miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列(mimics-NC)、CXCR4过表达质粒(pcDNA3.1-CXCR4)、pcDNA3.1空载质粒(Vector)转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组(转染无义序列)、mimics组(转染miR-139-5p mimics)、mimics+Vector组(共转染miR-139-5p mimics和空载质粒)和mimics+CXCR4组(共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒),另设置空白对照组(blank)。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC 50值和耐药指数(resistance index,RI);qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC 50值分别为(208.87±27.89)μmol/L和(31.66±6.30)μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低(P<0.05),而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K(p110α)和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K(p110α)和p-AKT等蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。

6-OHDA损伤神经细胞CXCR4/CXCL12表达变化的实验研究

目的研究6-OHDA损伤PC12细胞CXCR4/12表达的变化。方法以梯度浓度的6-OHDA处理PC12细胞,光镜观察各组PC12细胞的形态学变化;MTT法检测6-OHDA对PC12细胞的损伤;间接免疫荧光染色法检测6-OHDA不同浓度下PC12细胞CXCR4/CXCL12表达的变化。结果随6-OHDA浓度的增加,PC12细胞的存活率呈梯度降低;光镜下观察发现PC12细胞数减少,轴突变短甚至消失;间接免疫荧光染色则显示CXCL12及其受体CXCR4在神经细胞的表达增加。结论 6-OHDA浓度的增加可导致PC12细胞凋亡,同时伴有CXCL12及其受体CXCR4表达增加。

白头翁总皂苷调控CXCR4/CXCL12信号通路抑制小鼠结肠癌肝转移的机制研究

目的观察白头翁总皂苷对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并探讨其通过调节趋化因子受体4(CXCR4)/趋化因子12(CXCL12)通路发挥作用的机制。方法将50只BALB/c裸小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、白头翁总皂苷低剂量、高剂量组(100、200 mg/kg),每组10只。以希罗达组(267 mg/kg)作为阳性对照药,采用结肠癌细胞脾脏注射法制备小鼠CT26细胞肝转移模型。白头翁总皂苷低剂量、高剂量组和希罗达组每日灌胃给药,连续治疗3周,假手术组和模型组均给予等量生理盐水灌胃。小鼠处死后取肝、脾组织及瘤组织,比较各组小鼠肝脏、脾脏质量和抑瘤率;ELISA实验检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)、转化生长因子-α(TNF-α)水平,免疫组化检测小鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白阳性表达;Western-blot及RT-PCR检测脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白和mRNA表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠肝、脾质量明显上升(P<0.01),小鼠血清中IL-6、TNF-α水平及肝组织中VEGF、CD31的阳性表达明显升高(P<0.01),小鼠脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达均显著增多(P<0.01)。白头翁总皂苷低、高剂量组小鼠肝、脾质量显著低于模型组,抑瘤率分别为45.8%、52.3%;血清IL-6、TNF-α水平、肝组织VEGF、CD31阳性表达以及脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论白头翁总皂苷可显著抑制小鼠CT26细胞结肠癌肝转移,其机制可能与下调瘤组织中CXCR4/CXCL12信号通路的表达相关。

CXCR4/CXCL12轴与肿瘤发生发展中的作用研究进展

趋化因子受体是一类G蛋白偶联的7次跨膜受体,其与配体结合能参与调控多种生理和病理学过程,CXCR4/CXCL12轴在多种肿瘤中都高表达。本文对该轴生物学功能以及在肿瘤中的表达、增殖、侵袭转移及治疗等方面作一综述,提示此轴可成为抗肿瘤药物治疗的新靶点。

