p16、CDK4、cyclinDl在乳腺癌中的表达和预后的关系

目的：探讨p16、CDK4、cyclinD1在乳腺癌组织中的表达和预后的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测86例术前均未作放化疗的乳腺癌组织中p16、CDK4、cyclinD1的表达，和临床特征(年龄、病理分级、ER、PR、淋巴转移等)的关系，并分析其与预后的关系。结果：(1)p16蛋白阳性表达率为58．1％，阳性产物主要位于脑核内，少数可见脑浆及脑膜染色；CDK4阳性表达率为36．0％，阳性产物主要位于细胞质和细胞核中；cyclinD1蛋白阳性表达率为39．5％，阳性产物主要位于细胞核中。(2)p16在I级、Ⅱ级侵润性导管癌中的阳性表达率分别为70．5％和45．2％(P<0.05)；在淋巴结阴性组与淋巴结阳性组中的阳性表达率分别为79．2％和31．6％(P<0.01)；≤50岁组和≥50岁组阳性率分别是56．3％和60．5％(P>0.05)：ER阴性和阳性组分别为47．4％和66．7％(P>0．05)；PR阴性和阳性组分别是54．3％和62．5％(P>0．05)。CDK4在I级、Ⅱ级侵润性导管癌组织中的阳性表达率分别为25．0％和47．6％(P<0．05)：在淋巴结阴性和阳性的乳腺癌组织中阳性率分别为20．8％和55．3％(P<0.001)：ER阴性和阳性组分别是44．7％和29．2％(P)10．仍)；PR阴性和阳性组分别是39．1％和32．5％(P>0．05)：≤50岁组和≥50岁组阳性率分别是37．5％和34．2％(P>0．05)。cyclinD1在I级、Ⅱ级侵润性导管癌组织中的阳性表达率分别为34．1％和45．2％(P>0．05)；在淋巴结阴性和阳性的乳腺癌组织中阳性率分别为25．0％和57．9％(P<0．02)：ER阴性和阳性组分别为44．7％和35．4％(P>0．05)；PR阴性和阳性组分别是37．0％和42．5％(P>O．05)；≤50岁组和≥50岁组阳性率分别是43．8％和34．2％(P>0．05)。(3)p16与CDK呈负相关(P<0．01)，与cyclinD1呈负相关(P<0．01)；CDK4与cyclinD1呈正相关(P<0.05)。(4)单因素分析提示影响总生存率的因素有：组织学分级、淋巴结转移、ER、PR、p16、CDK4、cyclinD1(P<0．05)。(5)多因素生存分析结果表明p16和淋巴结转移是影肉乳腺癌患者总生存率的独立预后因素(P<0．01)。结论：细胞周期调节因子p16、CDK4、cyclinD1与乳腺癌的发生、发展密切相关，可以作为判断肿瘤侵润转移、指导治疗和估计预后的参考指标，特别是p16蛋白的表达水平及淋巴结转移可能是判断乳腺癌术后生存的独立有效指标，而综合应用上述指标可能会更有帮助。

子宫内膜腺癌组织中cyclinD1、PCNA和Ki-67的表达

目的 探讨cyclinD1、PCNA和Ki 6 7在子宫内膜腺癌组织中的表达及其意义。 方法 采用免疫组化S P法检测正常增生期子宫内膜 10例、单纯性增生 30例、复杂性增生 30例、非典型增生 30例和子宫内膜腺癌 4 7例组织中cyclinD1、PCNA和Ki 6 7的表达。结果 cyclinD1在增生期子宫内膜组织中未见阳性表达 ,在单纯性增生、复杂性增生、非典型增生和子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率分别为 13 3%、16 7%、30 0 %和 5 7 8%。非典型增生和子宫内膜腺癌组织阳性表达率高于增生期宫内膜、单纯性和复杂性增生 (P <0 0 5 ) ,cyclinD1蛋白表达与子宫内膜腺癌临床分期、肌层浸润和淋巴结转移呈正相关 (P<0 0 5 ) ,而与肿瘤的分化程度无关 (P >0 0 5 )。PCNA和Ki 6 7在非典型增生组标记指数 (LI)高于增生期宫内膜、单纯性和复杂性增生组 ,子宫内膜腺癌组高于非典型增生组 (P <0 0 5 ) ,PCNA和Ki 6 7LI与肿瘤的分化程度、临床分期、肌层浸润和淋巴结转移呈正相关 (P <0 0 5 )。PCNA和Ki 6 7在cyclinD1阳性表达组的LI高于阴性组 (P <0 0 5 )。结论 cyclinD1蛋白过度表达可能在子宫内膜癌的发生、发展中起重要作用 ,其作用途径可能是通过促进细胞增殖而实现的。

