CXCR4/SDF-1α信号对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移的促进作用

目的探讨CXCR4/SDF-1α信号在乳腺癌细胞体外增殖和迁移中的作用。方法免疫组织化学染色法检测CXCR4在乳腺癌组织中的表达;采用免疫荧光标记法和RT-PCR方法检测CXCR4在乳腺癌细胞株上的表达;MTT法研究SDF-1α细胞因子对乳腺癌细胞株体外增殖的影响及抗体12G5的阻断作用;体外微孔隔离室迁移技术研究CXCR4/SDF-1α信号对乳腺癌细胞株体外迁移能力的影响和抗体12G5的阻断作用。结果 CXCR4表达于乳腺癌组织,也在乳腺癌细胞株表达。SDF-1α细胞因子可有效促进乳腺癌细胞株MDA-M231的体外增殖和迁移,而阻断型CXCR4单抗12G5可有效抑制其增殖和迁移,并呈浓度依赖性。结论 CXCR4/SDF-1α信号参与了乳腺癌细胞株的体外生长和转移,与乳腺癌的侵袭和转移有关。

CXCR4/SDF-1α对宫颈癌HeLa细胞定向迁移及增殖的影响

目的了解CXCR4在HeLa细胞的表达情况，并借助细胞培养评价CXCR4／SDF-1α对HeLa细胞定向迁移及增殖的影响。方法CXCR4mAb免疫染色HeLa细胞。用Transwell侵袭转移模型评价HeLa细胞的迁移情况，其中，上室中加入预先用（或不用）CXCR4单抗预孵育的HeLa细胞，下室中加入含0～100ng／ml SDF-1α的培养基。为评价CXCR4、SDF-1α对HeLa细胞增殖的影响，将HeLa细胞接种于有（无）SDD-1α和（或）CXCR4的低血清环境72h。结果CXCR4在所有HeLa细胞上均有表达。HeLa细胞能顺SDF-1α浓度差定向迁移，且这一作用可被CXCR4mAb拮抗。SDF-1α能促进HeLa细胞在低血清环境中增殖。结论CXCR4／SDF-1α参与了HeLa细胞定向迁移的过程并影响其增殖．

加味百合地黄汤通过调控SDF-1/CXCR4轴对围绝经期抑郁症大鼠下丘脑炎性损伤的改善作用

目的探究加味百合地黄汤对围绝经期抑郁症(PDD)大鼠下丘脑神经炎性损伤的作用。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(氟哌噻吨美利曲辛片,1.89 mg/kg)和加味百合地黄汤高、中、低剂量组(16.2、8.1、4.05 g/kg),每组10只,除正常组外,其余各组均通过卵巢摘除(OVX)联合慢性不可预见性应激(CUS)建立PDD模型,给予相应剂量药物干预21 d。采用糖水偏好实验和旷场实验评价抑郁样行为,酶联免疫吸附法检测脑脊液炎症因子水平,HE染色观察下丘脑组织结构变化,免疫荧光染色、RT-qPCR、Western blot检测小胶质细胞Iba-1及SDF-1/CXCR4轴相关因子的表达。结果与模型组比较,加味百合地黄汤高剂量组抑郁样行为改善(P<0.01);下丘脑胞体肿胀、间隙增加、炎性浸润等病理损伤缓解;脑脊液中促炎因子IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05),抗炎因子IL-4、IL-10、IGF-1水平升高(P<0.01),Iba-1、SDF-1、CXCR4表达降低(P<0.05),PSD-95、BDNF、NGF表达升高(P<0.05)。结论加味百合地黄汤抗PDD的作用可能与其抑制SDF-1/CXCR4轴进而改善下丘脑神经炎性损伤有关。

