不同分子分型乳腺癌组织中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7的表达及临床意义

目的:探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法:应用实时定量PCR检查80例不同分子分型乳腺癌组织中的趋化因子CXCL12 mRNA及其受体CXCR4和CXCR7 mRNA的表达,采用免疫组织化学技术检测160例不同分子分型乳腺癌细胞组织中趋化因子CXCL12蛋白及其受体CXCR4和CXCR7蛋白的表达,并分析它们在不同分子分型乳腺癌中的表达差异。结果:CXCL12 mRNA及其受体CXCR4和CXCR7 mRNA在Luminal A和Luminal B型中表达无差异,在HER-2过表达型和三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)两个类型之间的表达也无差异,但三者在HER-2过表达型和TNBC中的表达明显高于Luminal A和Luminal B型(均P<0.05);CXCL12蛋白、CXCR4蛋白和CXCR7蛋白在HER-2过表达型和TNBC中的阳性表达率均明显高于Luminal A和Luminal B型(均P<0.05),但在Luminal A和Luminal B之间及HER-2过表达型和TNBC之间的表达无差异。结论:趋化因子CXCL12及其受体CXCR4和CXCR7在HER-2过表达型乳腺癌和TNBC组织中高表达,可能与该类型乳腺癌预后较差有关,抑制其表达可为该类乳腺癌的治疗提供重要途径。

趋化因子受体CXCR4在鼻咽癌细胞中的表达

背景与目的:研究表明,趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1(stromalcell-derivedfactor1)与肿瘤的增殖、分化和转移等恶性表现密切相关。本研究通过观察分化程度和增殖能力不同的鼻咽癌细胞中CXCR4的表达,初步了解CXCR4与鼻咽癌细胞恶性表现的关系。方法:分别以全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,RA)和端粒酶反义核酸处理鼻咽癌CNE1(高分化)和CNE2Z(低分化)细胞,原位杂交技术检测CXCR4mRNA表达,免疫组化法检测CXCR4蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,MTT法检测细胞增殖能力。结果:CXCR4mRNA和CXCR4蛋白在鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞均呈强阳性表达,且CNE2Z细胞表达强度显著高于CNE1细胞。经1×10-5mol/L和1×10-4mol/LRA作用后,与对照组比较,CNE1细胞G1期细胞明显增多,CNE2Z细胞S期细胞明显增多,同时两者的CXCR4mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.01),其中1×10-4mol/LRA作用较1×10-5mol/LRA作用强(P<0.01)。经端粒酶反义核酸作用后,CNE1和CNE2Z细胞增殖均明显受抑制,CXCR4蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CXCR4在鼻咽癌细胞高表达,其表达水平与鼻咽癌细胞的分化程度和增殖能力有关。

SDF-1和及其受体CXCR4的结构与功能

近年基质细胞衍生因子 1(SDF 1)及其受体CXCR4的构效关系与相互作用机制研究进展很快 .研究证实 ,SDF 1N末端 (Nt)氨基酸残基是与CXCR4相互作用的关键区域 .SDF 1的 β链与蛋白聚糖 (GAG)作用而调节SDF 1的功能 ,C端α螺旋有助于维持SDF 1的活性构象 ;CXCR4Nt、ECL2和 (或 )ECL3对于SDF 1和HIVgp12 0对CXCR4的识别和激活都很重要 ,但在识别序列上存在部分交叉重叠 .SDF 1 CXCR4与肿瘤转移密切相关 ,本文还就SDF 1与CXCR4在肿瘤治疗方面的应用进行了讨论 .

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的 :以人肺癌高、低转移细胞株 95D、95C为研究对象 ,研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法 :采用RT PCR检测 95D、95C细胞CXCR4mRNA的表达情况 ;以PMA活化肿瘤细胞 ,研究CXCR4mRNA表达水平与细胞活性状态的关系 ;应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能 ;通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF 1α和裸鼠组织匀浆液对 95D细胞的趋化迁移作用 ;通过MTT法测定 95D细胞对SDF 1α作用的增殖反应。结果 :95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4 ,且其表达水平与细胞活性状态有关 ;CXCR4特异性配件SDF 1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化 95D细胞的迁移 ,SDF 1α还可促进 95D细胞的增殖。结论 :95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的:探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与临床病理学参数的关系。方法:采用半定量RT-PCR和免疫组织化学法分别检测121例乳腺癌新鲜组织及对应75例石蜡组织中CXCR4 mRNA及蛋白的表达。结果:乳腺癌中CXCR4m RNA及蛋白的表达阳性率分别为30.58%、68%;CXCR4 mRNA表达与蛋白表达呈显著正相关(χ2=5.049,P<0.05),且均与淋巴结转移关系密切,淋巴结转移阳性组CXCR4表达明显高于阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CXCR4表达可能在促进乳腺癌淋巴结转移过程中起重要作用,其表达可作为判断乳腺癌恶性生物学行为并预测转移风险的一个指标,抑制CXCR4表达及其活性可为临床阻断癌细胞转移提供新的抗趋化治疗途径。

