CXC亚家族趋化因子受体-4在急性白血病中的表达及临床意义

目的探讨急性白血病(AL)细胞上CXC亚家族趋化因子受体-4(CXCR4)的表达及临床意义。方法采用四色流式细胞仪检测33例AL患者和7例正常对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)表面CX- CR4的表达情况,并分析其与临床表现及疗效的关系。结果AL患者CXCR4的表达水平明显高于正常对照组(P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达又高于急性髓细胞白血病(AML)(P<0.01)。髓外浸润组CXCR4表达高于无髓外浸润组(P<0.05)。CXCR4的高表达组髓外浸润发生率高于CXCR4低表达组(P<0.05)。CXCR4的高表达且外周血白细胞(WBC)增高组髓外浸润的发生率最高,CXCR4低表达且WBC不增高髓外浸润组的发生率最低(P<0.05)。化疗敏感组CXCR4的表达低于耐药组(P<0.05)。结论AL患者的BMMNC存在着CXCR4的高表达,不同类型的AL患者CXCR4的表达存在差异,ALL表达高于AML。AL患者CXCR4高表达且WBC增高预示髓外浸润的可能性大。AL患者CXCR4的高表达预示白血病细胞对化疗不敏感,是判断预后的指标之一。

趋化因子CXC亚家族受体4在食管鳞癌组织中表达情况及预后价值分析

目的 探索趋化因子CXC亚家族受体4(CXCR4)在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达情况及其与ESCC患者临床病理特征和预后的相关性。方法 本研究为回顾性队列研究,抽取蚌埠医学院第一附属医院2018年1月至12月行食管癌根治术的ESCC患者术后切片共107例作为研究组,选取其中21例患者的癌旁组织作为对照组。采用免疫组织化学染色测定两组CXCR4表达情况,分析107例ESCC患者的临床病历资料,研究CXCR4表达情况与患者临床病理特征和预后的关系。结果 研究组CXCR4阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、分化程度、侵犯深度、淋巴结转移情况ESCC患者癌组织中CXCR4表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CXCR4阳性表达患者总生存期及无病生存期低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,肿瘤侵犯深度、分化程度、淋巴结转移情况及CXCR4表达水平是ESCC患者总生存期、无病生存期的独立影响因素(P<0.05)。结论 ESCC患者癌组织中CXCR4阳性表达率升高,CXCR4高表达可能促进ESCC对食管的侵犯及淋巴结转移。CXCR4在ESCC中的高表达可能与患者预后较差有关。

西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响

目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组(0.5μmol/L)、西格列汀中浓度组(1μmol/L)、西格列汀高浓度组(2μmol/L)、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂(AMD3100)组(2μmol/L+10μg/mL)。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLSCs中成骨分化相关基因Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及SDF-1和CXCR4 mRNA表达;Western blot检测hPDLSCs中SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与空白组比较,对照组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,西格列汀低、中、高浓度组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平依次升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次降低(P<0.05);AMD3100可部分逆转高浓度西格列汀对LPS诱导的hPDLSCs的作用效果(P<0.05)。结论 西格列汀可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路促进LPS诱导的炎症微环境下hPDLSCs的增殖和成骨分化,抑制hPDLSCs凋亡和炎症反应。

CXC亚家族趋化因子配体10-受体3/CC亚家族趋化因子配体17-受体4轴在口腔扁平苔藓发病机制中的交互作用

目的探讨CXC亚家族趋化因子配体10(CXCL10)-CXC亚家族趋化因子受体3(CXCR3)、CC亚家族趋化因子配体17(CCL17)-CC亚家族趋化因子受体4(CCR4)两轴间在口腔扁平苔藓(OLP)发病机制中的交互关系。方法收集OLP患者(非糜烂、糜烂型)和健康对照者外周血,分离T细胞并鉴定纯度,分为空白(不加拮抗剂)、拮抗CXCR3(加入CXCR3拮抗剂)、拮抗CCR4(加入CCR4拮抗剂)三个组与T细胞共培养,流式细胞术检测各组受体CXCR3、CCR4表达,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法检测相应配体CXCL10、CCL17的表达。结果T细胞纯度鉴定均>95%且各组间的差异无统计学意义(P>0.05)。受体表达结果显示,OLP中拮抗CXCR3和CCR4组与空白组相比,拮抗CXCR3组的CXCR3和CCR4表达均下调(P>0.05);拮抗CCR4组的CCR4表达显著下调(P<0.05),CXCR3表达上调(P>0.05)。配体表达结果示,OLP中拮抗组与空白组相比,拮抗CXCR3组的CXCL10表达显著下调(P<0.05),CCL17表达也下调(P>0.05);拮抗CCR4组的CCL17表达显著下调(P<0.05),CXCL10表达上调(P>0.05)。健康对照者受体和配体趋势与OLP一致,但拮抗组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验结果提示两轴间在OLP的发病机制中存在相关互作,且可能在OLP的发生发展过程中发挥不同作用。