舒芬太尼调节SDF-1/CXCR4信号通路对急性脑梗死大鼠的神经保护作用研究

目的 探究舒芬太尼调节基质细胞衍生因子-1/CXC型趋化因子受体4(SDF-1/CXCR4)轴对急性脑梗死(ACI)大鼠的神经保护作用。方法 将SD大鼠分为空白组、ACI组、舒芬太尼低剂量组(10 ng·kg^(-1))、舒芬太尼高剂量组(30 ng·kg^(-1))、丁苯酞组(30 mg·kg^(-1))、AMD3100 (SDF-1/CXCR4通路拮抗剂)组(2.5 mg·kg^(-1))、舒芬太尼高剂量+AMD3100组(30 ng·kg^(-1)舒芬太尼+2.5 mg·kg^(-1)AMD3100),每组15只:除空白组外,其余各组大鼠采用中动脉闭塞(MCAO)法复制ACI大鼠模型:建模成功后次日给予相应药物处理,每天1次,持续7d,空白组、ACI组给予等体积生理盐水:改良神经功能缺损评分测定大鼠神经功能缺损情况;TCC染色测定大鼠脑梗死面积;苏木精-伊红染色观察大鼠海马组织病理变化;TUNEL染色检测大鼠神经元凋亡;Western blot法测定大鼠海马组织SDF-1、CXCR4及凋亡蛋白表达水平。结果 与对照组比较,ACI组大鼠脑组织神经功能缺损评分、脑梗死体积百分数、神经元凋亡率及B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、相关X蛋白(Bax)表达升高,Bcl-2、SDF-1、CXCR4蛋白表达降低,海马组织细胞间隙增大,细胞核破裂且细胞排列紊乱(P<0.05)。与ACI组比较,舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、丁苯酞组大鼠脑组织神经功能缺损评分、脑梗死体积百分数、神经元凋亡率及Bax表达降低,Bcl-2、SDF-1、CXCR4蛋白表达升高,海马组织病理损伤有所改善,AMD3100组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);且AMD3100减弱了高剂量舒芬太尼对ACI大鼠的神经保护作用。结论 舒芬太尼可能通过激活SDF-1/CXCR4通路对ACI大鼠产生神经保护作用。

SDF-1/CXCR4轴在皮肤及周围神经损伤修复中的研究进展

皮肤组织遭受损伤时,其损伤修复对于恢复皮肤的稳态非常重要,趋化因子SDF-1在此过程中起着非常关键的作用。本文对SDF-1/CXCR4轴在创面愈合、损伤处神经修复作用、创伤后瘢痕形成以及其对损伤部位神经疼痛的影响进行综述,为开发更有效的皮肤及周围神经损伤的治疗方法和策略提供指导。

奥拉西坦通过SDF-1α/CXCR4通路促进脑梗死大鼠神经新生与迁移

[目的]探究奥拉西坦通过基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)/C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)通路促进脑梗死大鼠神经新生与迁移的机制。[方法]100只SD大鼠随机分为对照组、脑缺血(CI)组、奥拉西坦(200 mg/kg)组和奥拉西坦(200 mg/kg)+AMD3100(5 mg/kg)组,每组25只。采用电凝法制作局部永久性脑缺血大鼠模型。造模后1、7、14天进行神经功能缺损评分,TTC染色检测脑梗死体积,尼氏染色检测梗死区细胞存活,Western blot检测缺血区SDF-1α、CXCR4蛋白水平。造模后1~7天,连续腹腔注射BrdU(50 mg/kg),14天后,免疫荧光双标染色检测SVZ区BrdU^(+)Nestin^(+)、BrdU^(+)DCX^(+)细胞数量。造模前5天,大鼠SVZ区注射携带GFP的反转录病毒,14天后,免疫荧光双标染色检测梗死区GFP^(+)DCX^(+)、GFP^(+)MAP-2^(+)、GFP^(+)GFAP^(+)细胞数量。将C17.2细胞分为对照组、氧糖剥夺(OGD)组、奥拉西坦组(终浓度为200 mg/L)和奥拉西坦(终浓度为200 mg/L)+AMD3100(终浓度为100μmol/L)组。采用OGD制作细胞缺血模型,12 h后,免疫荧光双标染色检测BrdU^(+)/Nestin^(+)、BrdU^(+)/MAP-2^(+)细胞数量,Transwell实验检测细胞迁移,Western blot检测细胞培养上清液中SDF-1α、CXCR4蛋白水平。[结果]动物实验结果显示,与对照组相比,CI组大鼠mNSS评分升高,脑梗死体积增大,梗死区细胞存活数量减少,SDF-1α、CXCR4蛋白水平升高,SVZ区GFP^(+)DCX^(+)、GFP^(+)MAP-2^(+)、GFP^(+)GFAP^(+)细胞数量增多(P<0.05);与CI组相比,奥拉西坦组大鼠mNSS评分降低,脑梗死体积减小,梗死区细胞存活数量增多,SDF-1α、CXCR4蛋白水平升高,SVZ区GFP^(+)DCX^(+)、GFP^(+)MAP-2^(+)、GFP^(+)GFAP^(+)细胞数量增多,梗死区GFP^(+)DCX^(+)、GFP^(+)MAP-2^(+)、GFP^(+)GFAP^(+)细胞数量增多(P<0.05);与奥拉西坦组相比,奥拉西坦+AMD3100组大鼠mNSS评分升高,脑梗死体积增大,梗死区细胞存活数量减少,CXCR4蛋白水平降低,SVZ区GFP^(+)DCX^(+)、GFP^(+)MAP-2^(+)、GFP^(+)GFAP^(+)细胞数量减少(P<0.05)。细胞实验结果显示,与对照组相比,OGD组细胞BrdU^(+)/Nestin^(+)、BrdU^(+)/MAP-2^(+)数量、细胞迁移数增多,细胞培养上清液中SDF-1α、CXCR4蛋白水平升高(P<0.05);与OGD组相比,奥拉西坦组细胞BrdU^(+)/Nestin^(+)、BrdU^(+)/MAP-2^(+)数量、细胞迁移数增多,细胞培养上清液中SDF-1α、CXCR4蛋白水平升高(P<0.05);与奥拉西坦组相比,奥拉西坦+AMD3100组细胞BrdU^(+)/Nestin^(+)、BrdU^(+)/MAP-2^(+)数量、细胞迁移数减少,细胞培养上清液中CXCR4蛋白水平降低(P<0.05)。[结论]奥拉西坦可能通过激活SDF-1α/CXCR4通路,促进SVZ区神经干细胞迁移至缺血区,以促进脑梗死大鼠神经新生和神经功能恢复。