Stat3通路相关基因在散发性大肠管状腺瘤癌变中的表达及意义

目的探讨Stat3及CyclinD1、Bcl-xL在散发性大肠管状腺瘤癌变过程中的可能作用。方法采用免疫组化方法检测107例散发性大肠管状腺瘤异型增生及癌变组织中Stat3和CyclinD1、Bcl-xL在蛋白水平的表达情况。结果腺瘤伴异型增生组和癌变组中的Stat3蛋白的表达明显高于正常大肠黏膜组(P=0.000),且癌变组中Stat3蛋白的表达高于腺瘤伴异型增生组(P=0.003);腺瘤伴异型增生组和癌变组中CyclinD1蛋白的表达均明显高于正常大肠黏膜组(P=0.000),且癌变组中CyclinD1蛋白的表达高于腺瘤伴异型增生组(P=0.000);大肠管状腺瘤伴异型增生组和癌变组中Bcl-xL在蛋白水平的阳性表达率均明显高于正常大肠黏膜组(P=0.000),而且癌变组中Bcl-xL的表达明显高于腺瘤伴异型增生组(P=0.000);Stat3、CyclinD1和Bcl-xL均随腺瘤异型增生程度的增高呈递增趋势。Stat3与Cy-clinD1、Bcl-xL的表达存在正相关关系。结论Stat3、CyclinD1和Bcl-xL可能在散发性大肠管状腺瘤癌变过程中起一定的作用。

超声引导细针穿刺标本BRAF V600E及CyclinD1联合检测对于甲状腺癌患者颈部淋巴结转移的预测价值

目的探讨利用超声引导细针抽吸标本进行BRAF V600E与CyclinD1联合检测对于甲状腺癌患者颈部淋巴结转移的预测价值。方法我院2015-08~2016-12收治的经超声引导细针抽吸细胞学检查确诊的甲状腺癌患者56例,所获得标本检测BRAF V600E和CyclinD1。对BRAF V600E和CyclinD1检测结果与随访结果进行回顾性分析。结果本组病例穿刺取材成功率为100%。56例患者中,39例检出BRAF V600E突变,突变检出率为69.6%;40例CyclinD1阳性表达,阳性表达率为71.4%。在30例既检测出BRAF V600E突变又发生CyclinD1阳性表达的病例中,手术病理发现颈部淋巴结转移18例,发生率为60%。其余26例病例中,手术病理发现颈部淋巴结转移5例,发生率为19.2%(5/26),既检测出BRAF V600E突变又发生CyclinD1阳性表达的病例颈部淋巴结转移发生率明显高于其余病例。结论利用超声引导细针抽吸标本进行BRAF V600E与CyclinD1联合检测对于甲状腺癌患者颈部淋巴结转移有一定的预测价值。

食管癌中p53、p21、p16、cyclinD_1、CDK_4免疫组化检测

目的 探讨p5 3、p2 1、p16、cyclinD1 、CDK4 蛋白在食管癌发生中的意义及其相互间的作用。方法 采用LSAB免疫组化染色法 ,对 4 3例食管癌手术标本的p5 3、p2 1、p16、cyclinD1 、CDK4 蛋白进行标记。结果 在鳞癌组织中 5种抗体的阳性物质存在于细胞核中和 或胞浆中 ,在正常鳞状上皮主要存在于核中 ,且从正常鳞状上皮→癌旁不典型增生→鳞癌组织 ,p5 3的阳性表达逐渐上升 ,p2 1的阳性表达却随之下降 ;cyclinD1 、CDK4 的阳性率则随p2 1的下降而呈上升趋势 ;另外 ,p16的阳性率逐渐下降 ;同样cyclinD1 、CDK4 的阳性率则随p16的下降而逐渐上升。统计学处理 ,正常上皮与癌组织之间五种抗体的阳性率有显著差异性 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,随着癌分化程度下降 ,p5 3、p2 1、p16的阳性率在Ⅱ级与Ⅰ级鳞癌之间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;但未检出cyclinD1 、CDK4 cyclinD1 、CDK4 与癌分化的关系。结论 p5 3、p2 1、p16、cyclinD1 、CDK4 cyclinD1 、CDK4 蛋白表达的变化是食管癌发生中的早期事件 。