宫颈腺癌细胞CXCR4/CXCL12过表达与淋巴结转移和慢性炎症的关系

背景与目的:CXCL12是一种炎症趋化因子,CXCR4是其特异性受体。有文献报道CXCR4参与多种恶性肿瘤的转移过程。但CXCR4/CXCL12在宫颈腺癌细胞中表达的意义鲜见报道。本研究探讨CXCR4/CXCL12在宫颈腺癌细胞中过表达与淋巴结转移及宫颈慢性炎症程度的相关性。方法:收集35例行子宫颈癌根治术的ⅠB1～ⅡB期宫颈腺癌标本,其中有淋巴结转移组8例,无淋巴结转移组27例。组织切片行CXCR4和CXCL12免疫组化染色及HE染色,90%以上肿瘤细胞强着色定义为过表达。采用FisherWs精确概率检验法、卡方检验及Pearson相关检验分析结果。结果:35例均有不同数量肿瘤细胞表达CXCR4。有淋巴结转移组CXCR4过表达率(62.50%,5/8)高于无淋巴结转移组(22.00%,6/27),P<0.05。临床ⅠB期有淋巴结转移组CXCR4过表达率(33.33%,1/3)高于无淋巴结转移组(26.01%,6/23),但P>0.05;临床ⅡB期,有淋巴结转移组CXCR4过表达率高于无淋巴结转移组(80.00%,4/5vs.0.00%,0/4),P<0.05。CXCR4过表达预测淋巴结转移的阳性预测值为45.45%,阴性预测值为87.50%。35例中33例有数量不等的肿瘤细胞表达CXCL12。无论有淋巴结转移组或无淋巴结转移组,临床Ⅱ期病例CXCL12过表达率均明显高于ⅠB期(0.00%vs.80.00%,21.73%vs.75.00%),P<0.05。23例临床ⅠB期无淋巴结转移组,CXCR4过表达率与CXCL12过表达率呈正相关(P<0.05);但在ⅠB期有淋巴结转移组(3例)及ⅡB期(9例)病例组,两者间无相关性。35例病例均伴有不同程度慢性炎症,炎性浸润主要为淋巴细胞。CXCL12过表达率与宫颈慢性炎症浸润程度无相关性,P>0.05。结论:宫颈腺癌细胞CXCR4过表达提示具有较高淋巴结转移潜能。随着肿瘤进展,CXCL12过表达率也随之升高。宫颈腺癌中慢性炎症细胞可能由其它趋化因子吸引所致,而非CXCL12。

CXCR4/CXCL12与胃癌生物学行为

胃癌是一种常见恶性肿瘤,总体疗效欠佳,尤其发生腹膜转移者,预后较差。近年来,CXCR4及CXCL12在肿瘤研究中已逐渐成为热点;在胃癌研究中已逐渐见相关报道,如在胃癌生长、迁徙、转移和肿瘤新生血管形成等诸方面均起着重要作用。CXCR4受体拮抗剂在胃癌动物模型中的治疗效果也显示了其应用前景。此文综述了CXCR4/CXCL12在胃癌中作用机制,对CXCR4/CXCL12的深入研究将有望使其成为胃癌靶向治疗的特异靶点。

CXCR4/CXCL12在胃癌及结直肠癌中的研究进展

消化道肿瘤是一种常见的恶性肿瘤,远处转移是其预后不良的主要原因。近年来消化道肿瘤的发病率逐年上升,其相应的研究得到了广泛的重视。趋化因子对肿瘤的侵袭和转移作用也备受关注。CXCR4及CXCL12在肿瘤研究中已逐渐成为热点;最近研究表明,其与胃癌、结直肠癌等的转移密切相关,将为消化道肿瘤转移的防治提供新的思路。此文对CXCR4/CXCL12在胃癌及结直肠癌中的研究进展做一简要综述,CXCR4/CXCL12轴的深入研究将有望使其成为消化道肿瘤靶向治疗的特异靶点。

靶向CXCL12/CXCR4信号轴抑制肺癌细胞增殖和迁移

越来越多的研究表明,破坏CXC基序趋化因子12(CXCL12)/CXC基序趋化因子受体4(CXCR4)信号轴可能会降低肿瘤的生长和转移。然而,从实验室到临床的转换必须非常谨慎,因为CXCL12/CXCR4信号轴对组织和器官的正常发育和维持至关重要。A549细胞是一种源自人类非小细胞肺癌(NSCLC)的细胞株,在本研究中,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和Transwell迁移试验用于检测表达CXCR4的A549细胞的体外增殖和迁移能力,无论是否存在AMD3100(一种特异性CXCR4信号传导小分子抑制剂)。通过注射A549细胞建立裸鼠移植瘤模型,测量肿瘤大小。结果表明,CXCR4阻断抑制了体外A549细胞的增殖及其向CXCL12的迁移。AMD3100处理的裸鼠移植生长明显低于用载药处理的小鼠。总之,目前的数据表明,CXCL12/CXCR4信号轴靶向受损的非小细胞肺癌细胞生长和迁移受限,表明它可能是一种新的非小细胞肺癌治疗策略。