基于SDF-1/CXCR4轴探讨补肾壮筋汤促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的机制研究

目的探讨补肾壮筋汤调控SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的作用机制,为膝骨关节炎(KOA)的康复治疗提供实验依据。方法①动物实验中,选用8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠30只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、补肾壮筋汤组,每组10只,干预12周。采用micro-CT、HE染色观察各组软骨形态变化;激光共聚焦显微镜观察骨组织SDF-1荧光强度;qPCR、Western blot检测各组归巢相关调控因子mRNA转录水平和蛋白相对表达量。②细胞实验中,选用4周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,采用全骨髓贴壁法提取原代BMSCs,流式细胞术对所提取的细胞进行鉴定后,筛选最佳慢病毒MOI值;随机将细胞分为空白组、空载组、补肾壮筋汤组、sh-SDF-1组、sh-SDF-1+补肾壮筋汤组5组,采用划痕实验观察各组BMSCs迁移情况;阿利新蓝、CollagenⅡ免疫细胞学染色观察各组细胞成软骨分化能力;激光共聚焦显微镜观察各组SDF-1、CXCR4的荧光强度;qPCR检测各组归巢相关调控因子mRNA转录水平。结果①动物实验中,关节组织形态学结果(micro-CT、HE染色)显示:与假手术组比较,模型组股骨髁间可见一圆形缺损,骨皮质失连,软骨细胞缺失;与模型组比较,补肾壮筋汤组股骨髁间环形缺损好转,软骨细胞排列稍紊乱。关节组织免疫荧光显示:与假手术组比较,模型组SDF-1蛋白相对表达量升高;与模型组比较,补肾壮筋汤组SDF-1的蛋白相对表达量升高(P<0.05)。qPCR与Western blot结果显示:与假手术组比较,模型组归巢关键调控因子(SDF-1、CXCR4、MIP-1α、MCP-1、MIP-1β、RANTES、VEGF、G-CSF、NCAM-1、MMP-2)的mRNA转录水平和蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,补肾壮筋汤组归巢关键调控因子mRNA转录水平和蛋白相对表达量升高(P<0.05)。②细胞实验中,BMSCs经细胞流式术鉴定:CD44、CD105呈阳性表达,CD34呈阴性表达。当病毒MOI值为100时,SDF-1基因感染率最高。BMSCs迁移和成软骨分化能力检测结果显示:与空白组比较,sh-SDF-1组细胞向划痕区域迁移的细胞数量、酸性黏多糖及CollagenⅡ蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);补肾壮筋汤组和sh-SDF-1+补肾壮筋汤组迁移的细胞数量、阿利新蓝染色及CollagenⅡ蛋白相对表达量显著增多(P<0.05)。细胞免疫荧光显示:与空白组比较,sh-SDF-1组细胞SDF-1、CXCR4蛋白相对表达量显著减少;补肾壮筋汤组和sh-SDF-1+补肾壮筋汤组细胞SDF-1、CXCR4蛋白相对表达量显著增多(P<0.05)。qPCR结果显示:与空白组比较,sh-SDF-1组归巢关键调控因子的mRNA转录水平降低(P<0.05),补肾壮筋汤组归巢关键调控因子的mRNA转录水平升高(P<0.05)。结论补肾壮筋汤可通过上调SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢保护关节软骨。

