CY5.5标记VEGF125-136小肽的合成及其体外靶向活性检测

以固相合成法合成VEGF125-136小肽及随机小肽,并用ELISA实验检测其活性;同时用CY5.5标记VEGF125-136小肽,并进行细胞荧光实验,从而为进一步的靶向对比剂的合成及影像诊断提供物质基础。

基于荧光染料Cy5.5标记的引物延伸法鉴定细菌RNA剪切加工位点

【背景】传统引物延伸法常与放射性标记结合使用,但由于放射性元素半衰期短、危害人体健康及严格的操作要求等限制了其在一般实验室的广泛使用。因此,开发新型非放射性引物延伸法成为当前研究的热点。【目的】建立非放射性的引物延伸法,并利用该方法实现对细菌RNA剪切加工位点的鉴定。【方法】将包含RNA剪切位点的序列克隆至双荧光报告系统,然后利用荧光染料Cy5.5标记的特异性靶向mcherry寡核苷酸引物进行延伸,并辅以Northern blotting、RT-qPCR等技术,确定RNA剪切加工的精确位点。【结果】鉴定了来自解纤维梭菌cip-cel mRNA中的2个剪切加工位点均位于颈环结构下游的单链区域,且在剪切位点附近未发现保守序列。【结论】基于Cy5.5标记的引物延伸法能够精确鉴定RNA剪切加工位点,且与传统的放射性引物延伸法相比,该方法具有更高的安全性和更快的检测速度,能够满足一般实验室的实验要求。

靶向VEGF165多模态分子成像探针制备与体内外靶向成像研究

目的构建肿瘤血管内皮生长因子-165(VEGF165)靶向多模态分子探针CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO,观察其体内、外对VEGF165靶向结合能力。方法用N-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺交联剂将USPIO与CY5.5-VEGF165-Aptamer连接;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CY5.5-VEGF165-Aptamer与VEGF165的体外结合能力。建立BEL-7402腋下肝癌荷瘤鼠模型,设计实验组尾静脉注射CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO,对照组注射CY5.5-USPIO,多时间点采集图像,选感兴趣区测量荧光强度,观察两组异同。设计实验组与对照组行MR平扫及多时间点增强扫描,观察两组肿瘤光学及MRI信号强度改变差异。结果 CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO探针理化性质符合对比剂的要求,粒径小于30 nm,饱和磁化强度是35 emu/g左右, Cy5.5发射波峰在707 nm附近。ELISA实验表明CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO仅能与VEGF165结合,而不能与VEGF121结合。荧光图像显示实验组尾静脉给药1 h后出现轻度强化,强化峰值为3 h,6 h强化作用消失。MRI图象表明荷瘤鼠实验组肿瘤在3 h出现明显负性强化,6 h强化作用消失,而对照组相应时间点无强化效应。结论 CY5.5-VEGF165-Aptamer-USPIO能在体内、外与VEGF165特异性结合,可望用于VEGF165在体靶向荧光及MRI成像。

关节炎近红外荧光脱氧核糖衍生物的光学成像实验研究

目的:研究近红外荧光分子探针,Cy5.5葡萄糖胺(Cy5.5-2DG),能否在活体水平上对小鼠诱导性关节炎(CIA)炎症进行显像。方法:对患有CIA的小鼠注射18F-脱氧葡萄糖(18F-FDG),1h后,进行Micro PET成像。在18F-FDG放射性衰变以后,通过尾静脉对小鼠注射Cy5.5-2DG。Cy5.5-2DG对关节炎组织的靶向性和保留性通过Xenogen IVIS 200光学成像仪进行评估和量化分析。患病小鼠体内的炎症组织通过18F-FDG-Micro PET扫描清晰可见,从该小鼠体内的Cy5.5-2DG的近红外荧光成像可以看出Cy5.5-2DG在关节组织的分布模式和18F-FDG极其相似;定量分析进一步表明关节炎组织在1 h后对18F-FDG的摄取量和Cy5.5-2DG在不同时刻的摄取量有很好的相关性(r2>0.65)。结果:18FFDG的摄取量和Cy5.5-2DG累积量之间良好的相关性,为进一步研究Cy5.5-2DG用于评估药物消炎治疗提供了依据。结论:NIRF葡萄糖衍生物Cy5.5-2DG可以检测小鼠手掌的关节炎组织,更重要的是Cy5.5-2DG在关节炎组织中的累积程度与18F-FDG摄取量有很大的正相关。