基质细胞趋化因子-1对人牙周膜干细胞趋化因子受体——CXC亚家族受体4表达的影响研究

目的:证实人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)表达趋化因子受体——CXC亚家族受体4(cysteine X cysteine receptor 4,CXCR4)及探究趋化因子基质细胞趋化因子-1(stromalcell-derived factor1,SDF-1)和阻断剂AMD3100(商品名:普乐沙福)对CXCR4表达的影响,从而为探究牙周膜干细胞生物学效应的影响提供理论基础。方法:采用消化组织块法联合有限稀释法分离纯化得到hPDLSCs,取第3代hPDLSCs随机分为3组:阴性对照组、SDF-1组(200μg/L SDF-1),SDF-1+AMD3100组(200μg/L SDF-1+10 mg/L AMD3100)。利用Western blot检测CXCR4在hPDLSCs上的表达及在SDF-1、AMD3100作用下CXCR4表达的变化。结果:1.筛选后的hPDLSCs可被诱导分化为成骨细胞和成脂细胞,证实其具有多向分化潜能;利用流式细胞仪检测其细胞表型鉴定其符合牙周膜干细胞的免疫表型。2.Western blot检测结果显示hPDLSCs上表达CXCR4,且应用SDF-1后上调CXCR4的表达,SDF-1+AMD3100组无明显变化。结论:1.hPDLSCs可从新鲜离体牙的牙周膜中培养获得,经有限稀释法纯化后鉴定为间充质来源。2.hPDLSCs上表达CXCR4,SDF-1通过上调hPDLSCs上CXCR4的表达,AMD3100可阻断SDF-1与其受体CXCR4结合。

基质细胞衍生因子-1α/趋化因子CXC受体4诱导内皮祖细胞血管新生促进脑卒中的神经康复机制

目的探讨基质细胞衍生因子-1α/趋化因子CXC受体4(SDF-1α/CXCR4)诱导内皮祖细胞(EPCs)血管新生在脑卒中神经康复中的作用。方法采用流式细胞仪和ELISA法分析EPCs对氧糖剥夺(OGD)诱导人脑微血管内皮细胞(HBMECs)凋亡、SDF-1α水平的影响。大鼠建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别采用EPCs、缺氧内皮细胞条件培养液预处理EPCs(HBMECs-pEPCs)或AMD3100(CXCR4拮抗剂)进行治疗。在第6周时通过Morris水迷宫试验评估大鼠认知功能,和第7周时采用免疫荧光染色观察大脑皮层血管生成情况。结果EPCs处理降低OGD诱导的HBMECs凋亡率(P<0.05),并增加血管环数(P<0.05)。OGD-HBMECs诱导EPCs中SDF-1α表达增加(P<0.05)。CXCR4基因敲除减轻了EPCs对OGD-HBMECs的抗凋亡作用(P<0.05)。MCAO大鼠在建模后第4天时大脑皮层中EPCs、Claudin5阳性血管数量和SDF-1α蛋白水平明显增加(P<0.05)。与EPCs治疗相比,HBMECs-pEPCs治疗能显著增加大鼠MCAO模型的血管密度(P<0.05),并改善学习记忆障碍,而AMD3100逆转了HBMECs-pEPCs的治疗作用。结论HBMECs-pEPCs通过SDF-1α/CXCR4轴有效地促进大鼠MCAO模型神经血管重塑和认知功能恢复。

加味四君子汤对lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子-1α基因CXC型趋化因子受体4基因及D-木糖的影响