SDF-1及其受体CXCR4在恶性血液病中的临床应用研究

作为一种特异性的肿瘤标志物,SDF-1和CXCR4在多种恶性血液系统肿瘤中高表达,与急性白血病的分期、黏附、侵袭、转移、复发、浸润有着密切的相关性,与中枢神经系统白血病的发生呈正相关,SDF-1及其受体CXCR4对急性白血病的早期诊断、预防、分期、治疗和预后判定、用药筛选和靶向治疗中,有着重要的价值和深远的意义,值得临床进一步研究、推广应用。

灯盏花乙素调节SDF⁃1/CXCR4轴保护脓毒症大鼠心肌损伤

目的探讨灯盏花乙素调节SDF⁃1/CXCR4信号通路对脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法将SD大鼠分为假手术组、模型组、低剂量灯盏花乙素组、高剂量灯盏花乙素组、高剂量灯盏花乙素+AMD3100(CXCR4抑制剂)组,每组12只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型;血液生化分析仪检测心肌损伤标志物血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnI)水平;ELISA法检测大鼠血清IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃α水平;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化;商品化试剂盒检测GSH、SOD、MDA水平;Western blot检测大鼠心肌组织中Bcl⁃2、Bax、SDF⁃1、CXCR4蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织有严重损伤,血清CK、LDH、cTnI、IL⁃6、IL⁃1β和TNF⁃α水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织MDA水平、Bax蛋白水平显著升高,心肌组织GSH、SOD水平、Bcl⁃2、SDF⁃1、CXCR4蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,低、高剂量灯盏花乙素组大鼠心肌组织损伤显著减轻,血清CK、LDH、cTnI、IL⁃6、IL⁃1β和TNF⁃α水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织MDA水平、Bax蛋白水平显著降低,心肌组织GSH、SOD水平、Bcl⁃2、SDF⁃1、CXCR4蛋白水平显著升高(P<0.05);与高剂量灯盏花乙素组相比,高剂量灯盏花乙素+AMD3100组大鼠心肌组织损伤显著加重,血清CK、LDH、cTnI、IL⁃6、IL⁃1β和TNF⁃α水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织MDA水平、Bax蛋白水平显著升高,心肌组织GSH、SOD水平、Bcl⁃2、SDF⁃1、CXCR4蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论灯盏花乙素通过激活SDF⁃1/CXCR4信号通路可降低脓毒症大鼠炎症反应和氧化应激,减轻脓毒症大鼠心肌损伤。