IL-24对肺癌A549细胞恶性生物学行为及CXCL12∕CXCR4信号轴的影响

探究白介素-24(IL-24)对肺癌A549细胞侵袭、迁移等恶性生物学行为以及CXCL12/CXCR4信号轴的影响,并探索其机制。方法 体外培养正常肺上皮细胞及肺癌A549细胞,通过RT-PCR与Western blot法检测正常肺上皮细胞及肺癌A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白表达。结果 与正常肺上皮细胞相比,肺癌A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达均明显升高(P<0.05)。与Control 组细胞相比,CXCL12能够明显升高A549细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),过表达IL-24联合AMD3100可显著降低A549细胞CXCL12对其侵袭、迁移能力的促进作用(P<0.05)。与正常肺上皮细胞相比,CXCL12可显著提高肺癌A549细胞CXCR4和Akt/mTOR 信号通路相关蛋白(p-Akt、p-mTOR)表达水平(P<0.05),过表达IL-24联合AMD3100可显著降低CXCL12促进p-Akt、p-mTOR蛋白表达的作用(P<0.05),但是过表达的IL-24则不影响CXCL12对CXCR4表达的促进作用(P>0.05),而过表达的IL-24联合AMD3100则能够显著抑制CXCL12对CXCR4表达的促进作用(P<0.05)。结论 在肺癌A549细胞中,过表达IL-24可能够通过破坏CXCL12/CXCR4信号轴而抑制A549细胞侵袭、迁移等恶性生物学行为,可能与Akt/mTOR信号通路有关。

白花蛇舌草多糖调节CXCL12/CXCR4轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白花蛇舌草多糖(Hedyotis diffusa Willd.Polysaccharide,HDP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调控机制。方法将乳腺癌细胞分为对照组,CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组),HDP低、中、高剂量组(HDP-L组、HDP-M组、HDP-H组),HDP高剂量+CXCL12组(HDP-H+CXCL12组);通过CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell实验分别测定细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分析细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达;建立BALB/c-nu雌性裸鼠MDA-MB-231异种移植瘤模型并观察各组肿瘤生长情况,采用HE染色观察裸鼠移植瘤细胞的形态学特征。结果与对照组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组细胞增殖活性、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达显著抑制(P<0.05,P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组细胞的增殖活力、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平被显著抑制(P<0.01)。此外,动物实验表明,与模型组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组的肿瘤重量明显降低(P<0.05,P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组裸鼠肿瘤重量明显增加(P<0.01);HE染色显示,AMD 3100组和HDP各干预组肿瘤组织坏死与凋亡细胞增多。结论HDP可以通过抑制CXCL12/CXCR4轴进而抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭。

银杏素调节CXCL12/CXCR4信号通路对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨银杏素(GK)调节趋化因子12(CXCL12)/趋化因子受体4(CXCR4)信号通路对结肠癌(CC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:用不同浓度的GK(0、2.5、5、10μmol/L)处理结肠癌HCT116细胞48 h,MTT法检测HCT116细胞的存活率,筛选合适的GK浓度。将对数生长期的HCT116细胞分为对照组、GK组(5μmol/L GK)、CXCL12过表达重组腺病毒(Ad CXCL12)组、阴性对照(Ad NC)组、Ad CXCL12+CXCR4小干扰RNA(si CXCR4)组、Ad CXCL12+阴性对照(si NC)组。Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;MTT及Tunel检测细胞增殖及凋亡变化;qRT-PCR及Western blot分别检测CXCL12、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。结果:5μmol/L GK处理细胞,其生存率最接近于50%,以此浓度进行后续研究。与对照组相比,GK组细胞增殖率、迁移、侵袭数与CXCL12、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平显著降低,凋亡率显著增加(P<0.05);Ad CXCL12逆转了GK对HCT116细胞的抑制作用;si CXCR4逆转了Ad CXCL12对HCT116细胞的促进作用。结论:GK通过抑制CXCL12/CXCR4信号通路阻止HCT116细胞恶性生物学行为。