目的探讨加味四君子汤对肺癌小鼠可能作用机制及肺癌对小鼠消化系统的影响。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,模型成功建立后,加味四君子汤灌胃14 d,第15天脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织采用Realtime PCR方法检测缺氧诱导因子-1α基因(HIF-1α)、CXC型趋化因子受体4基因(CXCR4)的表达;取血清采用间苯三酚法检测D-木糖。结果加味四君子汤干预lewis肺癌小鼠后,肺癌健脾组与肺癌组的HIF-1α、CXCR4mRNA有统计学意义(P<0.01);肺癌组和肺癌健脾组与正常组相比均有统计学意义(P<0.01)。结论加味四君子汤对肺癌有抑制作用,肺癌能降低小鼠消化吸收功能。

分泌型卷曲相关蛋白5、CXC趋化因子受体4、8-异构前列腺素水平与支气管哮喘病儿气道炎症、气道重塑的关系

目的探究支气管哮喘病儿血清分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)、8-异构前列腺素(8-iso PG)水平与气道炎症、气道重塑的关系及联合评估病情程度的价值。方法选取2018年1月至2020年8月攀枝花市中心医院收治的支气管哮喘病儿113例作为研究对象,按照病情程度分为轻度组、中度组、重度组,比较三组一般资料、血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG水平、气道炎症指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性人基质裂解素2(sST2)、白细胞介素-17(IL-17)]、气道重塑指标[痰液转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、骨桥蛋白(OPN)],分析血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG与气道炎症、气道重塑指标及病情程度的关系,评价血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG对病情程度的评估价值。结果ACT评分、FEV_(1)占预估值、PEF占预估值、FEV_(1)/FVC:重度组<中度组<轻度组(P<0.05);重度组血清CXCR4、8-iso PG水平分别为(10.69±3.56)μg/L、(37.58±12.14)ng/L,高于中度组[(5.34±1.77)μg/L、(24.19±8.06)ng/L]和轻度组[(2.16±0.72)μg/L、(16.32±5.40)ng/L],且中度组血清CXCR4、8-iso PG高于轻度组(P<0.05);重度组血清SFRP5为(6.05±1.93)μg/L,低于中度组[(8.56±2.05)μg/L]、轻度组[(10.63±2.11)μg/L],且中度组血清SFRP5低于轻度组(P<0.05);血清TNF-α、sST2、IL-17、TGF-β1、MMP-9、OPN:重度组>中度组>轻度组(P<0.05);在调整ACT评分、FEV_(1)占预估值、PEF占预估值、FEV_(1)/FVC、气道炎症、气道重塑指标等其他因素后,血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG仍与支气管哮喘病儿病情程度显著关联(P<0.05);ROC分析显示:血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG及其联合应用对支气管哮喘病儿病情程度的评估价值,AUC(95%CI)分别为0.72(0.51,0.94)、0.81(0.69,0.93)、0.75(0.51,0.99)、0.87(0.83,0.92)。结论血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG可通过调控支气管哮喘气道炎症、气道重塑,影响病情程度,联合检测三者水平有望为病情程度的评估提供一种新的方法。

趋化因子SDF-1及其受体CXCR4对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响

目的探讨SDF-1/CXCR4生物轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响。方法采用MTT法检测细胞的增殖能力。通过趋化实验观察细胞的侵袭迁移能力。结果口腔鳞状细胞癌细胞在SDF-1作用下增殖反应明显增强,CXCR4抗体可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。趋化实验显示SDF-1可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移,经50μg/m1CXCR4抗体孵育后,SDF-1介导Tca8113细胞的这种侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论 CXCR 4/SDF-1受体配体系统可介导口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移,在癌细胞向颈部淋巴结转移中发挥着重要作用。干扰SDF-1/CXCR4的相互作用有可能成为治疗口腔鳞状细胞癌的新方法。