基于IGF-1/SDF-1/CXCR4轴研究黑地黄丸含药血清对骨髓间充质干细胞增殖迁移的影响

目的探索黑地黄丸对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、迁移的影响及机制。方法全骨髓细胞贴壁法分离BMSCs并鉴定。MTT检测黑地黄丸对BMSCs增殖的影响并确定最佳干预浓度。将BMSCs分为对照组、黑地黄丸含药血清组、黑地黄丸含药血清+胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)抑制剂组、黄芪甲苷含药血清组,采用细胞划痕实验检测各组BMSCs的划痕愈合率,采用Transwell实验检测BMSCs的迁移数量。ELISA法检测培养上清中胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)-1的含量,Western blot检测BMSCs中IGF-1、趋化因子受体(C-X-C chemokine receptor type,CXCR)4、基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor,SDF)-1的表达。结果成功提取大鼠BMSCs,1%~10%的黑地黄丸含药血清可促进BMSCs增殖,且5%黑地黄丸含药血清促增殖作用最佳。与对照组比较,5%黑地黄丸含药血清促进BMSCs的迁移(P<0.05),并可显著增加BMSCs培养上清中IGF-1的水平(P<0.05),上调BMSCs内IGF-1、CXCR4的表达(P<0.05),下调SDF-1的表达(P<0.05)。与5%黑地黄丸含药血清组比较,IGF-1R抑制剂可抑制BMSCs的迁移(P<0.05),显著下调CXCR4的表达(P<0.05),上调SDF-1的表达(P<0.05)。结论黑地黄丸可促进BMSCs增殖,并可通过上调BMSCs内IGF-1的表达,促进IGF-1与IGF-1R的结合,增加表面趋化因子CXCR4的表达,进而调控SDF-1/CXCR4轴,促进BMSCs迁移。

加味四妙丸介导SDF-1/CXCR4信号通路对痛风性关节炎的治疗作用

目的研究加味四妙丸介导基质细胞衍生因子(SDF)-1/趋化因子受体(CXCR4)信号通路对痛风性关节炎的治疗作用。方法将75只SPF级大鼠随机分成健康组、模型组、研究组各25例,对模型组和研究组大鼠建立痛风性关节炎模型,只对研究组进行加味四妙丸治疗,通过大鼠步态分级和关节炎症程度评定检测模型是否成立;容积法对大鼠关节肿胀程度进行测定;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液炎症指标及SDF-1表达;苏木素-伊红(HE)染色了解大鼠关节组织内在形态;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹检测滑膜软骨组织中SDF-1、CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、MMP-13等的基因、蛋白表达水平。结果模型组关节炎症指数及步态分级较健康组显著上升(P<0.05);研究组较模型组关节炎症指数及步态分级显著降低(P<0.05);与模型组对比,研究组6、12、24、48 h时踝关节肿胀度显著下降(均P<0.05);研究组较模型组关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA显著降低,SOD显著升高,SDF-1含量、SDF-1 mRNA和蛋白、CXCR4、MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA及其蛋白表达显著下降(均P<0.05)。结论加味四妙丸能够通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路的表达降低痛风性关节炎大鼠的关节肿胀程度及抑制炎症反应从而达到治疗目的。

肉桂醛调节SDF-1/CXCR4轴对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症的影响

目的 探究肉桂醛(CA)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症的影响以及对SDF-1/CXCR4轴的调节机制。方法 将Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、氨茶碱组(阳性药物)、AMD3100组(CXCR4抑制剂)、CA低剂量组、CA高剂量组,每组10只。利用动物肺功能检测仪检测大鼠肺功能;HE染色观察肺组织病理学变化;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),进行炎性细胞计数;ELISA检测BALF中炎症因子白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;Western Blot检测肺组织SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠肺泡间隔变窄并断裂,肺泡扩大成肺大疱,支气管道周围明显炎症细胞浸润,FRC值、BALF中白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量、促炎因子LTB4、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量及SDF-1、CXCR4蛋白表达均升高,FEV_(0.3)/FVC及PEF值降低(P<0.05);与模型组相比,氨茶碱组和CA组大鼠肺泡结构恢复,肺泡轻微扩张,炎症细胞浸润减少,FRC值、BALF中白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量、促炎因子LTB4、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量及SDF-1、CXCR4蛋白表达均降低,FEV_(0.3)/FVC及PEF值升高(P<0.05)。结论 CA可能通过抑制SDF-1/CXCR4轴来减轻COPD大鼠的气道炎症。