趋化因子受体CXCR4在甲状腺癌中的表达

目的探讨趋化因子受体CXCR4在甲状腺癌中的表达及临床意义,为临床治疗甲状腺癌寻求新的治疗靶点提供依据。方法采用免疫组化SP染色法检测甲状腺癌、结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中CXCR4表达差异,以及CXCR4在甲状腺癌中的表达与患者肿瘤病理类型、淋巴结转移状态、年龄及性别的关系。结果CXCR4在甲状腺癌组织中高表达,与结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中表达差异有统计学意义,而且与患者淋巴结转移状态、病理类型密切相关,与患者年龄、性别无关。结论CXCR4在甲状腺癌的发生发展中可能起到重要作用,CXCR4在甲状腺癌中高表达,与患者淋巴结转移状态、病理类型密切相关,可作为甲状腺癌患者预后的指标,本研究为临床寻找新的甲状腺癌治疗靶点提供了重要依据。

脑胶质瘤趋化因子受体CXCR4表达的临床意义

目的探讨CXCR4表达与人脑胶质瘤分级、血管生成和预后的相关性。方法采用免疫组织化学SABC法检测48例胶质瘤组织中CXCR4、CD34的表达。结果32例CXCR4呈阳性表达,占66.7%;不同病理分级(WHOⅠ￣Ⅳ级)各组CXCR4表达有显著性差异(χ2=4.875,P<0.05);生存期3年以上组与3年以下组间有显著性差异(χ2=7.356,P<0.05);CXCR4的表达与微血管密度(MVD)密切相关(r=0.674,P<0.01)。结论CXCR4表达异常在胶质瘤发生中具有重要作用;CXCR4与肿瘤的病理分级、病人预后密切相关,并可能参与胶质瘤血管内皮细胞的生成。

趋化因子受体CXCR4活化促进人胶质瘤干细胞迁移及其机制探讨

目的:研究趋化因子受体CXCR4活化对胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)迁移能力的影响,并探索其下游相关信号通路。方法:采用逐渐添加神经干细胞培养液的方法从人胶质细胞瘤U87细胞株中获得GSCs,利用Transwell小室法评估CXCR4活化对GSCs迁移能力的影响,并进一步应用Western印迹法观察CXCR4下游信号通路的激活情况。结果:CXCR4的配体CXCL12以浓度依赖的方式促进GSCs迁移,同时伴有Akt磷酸化增加;CXCR4特异性拮抗剂AMD3100能够抑制此效应。PI3K/Akt通路抑制剂LY294002可通过抑制Akt磷酸化而抑制CXCL12诱导的GSCs迁移。结论:CXCR4活化后激活其下游的PI3K/Akt信号通路,进而促进GSCs迁移,这可能是GSCs高侵袭特性的机制之一。

肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的影响

目的:观察肺岩宁(Feiyanning,FYN)方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)mRNA及蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组(肺岩宁加化疗组)。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组(P<0.05),而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。

乳腺癌组织趋化因子受体CXCR4的表达与意义

目的探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法用免疫组织化学方法检测45例乳腺癌及10例乳腺纤维腺瘤组织中趋化因子受体CXCR4的表达，并对原位癌与发生转移的癌组织中的CXCR4的表达率进行比较。结果在乳腺癌组织上检测到趋化因子受体CXCR4的表达（表达率为62．2％），其中癌组织发生转移的CXCR4的表达率为69．4％，未发生转移的表达率为33．3％，而乳腺纤维腺瘤组织中未发现CXCR4的表达。结论乳腺癌组织上有趋化因子受体CXCR4的表达，其表达可能在乳腺癌的发生、发展和转移中起重要作用。

子宫内膜癌腺体及间质细胞中基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4的表达

目的:检测基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体CXCR4mRNA和蛋白在子宫内膜癌细胞系及组织中的表达。方法:应用免疫组织化学和RT-PCR技术,检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞,44例子宫内膜癌组织,26例非典型增生子宫内膜、单纯增生子宫内膜和正常子宫内膜组织中SDF-1和CXCR4mRNA和蛋白表达水平。结果:HEC-1A和Ishikawa细胞均表达CXCR4mRNA;Ishikawa细胞中SDF-1mRNA弱表达,而HEC-1A细胞中SDF-1mRNA未见表达。CXCR4和SDF-1在正常和良性病变的子宫内膜组织腺体细胞中的阳性表达率为100%,在子宫内膜癌组织的腺体细胞中的阳性表达率分别为90.9%和93.2%。各种子宫内膜组织中间质细胞CXCR4和SDF-1的表达均显著弱于腺体细胞。在子宫内膜癌腺体细胞和间质细胞中CXCR4和SDF-1的表达均显著弱于正常及良性病变者。在低分化的子宫内膜癌腺体细胞中CXCR4和SDF-1的表达弱于高分化者。结论:CXCR4和SDF-1在子宫内膜癌细胞系、子宫内膜组织及内膜癌组织中的表达存在差异,在内膜癌组织中其表达均显著弱于正常及良性病变者。

趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌中的表达

目的:研究趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌组织、肝癌MHCC97细胞、人脐带血管内皮细胞(HUVEC)中的表达,同时检测肝癌患者腹水中CXCR4的配体CXCL12的含量,为进一步探讨CXCR4在肝癌细胞转移中的作用奠定基础。方法:利用半定量RT-PCR和蛋白印迹方法检测MHCC97细胞、HUVEC细胞、21例不同时期的肝细胞癌组织及17例正常肝组织中CXCR4的表达水平,同时ELISA检测18例肝癌患者腹水中CXCL12的含量。结果:在肝细胞癌组织、肝癌细胞株及血管内皮细胞中,CXCR4在mRNA及蛋白水平的相对表达量分别为2.21±1.09、2.14±1.15、1.72±1.20及1.51±0.12、1.76±0.25、1.89±0.24,正常肝脏组织在mRNA及蛋白水平均未检测到CXCR4的表达。肝细胞癌癌性腹水定量检查结果显示,CXCL12含量为783～8364pg/ml(中位数为6871pg/ml)。结论:肝细胞癌组织和细胞中存在着CXCR4的高表达,但与肝癌临床分期无显著性相关,同时肝癌患者腹水中存在CXCL12的含量升高,这提示CXCR4可能在肝癌的转移中发挥重要的作用。

CXCL12及受体CXCR4在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义

目的:探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在卵巢上皮性癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测6例正常卵巢表面上皮、44例卵巢上皮性癌原发灶和30例相应大网膜转移灶组织中的CXCL12和CXCR4蛋白表达。结果:正常卵巢表面上皮无CXCL12和CXCR4蛋白表达;卵巢上皮性癌原发灶的CXCL12和CXCR4表达阳性率分别为91%和59%。CXCL12表达强度与术中腹水量有显著相关性(P=0.014)。难治复发组的CXCR4阳性率(81%)显著高于无复发组(28%,P<0.001)。单因素分析显示:CXCR4阳性表达的患者中位数肿瘤无进展生存时间和总生存时间(15个月、27个月)明显短于CXCR4阴性表达者(>21个月、>32个月,分别为P<0.001和P=0.017)。多因素分析显示:CXCR4表达和残余灶大小是影响卵巢上皮性癌患者的肿瘤无进展生存时间和总生存时间的独立预后因素。结论:CXCR4在卵巢上皮性癌中的表达阳性率较高,是影响其预后的独立指标之一。

SDF-1及其受体CXCR4在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义

目的探讨趋化因子SDF-1及其受体CXCR4在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测10例正常卵巢上皮组织、21例卵巢良性肿瘤、19例交界性卵巢肿瘤、30例卵巢癌原发灶和11例相应盆腔腹膜转移灶组织中SDF-1和CXCR4蛋白表达情况。结果正常卵巢上皮组织SDF-1和CXCR4表达阴性,卵巢良性肿瘤低表达SDF-1(9.52%),CXCR4表达阴性,与正常卵巢及良性卵巢肿瘤相比,交界性卵巢肿瘤、卵巢癌原发灶及转移灶表达较高水平的SDF-1与CXCR4(63.16%、93.33%、90.91%;47.37%、63.33%、63.64%)。交界性卵巢肿瘤中SDF-1和CXCR4表达无显著相关性(P=0.460);而卵巢癌原发灶中SDF-1和CXCR4表达呈正相关(P<0.05);SDF-1的表达与卵巢癌患者的临床分期、组织学分级无显著相关性(P>0.05),而与患者有无腹水有一定相关性(P<0.05),CXCR4的表达与卵巢癌患者的临床分期、组织学分级及患者有无腹水无显著相关性(P>0.05)。结论SDF-1/CXCR4的表达与细胞的恶性转化有关,可能参与了卵巢恶性肿瘤的发生、发展、侵袭与转移。