CXC趋化因子受体4及基质细胞衍生因子-1在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的探究CXC趋化因子受体4(CXCR4)及其配体趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在成釉细胞瘤(AB)中的表达及意义。方法实时定量PCR、Western blotting及免疫组化方法检测2007年至2012年中国医科大学口腔医院病理科30例AB,10例正常口腔黏膜(NOM)冻存组织样本以及80例AB及10例口腔鳞状细胞癌(OSCC)存档蜡块中CXCR4及SDF-1 mRNA及蛋白表达情况,并进行统计分析。结果实时定量PCR结果显示,CXCR4及SDF-1在AB中相对表达量均高于NOM,差异有统计学意义(均P<0.05);Western blotting结果显示,AB中CXCR4及SDF-1蛋白表达明显高于NOM,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,AB中CXCR4表达呈明显阳性(70/80),主要在细胞质中表达,NOM表达呈阴性;SDF-1表达呈明显阳性(68/80),主要定位于细胞质,NOM表达呈阴性。结论AB中CXCR4及其配体表达明显高于正常口腔黏膜,可能参与介导AB侵袭复发等异常生物学行为。

肾癌转移相关基因CXC趋化因子受体4核定位信号的结构分析与功能鉴定

目的分析肾癌转移相关基因CXC趋化因子受体4(CXCR4)核定位信号序列的组成结构,并鉴定其功能。方法首先通过生物信息学方法检索Ensembl和PSORTⅡPrediction在线数据库,分析CXCR4核定位信号序列的组成和结构。然后根据生物信息学分析结果,通过重叠延伸聚合酶链反应和基因克隆技术构建含有CXCR4核定位信号序列突变基因与绿色荧光蛋白基因的融合基因质粒,并将其转染入肾癌细胞表达,在荧光和激光共聚焦显微镜下观察CXCR4核定位信号序列突变体蛋白的亚细胞分布情况。结果 CXCR4蛋白的核定位信号序列为其第146~149位氨基酸,组成为精氨酸-脯氨酸-精氨酸-赖氨酸(RPRK)。荧光和激光共聚焦显微镜下,核定位信号序列突变的CXCR4蛋白分布于肾癌细胞膜和细胞质,不再分布于细胞核,而野生型CXCR4蛋白除细胞膜和细胞质外,仍可分布于肾癌细胞核。结论 CXCR4蛋白的核定位信号序列确为其第146~149位氨基酸,该突变序列中任一碱性氨基酸位点均可导致CXCR4核分布能力丧失。

缺血再灌注后关节软骨中CXC趋化因子受体4和基质金属蛋白酶-9的表达

目的:观察大鼠肢体缺血再灌注后关节软骨中CXC趋化因子受体4和基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinase,MMP-9)的表达,探讨其在关节软骨损伤中的意义。方法:采用Wistar大鼠股动脉夹闭法建立肢体缺血再灌注损伤模型,将40只大鼠随机分成正常对照组(NG)、单纯缺血组(IG)、缺血再灌注1周组(IR1G)、缺血再灌注3周组(IR3G)和缺血再灌注8周组(IR8G),分别在术后1,3,8周处死实验动物,进行大体标本观察,用蕃红O染色观察膝关节软骨蛋白多糖(proteoglycan,PG)的变化,用免疫组织化学S-P法分别测定CXCR4和MMP-9在关节软骨中不同时相的表达。结果:缺血再灌注后,随时间延长,关节软骨中的蛋白多糖含量逐渐降低,CXCR4、MMP-9的表达均明显增强,但在8周时降低(P<0.01)。结论:CXCR4联合MMP-9的表达升高可能是导致缺血再灌注后关节软骨损伤的重要因素之一。

CXC类趋化因子受体4在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨CXC类趋化因子受体(CXCR)4在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测OSCC组织中CXCR4的表达。结果 OSCC组织中CXCR4的阳性表达率明显高于正常对照组。CXCR4的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期和淋巴结转移密切相关,而与性别、年龄和肿瘤大小无关。结论 CXCR4的表达可能在OSCC的发生、发展中起着一定的作用。

布比他丁促进大鼠骨髓间充质干细胞CXC型趋化因子受体4膜向分布及迁移能力的研究

目的:研究药物布比他丁(Blebbistatin)能否调节大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)表面CXC型趋化因子受体4(CXC chemokine receptor type 4,CXCR4)向胞膜分布,从而促进大鼠BMSCs的迁移。方法:分离培养SD大鼠BMSCs,Blebbistatin处理细胞15、30、45、60min,设置对照组;流式细胞术测定细胞表面CXCR4表达;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;测定成骨诱导前期培养基碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,待诱导完成进行茜素红染色。结果:处理组细胞表面CXCR4表达率明显升高(P<0.01),且呈时间依赖性;15、30和60min组细胞迁移效率升高(P<0.01)。成骨诱导期间各组间ALP活性比较差异无统计学意义,诱导至21d时各组均形成大量钙化结节。结论:Blebbistatin能促进BMSCs表面CXCR4向胞膜分布,并能提高BMSCs的迁移效率。

