N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性的影响

目的探究N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXC趋化因子配体(CXCL)8-CXC趋化因子受体(CXCR)1/2及瞬时受体电位通道蛋白(TRP)V1神经元敏感性的影响。方法选取80只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组、模型(MO)组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、急支糖浆(ES)组,每组20只,对MO组、NAC组、ES组进行支气管哮喘建模,建模成功后,NAC组、ES组每天分别于腹腔内注射2 ml N-乙酰半胱氨酸注射液、急支糖浆灌胃10 g/kg剂量,NO组、MO组同期灌胃同体积生理盐水,通过苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹检测血清及肺组织中CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达,并分析N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘大鼠CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性。结果与NO组相比,MO组咳嗽次数明显增加(P<0.05),而NAC组、ES组与MO组相比,其咳嗽次数明显降低(P<0.05),且NAC组比ES组降低明显(P<0.05);与NO组相比,MO组细支气管管腔、肺泡腔内可见渗出液、脱落的上皮细胞等,远端肺泡可见局部肺不张及周围肺大泡,且肺间质明显增厚,炎性细胞浸润明显,而与MO组比较,ES组、NAC组症状明显减少,部分肺间质的组织结构趋向正常,部分肺泡轻度扩张,且NAC组比ES组明显降低(P<0.05);与NO组对比,MO组CXCL8、CXCR1、CXCR2、TRPV1含量、mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.05),NAC组、ES组与MO组相比均显著降低(P<0.05),且NAC组比ES组明显降低(P<0.05)。结论N-乙酰半胱氨酸可以显著降低咳嗽次数,减少支气管哮喘症状,可使CXCL8-CXCR1/2及TRPV1神经元敏感性显著降低。

黄连素抑制小鼠CXCL-12/CXCR-4/PI3K/AKT/NF-κB通路防治NASH的作用研究

[目的]研究非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠CXC趋化因子配体-12(CXC chemokine ligand-12,CXCL-12)/CXC趋化因子受体-4(CXC chemokine receptor-4,CXCR-4)/磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(acid threonine protein kinase,AKT)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的激活情况以及黄连素对该信号通路的影响,阐明NASH炎症反应的可能机制及黄连素的作用。[方法] 8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠随机分成模型组、黄连素组和对照组。采用高脂高胆固醇饲料连续喂养12周建立NASH模型,第6周开始黄连素组予黄连素200mg(/kg·d)灌胃6周,第12周处死各组小鼠,检测体质量、ALT、AST、TC、TG水平;HE染色评价肝组织病理学改变;免疫组化检测小鼠肝组织CXCL-12、CXCR-4、pAKT、pNF-κB表达水平;Real-time PCR和Western blot分别检测小鼠肝脏组织CXCL-12、CXCR-4、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。[结果]黄连素组ALT、AST、TC明显低于模型组(P<0.05);HE染色显示,黄连素组小鼠肝细胞气球样变、小叶内炎症较模型组明显减轻(P<0.05),NAS总分也低于模型组(P<0.05);免疫组化显示黄连素组小鼠的CXCL-12、CXCR-4、p AKT、p NF-κB阳性表达弱于模型组;CXCL-12、CXCR-4、PI3K、AKT、NF-κB mRNA以及CXCL-12、CXCR-4、p AKT、pNF-κB蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05)。[结论]CXCL-12/CXCR-4/PI3K/AKT/NF-κB信号通路在小鼠NASH发生中发挥作用;黄连素能明显抑制NASH小鼠肝组织内CXCL-12/CXCR-4/PI3K/AKT/NF-κB信号通路的激活并能降低转氨酶和血脂,减轻肝脏内脂质沉积和炎症反应。