趋化因子受体CXCR4的结构与功能

目的 认识趋化因子受体CXCR4之结构与功能的关系。方法 分别建立野生型趋化因子受体CXCR4及CXCR2、5个CXCR4/CXCR2嵌合受体和 2个CXCR4突变受体的CHO稳定表达细胞株 ,以配体 -受体结合试验、细胞微生理监测术、体外细胞 -细胞融合实验为手段观察各变异受体与重组人SDF 1β的结合能力、在受刺激后的信号转导能力、以及作为HIV 1辅助受体的能力。结果 有 4个变异受体 (2 444a ,444 2 ,42 2 2 ,CXCR4 Tr)保持了程度不同的与SDF 1β的结合能力 ,其中 2个 (2 444a ,CXCR4 Tr)保留了程度不同的信号转导能力 ;除 1个变异受体 (42 2 2 )外 ,其它变异受体都程度不同的具有辅助受体功能。结论 CXCR4以多个结构区域参与与SDF 1β的相互作用。其N端胞外区足以具有与SDF 1β的高亲和性结合能力。第三环链对CXCR4的结合能力也有其特定的贡献。CXCR4的信号传导不仅需要保守结构DRY盒 ,而且还需要贯穿整个分子的 7个跨膜区域在受配体刺激后形成并维持一定的构象。CXCR4的辅助受体功能结构域与配体结合功能结构域间存在交叉重叠。

趋化因子受体CXCR4在骨髓基质细胞中的表达及分析

目的研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,分析其表达规律。为改善和提高骨髓基质细胞的增殖和迁移能力寻找更有效的途径。为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察其增殖及生长特性,应用免疫组化和RT-PCR方法对MSCs的CXCR4受体及CXCR4 mRNA表达水平进行检测,并应用神经胶质细胞进行对比,探讨其表达异常的因素。结果骨髓基质细胞CXCR4m RNA表达水平稳定,CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,且随传代数增加而减少。结论CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,如果促进其CXCR4表达将会极大增强骨髓基质细胞的增殖与迁移能力。

二次脑损伤后大鼠脑皮层代谢型谷氨酸受体亚型4mRNA的变化

目的 研究弥漫性脑损伤 (DBI)及其合并二次脑损伤 (SBI)后大鼠脑皮层代谢型谷氨酸受体亚型 4(m Glu R4)的变化及意义 .方法 SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、单纯 SBI组、单纯 DBI组及合并 SBI组 .在 Marmarou弥漫性脑损伤模型的基础上 ,制成 SBI模型 ,于伤后 1,6 ,12 ,2 4和 72 h进行 HE染色和代谢型谷氨酸受体 4亚型(m Glu R4) m RNA原位杂交 .结果 与正常对照组相比 ,假手术组和单纯 SBI组阳性神经元数以及信号灰度均无明显改变 (P>0 .0 5 ) ;与假手术组相比 ,单纯 DBI组和合并 SBI组 ,m Glu R4m RNA表达于脑损伤后 1h即有明显增加 (P<0 .0 1) ,单纯 DBI组在 6 h达到高峰 ,合并 SBI组于 12 h达到高峰 ,此刻与单纯 DBI组相比 ,合并 SBI组亦明显增加 (P<0 .0 1) .结论 m Glu R4参与了 DBI和 SBI的病理生理过程 。

趋化因子受体CXCR4反义RNA重组表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

目的 :构建趋化因子受体CXCR4反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV 1研究。方法 :用RT PCR法从健康人外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMCs)中获得目的基因 ,并以正、反两个方向定向插入到逆转录病毒载体 pLXSN。重组载体用脂质体转染剂 (lipofectAMINE)转染PA317包装细胞 ,抗G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(fluorogenic quantitativePCR ,FQ PCR)测定假病毒滴度 ,进一步感染NIH 3T3细胞。结果 :CXCR4正、反义RNA的真核表达载体 ,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH 3T3细胞 ,目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 :从PBMCs中获得的目的基因通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达 ,为进一步研究CXCR4反义RNA的抗HIV 1作用奠定了基础。

IV-1协同受体CXCR4、CCR5及相关趋化因子SDF-1在胎盘的表达

目的 :研究HIV 1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF 1在人胎盘组织的表达 ,探索HIV 1子宫内垂直传播的分子机制。方法 :半定量RT PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5mRNA水平 ;免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达 ;原位杂交及免疫组化分析SDF 1在早孕胎盘的表达 ;ELISA测定滋养细胞SDF 1的动态分泌水平。结果 :各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5mRNA ;CXCR4蛋白定位于滋养细胞 ,而CCR5蛋白定位于绒毛基质中。滋养细胞可转录并翻译SDF 1,且能分泌可溶性SDF 1。结论 :滋养细胞同时表达CXCR4及SDF 1,SDF 1可能通过降调CXCR4而拮抗X4 HIV 1感染胎儿细胞 ;R5 HIV 1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5 + 基质细胞和 或Hofbauer细胞 ,从而发生子宫内垂直传播。