青藤碱调节CXCR4-STAT3轴对卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响

目的:探讨青藤碱(Sinomenine)对卵巢癌细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响及作用机制。方法:使用不同浓度(0、0.25、0.50、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)的青藤碱分别处理A2780细胞24、48 h, CCK-8法检测细胞存活率。将A2780细胞随机分为对照(Control)组、CXCR4激活剂基质细胞衍生因子-1(SDF-1)(SDF-1,100 ng/mL)组、CXCR4抑制剂普乐沙福(Plerixafor, 500 ng/mL)组、青藤碱(Sinomenine, 1.0 mmol/L)组、Sinomenine+SDF-1(1.0 mmol/L Sinomenine+100 ng/mL SDF-1)组,分别检测A2780细胞增殖、迁移与侵袭,体外血管生成拟态形成实验检测青藤碱对血管生成拟态的影响,Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮细胞激酶(EphA2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-2、CXC趋化因子受体4(CXCR4)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。结果:青藤碱可有效抑制A2780细胞增殖,且呈浓度依赖性;青藤碱可显著抑制A2780细胞迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并下调血管生成拟态标志蛋白VEGF、EphA2、MMP-9、MMP-2表达,抑制CXCR4、p-STAT3表达(P<0.05),青藤碱的这一抑制作用可被CXCR4激活剂减弱。结论:青藤碱可能通过抑制CXCR4-STAT3轴,抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成。

SDF-1及其受体CXCR4在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义

目的探讨趋化因子SDF-1及其受体CXCR4在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测10例正常卵巢上皮组织、21例卵巢良性肿瘤、19例交界性卵巢肿瘤、30例卵巢癌原发灶和11例相应盆腔腹膜转移灶组织中SDF-1和CXCR4蛋白表达情况。结果正常卵巢上皮组织SDF-1和CXCR4表达阴性,卵巢良性肿瘤低表达SDF-1(9.52%),CXCR4表达阴性,与正常卵巢及良性卵巢肿瘤相比,交界性卵巢肿瘤、卵巢癌原发灶及转移灶表达较高水平的SDF-1与CXCR4(63.16%、93.33%、90.91%;47.37%、63.33%、63.64%)。交界性卵巢肿瘤中SDF-1和CXCR4表达无显著相关性(P=0.460);而卵巢癌原发灶中SDF-1和CXCR4表达呈正相关(P<0.05);SDF-1的表达与卵巢癌患者的临床分期、组织学分级无显著相关性(P>0.05),而与患者有无腹水有一定相关性(P<0.05),CXCR4的表达与卵巢癌患者的临床分期、组织学分级及患者有无腹水无显著相关性(P>0.05)。结论SDF-1/CXCR4的表达与细胞的恶性转化有关,可能参与了卵巢恶性肿瘤的发生、发展、侵袭与转移。

