人CXCR3B基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究

目的:克隆人CXCR3B基因,并构建含有该目的基因的真核表达载体,获得稳定表达人CXCR3B分子的基因转染细胞株L929-huCXCR3B。方法:采用PCR方法从pMD19-T/huCXCR3A质粒中扩增人CXCR3B基因,通过双酶切装入真核表达载体pIRES2-EGFP中;脂质体法转染L929细胞,G418加压筛选阳性克隆;分别用RT-PCR方法与免疫荧光技术分析阳性克隆中人CXCR3B在mRNA和蛋白水平的表达。MTT分析基因转染细胞株L929-huCXCR3B在Mig(monokineinduced by IFN-γ,IFN-γ诱导的单核因子)作用下的增殖能力。结果:成功克隆了人CXCR3B基因并构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/huCXCR3B,转染该载体后获得了稳定表达人CXCR3B的基因转染细胞株L929-huCXCR3B,膜表面CX-CR3B分子的阳性表达率为93%。该基因转染细胞与其配体Mig共培养24、48及72 h,抑制率分别为41.44%、44.01%和24.80%。结论:L929-huCXCR3B细胞株的建立为研究CXCR3B信号转导及制备相应的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。

CXCR3B在结肠癌组织中的表达及对结肠癌LOVO细胞株迁移能力的影响

目的探讨趋化因子受体CXCR3B(CXC型趋化因子受体3变体B)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌LOVO细胞株迁移能力的影响。方法常规收取结直肠癌及癌旁组织标本,用免疫组织化学(IHC)染色方法检测CXCR3B的表达;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测正常肠上皮细胞株NCM460及结肠癌细胞株LOVO中的CXCR3B m RNA表达,过表达CXCR3B-RFP慢病毒感染LOVO细胞株,划痕实验及transwell实验检测LOVO细胞株的迁移变化。结果免疫组织化学结果显示在结直肠癌旁组织中CXCR3B的表达显著高于癌组织(P<0.001);NCM460细胞中CXCR3B m RNA表达高于LOVO细胞表达(P<0.01)。划痕实验及transwell迁移实验显示过表达CXCR3B组(LOVO-CXCR3B)细胞迁移较阴性对照组(LOVO-NC)低(P<0.01)。结论人结直肠癌组织中CXCR3B低表达,过表达CXCR3B可抑制结肠癌细胞株LOVO的迁移。

CXCL10及其受体参与子宫内膜异位症发病的免疫机制初探

目的:通过研究趋化因子配体10(CXCL10)及其受体(CXCR3)的表达,探讨其参与子宫内膜异位症(EM)发病的免疫机制。方法:分别运用ELISA法及化学发光分析法检测EM患者未经手术治疗组(76例)、经手术治疗组(10例)及正常体检人员组(76例)血清标本中CXCL10及癌胚抗原CA125浓度;分离并体外活化EM患者组(10例)及正常体检人员组(10例)外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测活化后PBMC培养上清液中CXCL10的分泌表达水平、流式细胞术检测活化PBMC的表面分化抗原3(CD3)及CXCR3表达、RT-PCR检测CX-CR3基因亚群(CXCR3A及CXCR3B)的表达;对结果进行统计分析。结果:血清CXCL10水平,EM患者未经手术治疗组、经手术治疗组及正常体检人员组间比较均具有显著差异(P<0.05);EM组与正常体检人员组比较:活化PB-MC培养上清液中CXCL10的表达水平无显著差异(P>0.05)、CD3+/CXCR3+PBMC细胞数无显著差异(P>0.05)、EM组高转录表达CXCR3B亚群而正常对照组表达CXCR3A亚群。结论:EM患者的血清CXCL10缺陷表达可能是参与EM发病的免疫机制之一;EM患者PBMC对细胞活化信号具有有效的免疫反应性,但活化后的PBMC细胞表面高表达的是CXCR3B亚群、而非具有趋化效应的CXCR3A亚群,推测EM通过此种免疫逃逸机制而发病。