过表达NKx2.5基因间充质干细胞增强SDF-1/CXCR4轴促归巢改善心梗心功能

目的探讨过表达NKx2.5基因骨髓间充质干细胞(BMSC)通过增强SDF-1/CXCR4轴促BMSC归巢改善心梗后心功能。方法采用慢病毒使骨髓间充质干细胞内过表达NKx2.5(BMSC^(NKx2.5)),将空载体组及BMSC组作为对照组。采用RT-PCR检测各组细胞SDF-1、CXCR4及NKx2.5的表达及同时采用western-blot检测NKx2.5及SDF-1、CXCR4蛋白的表达。将BMSC^(NKx2.5)、BMSC、及BMSC空载体经尾静脉注射入小鼠心梗模型,同时设立BMSC^(NKx2.5)+AMD3100组,将心梗未处理组、假手术组、正常小鼠组作为对照组。采用心脏彩超检测心梗小鼠心功能的变化及采用western blot检测NKx2.5及SDF-1、CXCR4蛋白的表达。结果体外BMSC^(NKx2.5)组SDF-1及CXCR4及转录因子NKx2.5的表达最高(P<0.05)。体内实验证实BMSC^(NKx2.5)组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),但当加入SDF-1-CXCR4轴抑制剂AMD3100后,心功能改善不明显。BMSC^(NKx2.5)组转录因子NKx2.5及SDF-1及CXCR4因子的表达最高(P<0.05),但加入AMD3100组后SDF-1及CXCR4的表达明显下降。结论BMSC^(NKx2.5)可以通过增强SDF-1/CXCR4轴促BMSC归巢改善心梗心功能。

人冠状动脉内SDF-1/CXCR4轴表达水平与斑块稳定性的相关性

目的 探讨基质细胞衍生因子(SDF)-1/CXCR4轴在人冠状动脉斑块稳定及猝死中的作用及相关性,并寻找其可能参与的信号通路。方法 收集尸检案例的冠脉标本77例,其中非冠心病猝死但明确诊断为冠心病患者24例(CHD组),冠状动脉粥样硬化性心脏病猝死者25例(SCD组),以非冠心病猝死并无动脉粥样硬化者28例为对照组。运用苏木素-伊红(HE)染色检测血管内膜厚度、坏死核心厚度、纤维帽厚度、血管腔面积分数;利用免疫组织化学技术、Western印迹检测冠脉内膜SDF-1、CXCR4及核转录因子(NF)-κB p65蛋白的表达量,分析其表达与斑块结构与其稳定性的关系。结果 与对照组比较,病变各组内膜厚度增高、纤维帽变厚、血管狭窄程度显著增高(P<0.05);病灶内SDF-1、CXCR4蛋白表达水平与内膜厚度、坏死区厚度及血管腔面积分数呈显著正相关(P<0.05)。与对照组比较,病变各组CXCR4与NF-κB p65通路蛋白的表达量显著升高(P<0.05),并呈显著正相关关系(r=0.918,P<0.001)。结论 人冠状动脉粥样硬化病灶内SDF-1/CXCR4轴的表达升高可能通过调节NF-κB相关信号通路从而影响斑块结构稳定性。

温阳逐瘀汤对肾阳虚脑缺血损伤大鼠SDF-1、CXCR4表达的影响

目的 观察温阳逐瘀汤对肾阳虚脑缺血损伤大鼠脑组织基质细胞衍生因子(SDF)-1及其受体CXC趋化因子受体(CXCR)4表达的影响,探讨温阳逐瘀汤防治脑缺血损伤可能的作用机制。方法 选取192只健康雄性SD大鼠先分为空白组(n=48)和肾阳虚模型组(n=144)。肾阳虚模型组肌注氢化可的松注射液21 d,采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中的肾阳虚证相关特异性指标环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量。将造模成功后的肾阳虚大鼠分为假手术组、模型组、温阳逐瘀汤组。空白组、假手术组、模型组灌胃等体积蒸馏水;温阳逐瘀汤组行脑缺血损伤造模术,灌胃温阳逐瘀汤。分别于灌胃3、7、14、21 d取材,采用苏木素-伊红(HE)染色法、Western印迹法和Real-Time PCR法检测脑组织SDF-1、CXCR4的mRNA及蛋白表达水平。结果 同一时间点,与空白组相比,假手术组SDF-1、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,模型组、温阳逐瘀汤组SDF-1、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组相比,温阳逐瘀汤组SDF-1、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论 温阳逐瘀汤可以有效改善肾阳虚缺血性脑卒中的缺血损伤,其作用机制可能是通过上调缺血脑组织中的SDF-1、CXCR4的mRNA及蛋白表达水平,进而发挥缺血脑损伤的保护作用。