CXC趋化因子配体10在癫痫大鼠和细胞炎症反应中的作用及机制研究

目的:探究CXC趋化因子配体10(CXCL10)在癫痫大鼠和细胞炎症反应中的作用及机制。方法:构建大鼠癫痫模型,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测对照组和模型组大鼠中CXCL10表达。无镁细胞液处理SH-SY5Y细胞建立癫痫细胞模型(SH-SY5Y组),采用qRT-PCR检测空白组和SH-SY5Y组中CXCL10表达。用pcDNA3.1-CXCL10或si-CXCL10转染SH-SY5Y细胞,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测pcDNA3.1组、pcDNA3.1-CXCL10组、si-RNA组和si-CXCL10组中炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-8]水平。SH-SY5Y细胞通过转染si-CXCL10或经Toll样受体4(TLR4)抑制剂(TAK-242)和激动剂脂多糖(LPS)处理,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测si-RNA组、si-CXCL10组、si-CXCL10+TAK-242组和si-CXCL10+LPS组中TLR4、NF-κB p-p65/p65蛋白表达水平。结果:模型组大鼠CXCL10 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05)。SH-5Y5Y组细胞CXCL10 mRNA水平高于空白组(P<0.05)。过表达CXCL10升高SH-SY5Y细胞CXCL10 mRNA表达水平,而抑制CXCL10降低了SH-SY5Y细胞CXCL10 mRNA表达水平(均P<0.05)。此外,过表达CXCL10使SH-SY5Y细胞培养液中TNF-α、IL-6和IL-8水平显著上升,si-CXCL10使SH-SY5Y细胞TNF-α、IL-6和IL-8水平显著下降(均P<0.05)。过表达CXCL10促进了TLR4和NF-κB p-p65/p65蛋白表达,而敲低CXCL10可抑制TLR4和NF-κB p-p65/p65蛋白水平(均P<0.05)。与si-CXCL10组比较,经LPS处理的癫痫模型细胞TNF-α、IL-6、IL-8水平上升,而经TAK-242处理的癫痫模型细胞TNF-α、IL-6、IL-8水平显著下降(均P<0.05)。结论:CXCL10在癫痫大鼠和细胞中相对表达量均升高,沉默CXCL10可通过TLR4/NF-κB信号通路抑制炎性细胞因子表达,在癫痫炎症反应过程中发挥重要作用。

淫羊藿苷调节SDF-1/CXCR4信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的探讨淫羊藿苷调节基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC型趋化因子受体4(CXCR4)信号轴对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法将从PCOS模型组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞分为PCOS组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、重组大鼠SDF-1蛋白(Rr-SDF-1)组、淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组,另取从正常对照组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞作为对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测卵巢颗粒细胞上清液中卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平;CCK-8法、EdU染色检测颗粒细胞增殖;流式细胞术检测颗粒细胞凋亡;Western blot检测颗粒细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果与对照组比较,PCOS组FSH水平、光密度(OD)_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。与PCOS组比较,淫羊藿苷低、中、高剂量组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率均依次升高,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平均依次降低;Rr-SDF-1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。与淫羊藿苷高剂量组比较,淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路抑制PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

甲基莲心碱调节SDF-1/CXCR4信号通路对糖尿病肾病的影响

目的·探讨甲基莲心碱(neferine,Nef)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织的作用及其相关机制。方法·采用高脂饲料喂食联合腹腔注射链脲佐菌素的方法构建DN模型大鼠,并将造模成功的大鼠随机分为DN组、Nef(低、中、高)剂量组、Nef高剂量+通路拮抗剂(AMD3100)组,每组10只。同时,选10只普通大鼠作为正常组。检测6组大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、24 h尿蛋白、血清糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平及肾指数。分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色、马松(Masson)染色观察6组大鼠的肾组织的病理变化。采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,分别采用水溶性四氮唑(water soluble tetrazolium,WST-1)法、钼酸铵法检测肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性。分别采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测肾组织中基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的mRNA以及蛋白表达。采用高糖(30 mmol/L葡萄糖)诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以建立DN细胞模型。将该细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+Nef(低、中、高)剂量组(即HG+Nef-L、M、H组)、HG+Nef-H+AMD3100组。分别采用WST-1法、钼酸铵法检测模型细胞中SOD、CAT活性,采用TBA法检测MDA含量,分别采用qPCR、Western blotting检测SDF-1、CXCR4的mRNA及蛋白表达,采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。结果·与DN组比较,Nef(低、中、高)剂量组和Nef高剂量+AMD3100组大鼠的FBG、24 h尿蛋白、HbA1c、Scr、BUN水平以及肾指数、MDA水平均较低,SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达以及SOD、CAT活性均较高(均P<0.05),肾组织病理损伤、纤维化程度有所减轻,且均呈剂量依赖性;AMD3100能减弱高剂量Nef对DN大鼠的肾保护作用。与HG组比较,HG+Nef-L、M、H组NRK-52E细胞的活力,SOD、CAT活性,SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达均较高,MDA含量及凋亡率均较低(均P<0.05);AMD3100可逆转Nef-H对NRK-52E细胞损伤的保护作用。结论·Nef可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路来控制DN大鼠的血糖水平并提高其抗氧化能力,从而发挥肾保护作用。