增强CXCL12/CXCR4信号可促进耐放射肺癌恶性进展

肺癌是所有癌症中预后最差的癌症之一,由于治疗耐药性的迅速发展,使得化疗和放疗不再有效。然而,肺癌对放射治疗产生耐药性的机制尚不清楚。在这里,我们建立了抗放射的肺癌A549细胞系来研究与抗放射有关的因素。研究了CXC基序趋化因子配体12 (CXCL12)/CXC趋化因子受体4型(CXCR4)轴在A549耐放射中的作用,以及CXCR4拮抗剂对A549耐放射细胞系的影响。免疫荧光染色、逆转录定量聚合酶链反应和Western blotting证实,CXCR4在耐放射A549细胞株中的表达高于正常A549细胞株。耐放射A549细胞株的侵袭能力高于正常细胞株,并通过CXCL12处理和与成纤维细胞共培养增强;这种增强的侵袭能力被CXCR4拮抗剂AMD070抑制。CXCR4拮抗剂处理后的放射抑制了放射抗性A549细胞系的定植。综上所述,CXCL12/CXCR4轴可能参与了A549的耐放射作用。这些发现可能会促进新的治疗方法的发展。

白介素-24通过干扰CXCL12/CXCR4轴抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探究白介素-24(IL-24)靶向CXCL12/CXCR4轴抑制宫颈癌细胞迁移及侵袭的作用机制。方法体外培养正常子宫颈上皮细胞HcerEpic及宫颈癌细胞系Hela、Siha、Caski、C-33A,应用RT-PCR与Western blot检测上述细胞中CXCR4的mRNA和蛋白表达水平。将Hela细胞分为Control组(细胞正常培养,无任何特殊处理)、CXCL12组(细胞用100 ng/mL CXCL12处理)、CXCL12+LV-NC组(细胞感染LV-NC后使用100 ng/mL CXCL12处理)、CXCL12+LV-IL-24组(细胞感染LV-IL-24后使用100 ng/mL CXCL12处理)、CXCL12+AMD3100组(联合使用100 ng/mL CXCL12及1μg/mL AMD3100处理细胞)、CXCL12+AMD3100+LV-IL-24组(细胞经LV-IL-24感染后联合100 ng/mL CXCL12与1μg/mL AMD3100处理)。划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测各组宫颈癌细胞的迁移、侵袭能力;Western blot检测CXCR4蛋白表达及Akt/mTOR信号通路中p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与HcerEpic细胞相比,宫颈癌细胞系中CXCR4的mRNA和蛋白的表达水平均显著增加(P<0.05),其中以Hela细胞最为明显(P<0.01)。与细胞正常培养组相比,CXCL12能够显著提高宫颈癌细胞的迁移与侵袭能力(P<0.05),而过表达IL-24和(或)联合AMD3100能明显抑制CXCL12的上述促进作用(P<0.05),其中以过表达IL-24联合AMD3100效果最为显著(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与细胞正常培养组相比,CXCL12能明显促进Hela细胞中CXCR4、p-Akt及p-mTOR蛋白的表达水平(P<0.05),而过表达IL-24和(或)联合AMD3100能明显抑制CXCL12诱导的p-Akt及p-mTOR蛋白表达升高现象(P<0.05),但过表达IL-24不影响CXCL12诱导的CXCR4表达增加(P>0.05),而联合AMD3100能抑制这一现象(P<0.05)。结论在宫颈癌Hela细胞中,过表达IL-24能够通过Akt/mTOR信号途径破坏CXCL12/CXCR4轴诱导的肿瘤细胞侵袭与迁移促进的作用,且联合CXCR4抑制剂AMD3100效果更为显著。

