,每组各6只。对CIH组建立CIH孕鼠模型。统计学比较两组子鼠生后不同日龄的体质量差异,并在两组子鼠日龄为56d时获取其内耳标本,分别采用光镜(HE染色)及电镜观察子鼠内耳毛细胞发育改变,采用原位细胞凋亡检测(TUNEL)法检测内耳考蒂器毛细胞凋亡情况。蛋白质印迹法比较子鼠内耳Cx26表达水平改变。结果 1 CIH组新生子鼠生后12h内,体质量显著低于正常组子鼠,且差异有统计学意义[(4.8±0.6)g vs(6.0±0.4)g,t=4.076,P=0.002]。2光镜及电镜检查结果显示,CIH组考蒂器毛细胞缺失,电镜下可见毛细胞凋亡现象;CIH组子鼠耳蜗考蒂器毛细胞、血管纹细胞及螺旋神经节平均相对光密度值,均较正常组显著增高,且差异均有统计学意义[(0.42±0.11)vs(0.26±0.09),t=2.758,P=0.020 0;(0.40±0.14)vs(0.19±0.05),t=3.460,P=0.006 0;(0.45±0.12)vs(0.19±0.03),t=5.149,P=0.000 4]。3 CIH组子鼠内耳Cx26蛋白表达水平较正常组显著降低,且差异有统计学意义[(0.72±0.36)mg/(kg·d)vs(1.07±0.19)mg/(kg·d),t=0.785,P=0.042]。结论 SD大鼠产前发生CIH,可导致胎鼠宫内生长受限、子鼠低出生体质量及听力损伤。