缝隙连接蛋白-43半通道在大鼠脑缺血再灌注损伤中对神经元损伤的影响

目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞CX43半通道对大脑海马区神经元损伤的影响.方法 128只SD雄性大鼠随机数字法分为四组,Sham组,I/R组,I/R＋ Gap26组,I/R＋NS组,每组32只.用TTC染色法检测各组再灌注24 h后大脑梗死体积;用免疫组化及Western印迹的方法检测脑缺血再灌注损伤后各组胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、星形胶质细胞CX43的表达情况;用尼氏染色及免疫组化来观察大脑海马区神经元死亡的情况.结果 与Sham组相比,I/R组大脑梗死体积[（132±7） mm3比0]增加、星形胶质细胞CX43[（2.45±0.56）比（1.15±0.43）]、GFAP蛋白表达[（146±11）比（76 ±5）]增加（P＜0.05）,神经元损伤程度增加;与I/R＋ NS组相比,I/R＋Gap26大脑梗死体积[（76±6）mm3）比（140±10）mm3]减少、星形胶质细胞CX43[（0.43 ±0.16）比（2.15±0.73）]、GFAP蛋白表达[（57±6）比（140±9）]降低（P＜0.05）,神经元损伤程度减轻.结论 阻断CX43半通道可以降低脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞的活化,并且减轻了大脑海马区神经元的损伤.

基于Cx43/Glu/AMPAR通路探讨加减薯蓣丸对血管性痴呆大鼠海马髓鞘损伤的影响

目的:探讨加减薯蓣丸对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马髓鞘损伤的影响及其作用机制研究。方法:选取SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为假手术组,模型组,加减薯蓣丸高、中、低剂量组,每组12只。除假手术组外,其余4组均采用双侧颈动脉结扎改良法进行VD模型制备,造模结束后通过水迷宫筛选造模成功大鼠进行灌胃。加减薯蓣丸高、中、低剂量组灌胃剂量分别为10、5、2.5 g·kg^(-1)·d^(-1),其余组给予等体积生理盐水。28 d灌胃结束后,通过水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色法观察海马区神经元结构,生化检测海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、谷氨酸(Glu)含量变化,免疫荧光检测海马髓鞘碱性蛋白(MBP)、活化星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半通道蛋白43(Cx43)的表达,电镜观察大鼠海马髓鞘结构,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体(AMPAR)、Cx43蛋白表达。结果:与假手术组比较,VD模型大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01),穿越原平台次数和目标象限滞留时间百分比显著减少(P<0.01);海马CA1区神经元结构紊乱;髓鞘板层疏松,边缘模糊不清;海马CA1区神经元TNF-α、IL-6、Glu含量明显增多,以Glu最为显著(P<0.01);AMPAR蛋白表达显著降低(P<0.01),磷酸化(p)-AMPAR、Cx43蛋白表达显著升高(P<0.01);髓鞘MBP蛋白表达显著降低,GFAP与Cx43共标荧光显著增强。与模型组比较,给予加减薯蓣丸干预后,加减薯蓣丸中药组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越原平台次数和目标象限滞留时间百分比明显延长(P<0.05);海马神经元排列较紧密;髓鞘板层更致密,边缘清晰;海马TNF-α、IL-6、Glu含量明显降低,Glu下降最为显著(P<0.01);AMPAR蛋白表达显著升高(P<0.01),p-AMPAR、Cx43蛋白表达显著降低,以高剂量组最为显著(P<0.01);髓鞘MBP蛋白表达显著增加,GFAP与Cx43共标荧光显著降低、高剂量组改善最为明显。结论:加减薯蓣丸能改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制Cx43表达,减少Glu外排,抑制AMPAR介导的炎性反应并减少星形胶质细胞标记物GFAP产生,促进髓鞘MBP蛋白表达,缓解髓鞘损伤有关。