马钱子苷抑制CXCL12/CXCR4信号通路对腰椎间盘突出症大鼠疼痛反应的影响

目的探讨马钱子苷(loganin)调控CXC趋化因子配体(CXCL12)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路对腰椎间盘突出症(LDH)模型大鼠疼痛反应的影响。方法将50只大鼠按随机数字表法抽取10只为假手术组(Sham组),其余大鼠建立LDH大鼠模型,将模型大鼠随机分为Model组、CXCR4拮抗剂组(AMD3100组,鞘内注射20μg)、马钱子苷组(5 mg/kg,腹腔注射)、马钱子苷(5 mg/kg,腹腔注射)+CXCL12组(鞘内注射250 ng),每组10只。按照药物分组干预后,分别检测大鼠热撤足反应潜伏期与机械性撤足阈值,HE染色观察脊髓背角组织形态学变化,采用酶联免疫吸附试验检测脊髓背角组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平,免疫荧光染色检测小胶质细胞激活情况,Western blot检测CXCL12/CXCR4通路相关蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组脊髓背角组织损伤严重,大鼠热撤足反应潜伏期、机械性撤足阈值降低,脊髓背角组织小胶质细胞及TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL12、CXCR4、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)蛋白表达水平升高(P<0.05);与Model组比较,AMD3100组与马钱子苷组脊髓背角组织病理损伤减轻,大鼠热撤足反应潜伏期、机械性撤足阈值升高,脊髓背角组织小胶质细胞及TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL12、CXCR4、NLRP3、caspase-1蛋白表达水平降低(P<0.05);CXCL12可削弱马钱子苷对LDH大鼠疼痛反应的改善作用(P<0.05)。结论马钱子苷可改善LDH大鼠疼痛反应,可能与其抑制CXCL12/CXCR4信号通路活性有关。

基于HIF-1α/CXCL12/CXCR4/VEGF信号通路探索中药复方调控CIA大鼠滑膜血管新生的机制

目的 探究清热活血方调控胶原诱导关节炎大鼠缺氧诱导的滑膜血管新生作用机制。方法 24只清洁级SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、清热活血方组、甲氨蝶呤组。注射牛Ⅱ型胶原乳剂造模,造模成功后各组大鼠分别给予相应药物灌胃,治疗过程中间隔测量大鼠体质量、足趾容积,进行关节炎指数评分,用ELISA法检测血清白细胞介素(interleukin,IL)-18、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、趋化因子配体[chemokine (C-X-C motif) ligand,CXCL]12水平,Western blot法检测滑膜组织低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α、趋化因子受体[chemokine (C-X-C motif) receptor,CXCR]4、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达量。结果 与正常组相比,模型组大鼠关节红肿变形明显,关节炎指数明显增加;同时血清中TNF-α、IL-18和CXCL12水平升高(P<0.01),滑膜组织HIF-1α、CXCR4、VEGF蛋白表达显著降低(P<0.01),关节病理显示滑膜内可见炎性细胞浸润,滑膜组织增生,滑膜血管增生的扩张及新生。与模型组相比,清热活血方组及甲氨蝶呤组能够明显降低足趾容积,减轻大鼠的关节肿胀情况,关节病理切片显示清热活血方可以抑制关节内滑膜组织的增生,延缓滑膜血管扩张及新生。清热活血方及甲氨蝶呤能够降低大鼠血清中IL-18,TNF-α、CXCL12水平(P<0.01),并且能明显降低HIF-1α、CXCR4、VEGF表达水平(P<0.01),两组作用情况相仿(P>0.05)。结论 清热活血方能够明显减轻足趾肿胀情况,降低模型大鼠炎症水平,抑制相关蛋白的表达,从而改善关节缺氧的情况,减缓血管的扩张及新生,其机制可能是清热活血方通过调控HIF-1α/CXCL12/CXCR4/VEGF通路抑制模型大鼠的血管新生。