母体血清CXCL12、CXCR4、VEGF及PLGF的水平与子痫前期及其合并FGR的相关性研究

目的通过检测孕产妇血清中CXC类趋化因子配体12(CXCL12)、CXC类趋化因子受体4(CXCR4)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)的水平,探索CXCL12、CXCR4联合VEGF、PLGF在胎盘形成过程中所起的作用,进一步探讨与子痫前期(PE)及其合并胎儿生长受限(FGR)发病的关系。方法选择2018年5月至2019年5月在安徽省妇幼保健院住院分娩的孕妇为研究对象。诊断子痫前期患者103例为子痫前期组(PE组),其中子痫前期不合并胎儿生长受限患者66例(PEFGR组),子病前期合并胎儿生长受限患者37例(PE+FGR组),选择同时期住院分娩的正常产妇51例为正常对照组(N组)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测母体血清中CXCL12、CXCR4、VEGF及PLGF的水平,并进行统计学分析。结果PE组母体血清中CXCL12、CXCR4、VEGF、PLGF的水平均较N组下降,差异均具有统计学意义(t=12.9、22.2、15.9、10.3,均P<0.05)。N组、PE-FGR组、PE+FGR组母体血清中CXCL12、CXCR4、VEGF、PLGF的水平差异均具有统计学意义(F=113.0、339.9、149.5、64.1,均P<0.05),进一步两两比较后发现,N组、PE-FGR组、PE+FGR组的四个血清指标均依次下降,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论CXCL12、CXCR4联合VEGF、PLGF在胎盘形成过程中起到重要作用;母体血清中CXCL12、CXCR4、VEGF、PLGF水平的降低可能与子痫前期及其合并FGR的发病有着重要关系。

系统性红斑狼疮患者血清中趋化因子CXCL家族的含量检测及其临床意义

目的:研究系统性红斑狼疮患者血清中趋化因子CXCL家族的含量及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法检测SLE患者和健康体检者血清中CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCL16的含量,采用流式细胞术检测外周血中CXCR3、CXCR5、CXCR6的含量,进一步分析不同活动程度以及临床特征SLE患者血清指标的差异。结果:病理组血清中CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCL16的含量及外周血中CD3+CD4+CXCR3+T细胞、CD3+CD4+CXCR5+T细胞、CD3+CD4+CXCR6+T细胞的含量高于对照组;SLE活动组CXCLs和CXCRs的表达量高于SLE非活动组;蝶形红斑以及口腔溃疡SLE患者血清中CXCL9、CXCL10、CXCL11含量明显升高,贫血和蛋白尿SLE患者血清中CXCL13、CXCL16含量升高,关节炎SLE患者血清中CXCL10、CXCL11、CXCL16含量升高。结论:系统性红斑狼疮患者血清中趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCL16的含量明显升高,并且与疾病的活动程度以及临床特征密切相关。

慢病毒载体介导的CXCR 7-shRNA联合重楼总皂苷对胃癌细胞SGC 7901特异性靶向干预的实验研究

目的探讨慢病毒介导的CXCR7-shRNA转染人胃癌细胞株SGC7901后重楼总皂苷干预对CXCR7蛋白表达的影响。方法设计并合成CXCR7的3条shRNA序列及1条阴性对照序列,与pSilencerTM 4.1系统合成构建重组慢病毒载体,转染HEK293T细胞包装病毒并检测滴度;将3种重组慢病毒载体及阴性对照分别感染人胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测用药前后CXCR7 mRNA的表达情况,测定沉默效率,筛选沉默效率最高的一组CXCR7-shRNA作为后续实验表达载体;MTT法检测转染CXCR7-shRNA对SGC7901细胞的增殖的影响以及重楼总皂苷干预后的影响;Western blot检测转染CXCR7-shRNA后SGC7901细胞蛋白表达情况以及重楼总皂苷干预的影响。结果测序证实3种慢病毒载体及1组阴性对照载体均包装成功,滴度分别4.9×108pfu/mL、3.6×108pfu/mL、5.2×108pfu/mL和2.0×108pfu/mL;3组慢病毒载体转染SGC7901细胞后,CXCR7 mRNA的表达量均较阴性对照组显著降低(P<0.05),其中CXCR7-shRNA-1组和重楼总皂苷组对CXCR7的抑制率显著高于其他2组(P<0.05);CXCR7-shRNA-1转染SGC7901后,肿瘤细胞的生长增殖下降,与其他组相比有显著性差异(P<0.05);CXCR7-shRNA-1转染SGC7901后,与空病毒载体组、空白组相比,CXCR7蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论成功构建了3种CXCR7-shRNA慢病毒表达载体。转染SGC7901细胞以及采用重楼总皂苷处理均可有效下调CXCR7 mRNA和蛋白的表达水平,并能够抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭。因此可认为CXCR7基因在该机制中起到了至关重要的作用,为我们进一步研究以CXCR7/CXCL12生物学轴为靶点的胃癌基因治疗奠定了基础。