白藜芦醇调控SDF-1/CXCR4通路对颞下颌关节骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

[目的]探究白藜芦醇(RES)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)大鼠软骨细胞凋亡的影响及在该过程中对基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)轴的调节机制。[方法]将36只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、CXCR4抑制剂组(AMD3100组)、RES低剂量组、RES高剂量组、RES高剂量+重组SDF-1组(RES高+SDF-1组),每组6只。苏木精-伊红(HE)和番红O-固绿染色观察软骨组织病理学变化;分离培养软骨细胞;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、细胞色素C(Cyt C)水平;蛋白免疫印迹分析(Western Blot)检测软骨细胞中caspase-9、Bcl-2、Bax、SDF-1、CXCR4蛋白表达。[结果]与对照组比较,模型组软骨组织结构层次紊乱,细胞数量减少,软骨着色明显减退,损伤评分、细胞凋亡率、iNOS、NO、Cyt C的水平及caspase-9、Bax、SDF-1、CXCR4蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,AMD3100组和RES低、高剂量组软骨组织结构层次逐渐明显,细胞数量增多,软骨着色增加,损伤评分、细胞凋亡率、iNOS、NO、Cyt C的水平及caspase-9、Bax、SDF-1、CXCR4蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);进一步加入重组蛋白SDF-1发现,SDF-1表达的升高逆转了高剂量RES对信号通路以及软骨细胞凋亡的抑制作用(P<0.05)。[结论]RES能够通过阻断SDF-1/CXCR4信号通路来抑制TMJOA大鼠的软骨细胞凋亡。

舒芬太尼通过调节SDF-1/CXCR4信号通路对脑出血大鼠的神经功能的改善作用

目的:探讨舒芬太尼通过调节SDF-1/CXCR4信号通路对脑出血(ICH)大鼠的神经功能恢复的作用及其潜在机制。方法:通过胶原酶诱导建立ICH后的脑损伤模型,将大鼠分为4组:对照组(假手术处理,sham组),ICH模型诱导组(ICH组),ICH+DMSO组(大鼠ICH模型后用DMSO处理),ICH+舒芬太尼组(大鼠ICH模型后用50 mg/kg·d^(-1)的舒芬太尼处理)。利用生物化学分析评估神经严重程度、脑含水量、神经元退化、神经元凋亡。检测氧化应激标记物和炎症因子的表达。采用免疫组化和蛋白质免疫印迹(western blotting)分析SDF-1/CXCR4信号通路活性。结果:与ICH组相比,ICH+舒芬太尼组可减轻神经系统损伤、脑含水量及细胞凋亡(P<0.05),抑制ICH后脑组织抑制丙二醛和促炎因子(IL-1β和TNF-α)的水平,提高总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和抗炎因子(IL-10)的水平(P<0.05)。舒芬太尼可抑制ICH后大鼠脑组织中SDF-1/CXCR4信号通路活性。结论:舒芬太尼可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路活性促进ICH大鼠的神经功能恢复。

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景:目前已有针对lncRNA\miRNA\mRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究,课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p,尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的:探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法:取36只新西兰兔,通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型,采用随机数字表法分4组,lncRNA组、miRNA组、ceRNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周,取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论:①苏木精-伊红与番红O固绿染色显示,4组软骨组织都有不同程度的退变表现,造模第4周时,lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失,细胞外基质破坏,出现表层糜烂、裂缝形成和软骨组织局部或全层缺失,并随时间延长软骨损伤程度逐渐加重,4组中miRNA组关节软骨炎症进展最缓慢;②qRT-PCR检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量高于其他3组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量低于其他3组(P<0.05);造模后第8,12周,miRNA组软骨组织中的NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量低于ceRNA组、对照组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);③Western Blot检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量始终低于其他3组(P<0.05);miRNA组造模后第8,12周软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);④结果表明,miR-146a-5p作为NONHSAT248596.1的作用靶点会受到其竞争性内源性RNA的作用造成活性被抑制,NONHSAT248596.1作用于miR-146a-5p后调控基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴,影响骨关节炎软骨组织中基质金属蛋白、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达,造成细胞外基质的降解及蛋白多糖的丢失。