CXCL12/CXCR4轴通过调节自噬促进乳腺癌细胞对多柔比星的化疗抗性

目的:探究CXCL12/CXCR4轴在乳腺癌细胞多柔比星(Dox)化疗抗性中的作用及相关机制。方法:体外培养乳腺癌细胞系MCF-7,通过MTT实验检测在CXCL12作用下乳腺癌细胞对Dox的敏感性变化,RT-PCR和Western blot检测上述细胞中CXCL12受体CXCR4与CXCR7的mRNA及蛋白的表达水平;采用siRNA干扰技术靶向沉默乳腺癌细胞中CXCR4表达,RT-PCR和Western blot检测转染效率后,依次使用MTT、Annexin V-FITC/PI流式细胞术及Western blot明确在CXCL12作用下沉默CXCR4表达对Dox介导的乳腺癌细胞的抑制率,凋亡、自噬及PI3K/Akt信号通路表达的影响。结果:CXCL12能够通过促进CXCR4的表达,提高乳腺癌细胞对Dox的化疗抗性;转染siRNA能够显著抑制乳腺癌细胞中CXCR4的mRNA及蛋白的表达水平;而沉默CXCR4能显著改善CXCL12作用下的乳腺癌细胞对Dox的敏感性,提高Dox诱导的细胞凋亡率,并通过抑制自噬相关蛋白LC3B与Beclin1表达,下调乳腺癌细胞中的自噬水平;同时,沉默CXCR4能通过抑制PI3K/Akt信号通路中PI3K蛋白表达及Akt蛋白磷酸化水平,下调抗凋亡蛋白BCL-2,促进凋亡相关蛋白Bax与cleaved Caspase-3表达。结论:CXCL12/CXCR4在乳腺癌细胞Dox耐药性中具有重要作用,而沉默CXCR4表达能通过下调MCF-7细胞的自噬水平,提高Dox诱导的细胞凋亡,从而改善肿瘤细胞对Dox的敏感性。

中医药调控动脉粥样硬化CXCL12/CXCR4生物轴的研究进展

动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是一种以动脉管壁增厚变硬、功能减退为特征的慢性炎症性血管疾病,病变后期可继发斑块内出血、破裂及血栓形成,进而引起相应的组织或器官缺血。由AS引起的动脉粥样硬化性心血管疾病(Atherosclerotic Cardiovascular Disease, ASCVD)是世界上发病率和病死率最高的疾病之一。虽然介入治疗和不断涌现的新药对AS具有显著的防治效果,但其不良反应仍不可忽视,中医药因其不良反应小、作用靶点广泛等优势受到越来越多学者的关注。趋化因子12(Chemokine 12,CXCL12)/趋化因子受体4(Chemokine Ceceptor 4,CXCR4)生物轴是一条重要的趋化因子/趋化因子受体轴,能够调控细胞增殖、动员、分化、归巢、趋化等多种生物学行为。近年来大量研究发现其广泛影响着与AS相关的多种细胞,参与AS的发生发展。CXCL12/CXCR4生物轴已逐渐成为AS防治中重要的靶点。近年来中医药调控CXCL12/CXCR4生物轴进而防治AS已被广泛研究,但目前国内外还未见该领域系统的回顾和总结。将综述CXCL12/CXCR4生物轴与AS之间的关系以明确其在AS中的重要作用,同时对中医药调控该生物轴防治AS的文献进行总结,为AS的中医药临床诊治、基础研究以及药物开发提供一定参考意见。

荆芥方对痔术后疼痛大鼠背根神经节CXCL12/CXCR4表达的影响

目的:本研究通过建立大鼠疼痛模型,从分子水平研究复方荆芥熏洗剂参与术后止痛的作用机制,完善对复方荆芥方止痛原理的认识,充分发挥中医药外治的优势,为临床治疗提供更多的实验理论依据,拓展临床应用前景。方法:实验室SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为5组,分别为荆芥方组、抑制剂组、生理盐水组、模型组、空白组,每组12只。建立大鼠痔术后切口痛模型,荆芥方组给予荆芥方坐浴(1000 mL,每天2次,每次10 min),生理盐水组予0.9%氯化钠溶液坐浴,等量,每次10 min,抑制剂组予特异性拮抗剂普乐沙福(AMD3100)(1μg/10μL)外用。于给药的第3天取大鼠背根神经节,采用酶联免疫吸附法检测组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6表达水平变化;免疫荧光法检测大鼠背根神经节中CXCL12和CXCR4的表达水平,使用荧光显微镜观察复方荆芥熏洗剂对信号通路表达的影响。结果:与空白组相比,生理盐水组、模型组样本炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6及信号通路CXCL12/CXCR4表达增高(P<0.05)。荆芥方组样本中炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6及信号通路CXCL12/CXCR4的表达减少(P<0.05)。结论:荆芥方可能通过调控CXCL12/CXCR4信号通路表达,以及降低炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6水平参与术后止痛。

CXCL12/CXCR4在肾脏疾病的表达及作用研究

趋化因子是主要介导各种细胞归巢和迁移的蛋白质家族,CXC趋化因子配体12(CXCL12)作为稳态/炎性两用的趋化因子,通过与CXC趋化因子受体4(CXCR4)结合形成CXCL12/CXCR4轴,参与免疫调节、内分泌调节、炎症性疾病,在肾脏生理发育以及不同肾脏疾病中发挥重要调节作用。CXCL12与CXCR4结合在促进肾脏生长及血管形成有重要作用,然而,该轴在糖尿病肾病的发生发展中起着双重作用。此外,对狼疮性肾炎、肾癌及膜性肾病而言CXCL12/CXCR4是一种新的潜在危险因素。本文就CXCL12/CXCR4在肾脏疾病中的作用及CXCL12/CXCR4轴的拮抗剂治疗肾脏疾病的效果进行综述,有助于指导肾脏疾病的临床研究工作。

miR-139通过下调CXCR4/CXCL12生物轴抑制乳腺癌定向转移的分子机制研究

[目的]检测miR-139在乳腺癌细胞系及组织中的表达,验证CXCR4是否为miR-139直接调控的靶基因,并探究miR-139是否可通过靶向抑制CXCR4/CXCL12生物轴从而抑制乳腺癌细胞的定向转移。[方法]实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）用于检测miR-139在34对转移性乳腺癌患者的原发灶、转移灶及癌旁组织中,在5株乳腺癌细胞系及1株正常乳腺上皮细胞中的表达。将包含miR-139的重组慢病毒质粒及其阴性对照空载体质粒vector分别以病毒/细胞数量=20的比例感染MDA-MB-231细胞,经2.0μg/ml嘌呤霉素筛选,成功构建稳定表达miR-139或vector的MDA-MB-231细胞,将MDA-MB-231vector和MDA-MB-231miR-139细胞分别经尾静脉注射到BALB/c裸鼠中,构建乳腺癌裸鼠转移模型,观察过表达miR-139对裸鼠体内转移能力的影响。Target Scan软件用于预测miR-139的靶基因,根据预测结果,将野生型或突变型CXCR4的3’-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游（CXCR4-wt或CXCR4-mut）并分别与miR-139 mimics或scramble共转染后检测荧光素酶的活性。q RTPCR和Western blot分别检测转染miR-139 mimics和scramble后CXCR4、CXCL12的mRNA和蛋白表达。[结果]miR-139在转移性乳腺癌原发灶和转移灶中的表达均低于癌旁组织,且转移灶中表达最低,miR-139在乳腺癌细胞系中的表达水平显著低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A,且MDA-MB-231细胞中最低。尾静脉注射MDA-MB-231miR-139的裸鼠肺转移灶的个数均显著低于MDA-MB-231vector细胞。Target Scan软件预测CXCR4为miR-139直接调控的靶基因,CXCR4-wt＋miR-139共转染组比CXCR4-wt＋scramble共转染组的荧光素酶活性强度显著降低,CXCR4-mut＋miR-139共转染组和CXCR4-wt＋scramble共转染组间荧光素酶活性强度无显著性差异。转染miR-139后,CXCR4和CXCL12的mRNA和蛋白表达水平均显著下调,CXCR4/CXCL12生物轴下游的p-AKT和p-ERK蛋白表达水平也显著下调。[结论 ]miR-139可通过靶向调控CXCR4/CXCL12生物轴而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231定向转移。