系统性红斑狼疮患者外周血CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞上PD1表达及意义

目的探讨程序性死亡分子1(PD1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞上的表达及临床意义。方法流式细胞术检测47例SLE患者、35例健康对照者(HC)外周血PD1^(+)CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞百分率和CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达平均荧光强度(MFI),比较两组之间的差异,分析其与SLE临床、实验室指标、浆母细胞的相关性,并分析其预测SLE的价值。结果(1)SLE患者PD1^(+)CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞百分率高于HC,差异有统计学意义(P=0.0083,U=540.5);SLE患者CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI高于HC,差异有统计学意义(P<0.0001,U=187.0)。(2)SLE患者PD1^(+)CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞百分率与补体C3(r_(s)=-0.3352,P=0.0228)、抗SSA抗体(P=0.0166,t=2.5)、抗组蛋白抗体(P=0.0303,t=2.3)、治疗(P=0.0202,t=3.4)、浆母细胞比例(r_(s)=0.3871,P=0.0072)相关;SLE患者CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI与系统性红斑狼疮疾病活动性评分(SLE-DAI)(r_(s)=0.4031,P=0.0050)、红细胞沉降率(r_(s)=0.3561,P=0.0177)、C-反应蛋白(r_(s)=0.3374,P=0.0289)、红细胞(r_(s)=-0.2970,P=0.0426)、血红蛋白(r_(s)=-0.3029,P=0.0385)、血细胞比容(r_(s)=-0.3816,P=0.0081)、淋巴细胞计数(r_(s)=-0.3937,P=0.0062)、淋巴细胞百分比(r_(s)=-0.3912,P=0.0065)、中性粒细胞百分比(r_(s)=0.3150,P=0.0311)、NLR(r_(s)=0.3730,P=0.0098)、LMR(r_(s)=-0.4315,P=0.0025)、dNLR(r_(s)=0.3150,P=0.0311)、anti-Ro52(P=0.0295,t=63.5)、治疗(P=0.0355,W=21)、浆母细胞比例(r_(s)=0.3158,P=0.0306)相关。(3)逻辑回归分析显示CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI是SLE的危险因素。(4)ROC曲线分析显示CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI预测SLE的AUC为0.886,构建了基于CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI和HGB的预测模型,预测模型的AUC为0.979,预测模型与SLEDAI呈正相关(r_(s)=0.3136,P=0.0303)。结论SLE患者升高的外周血PD1^(+)CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞百分率、CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI与疾病严重程度及活动性相关,且构建了基于CXCR5^(-)CD4^(+)T细胞PD1表达MFI和HGB的SLE预测模型。

CXCR4/SDF-1轴调节人肺腺癌PC-9细胞对Bends细胞血脑屏障模型功能的影响

目的:通过建立体外血脑屏障(blood brain barrier,BBB)模型,探讨人肺腺癌PC-9细胞在CXCR4/SDF-1轴作用下对BBB紧密连接蛋白的影响。方法:利用永生化的小鼠脑微血管内皮细胞Bends进行单层培养,建立体外BBB模型;通过跨内皮细胞电阻(transendothelial electrical resistance,TEER)测定及荧光素钠通透性实验判定体外BBB模型的功能状态以及观察PC-9细胞对体外BBB模型功能的影响。Western blotting检测PC-9细胞在CXCR4抑制剂AMD3100、SDF-1单独或联合(1μg/ml AMD3100,100 ng/ml SDF-1,AMD3100+SDF-1)作用下对BBB模型功能和内皮细胞紧密连接蛋白表达的影响,Transwell迁移实验检测CXCR4/SDF-1轴对PC-9细胞跨BBB模型细胞层迁移能力的影响。结果:Bends细胞单层培养可形成紧密连接的"屏障"并产生较高的TEER,第96 h达到(182.13±5.19)Ω·cm^2;同时行荧光色钠通透性实验结果显示,BBB具有良好屏障性能,其通透率低于空白对照组(P<0.05)。PC-9细胞作用后,BBB模型TEER逐渐降低,第24 h降至(46.7±4.35)Ω·cm^2;同时BBB通透率较作用前显著提高(P<0.05)。PC-9细胞在AMD3100作用下能够上调内皮细胞紧密连接蛋白的表达(P<0.05);AMD3100处理组的PC-9细胞穿过BBB的细胞数较空白组明显减少[(43±2)vs(81±2)个,P<0.05]。结论:AMD3100能够减弱PC-9细胞对Bends细胞建立的体外BBB模型紧密连接的破坏能力。