温下方抑制肺癌A549细胞增殖及对PCNA Rb CyclinD1表达的影响

目的:研究温下方对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及对PCNA、Rb、CyclinD1表达的影响。方法:正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549细胞,MTT法检测含药血清对A549细胞的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察PCNA、Rb、CyclinD1的表达。结果:温下方大、小剂量含药血清组作用24h抑制率为29.85%、25.90%,作用36h抑制率为42.02%、35.10%;PCNA表达降低至3.08±0.97、3.15±0.88,CyclinD1表达降低至2.65±0.83、2.70±0.79。结论:温下方可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,明显降低PCNA、CyclinD1表达。

STAT5、cyclinD1和c-myc蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号转导和转录激活因子-5(STAT5)、细胞周期素D1(cyclinD1)和c-myc蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化SP法检测38例手术切除的NSCLC和20例正常肺组织中STAT5、cyclinD1和c-myc的表达。结果:STAT5、cyclinD1和c-myc在NSCLC中的表达明显高于正常肺组织(P<0.01),且它们的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期等病理因素无关(P>0.05)。在NSCLC中,STAT5和cyclinD1的表达呈正相关(P<0.05),而STAT5与c-myc的表达、cyclinD1和c-myc的表达无相关性。结论:在NSCLC中存在STAT5、cyclinD1和c-myc的过度表达,但与临床病理因素无关。在肿瘤的发生中,STAT5可能是通过上调cyclinD1表达,促进细胞周期进展和细胞转化,诱导肿瘤的形成。

视黄酸依赖反义cyclinD1 RNA表达载体的构建与鉴定

目的 构建人细胞周期素D1(CyclinD1)基因的视黄酸 (Retinoicacid ,RA)依赖反义RNA表达载体 ,为进一步在细胞内应用视黄酸诱导其表达从而发挥效应的肿瘤基因治疗奠定基础。方法 运用DNA重组技术构建含有RARE3 TK启动子的反义cyclinD1RNA真核表达载体 (pCI neo RARE3 TK AScyclinD1) ,经酶切、PCR以及DNA测序确认后 ,用脂质体方法转染HL 6 0细胞 (人早幼粒白血病细胞系 ) ,RA处理后 ,利用免疫组织化学方法检测细胞内靶基因cyclinD1的表达情况。结果 成功构建重组反义cyclinD1RNA表达载体 ,与预期设计路线相符 ;检测DNA序列与原始片段互补 ,且方向相反。ATRA处理转染和未转染HL 6 0细胞后 ,cyclinD1的表达均有所下降 ,其中转染组细胞的表达量要明显低于未转染组。结论 本实验成功构建了视黄酸依赖反义cyclinD1RNA表达载体 ;转染HL 6 0细胞后 ,反义cyclinD1的表达可受到RA的诱导调控。

17β-雌二醇对人涎腺黏液表皮样癌Mc3增殖周期的影响

目的 探讨 17β 雌二醇 (E2 )对体外培养的人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系增殖周期的影响。方法 以不同浓度、时间的E2 处理Mc3细胞 ,采用MTT法、流式细胞术、免疫组织化学染色法 ,检测E2 对人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系细胞群体倍增时间、细胞周期分布以及对CyclinD1、P2 7Kip1阳性表达的影响。结果 浓度分别为 10 -9、10 -8、10 -7mol/L的E2 作用于细胞第 5天时 ,MTT法测得E2 处理组细胞增殖促进率分别为 2 9%、5 4 %、5 9% ,CyclinD1的阳性表达率分别增加了 16 %、9%、2 4 % ,P2 7Kip1的阳性表达率分别减少了33%、30 %、5 5 %。流式细胞术检查结果显示 ,10 -7mol/L的E2 处理 12、18、2 4h后 ,细胞周期中S期细胞比相应对照组分别增加了 11 3%、6 6 %、4 6 7% ,细胞增殖指数分别增加了 6 0 %、3 6 %、2 0 5 5 %。结论 生理浓度的E2 可以促进CyclinD1的表达、降低P2 7Kip1的阳性表达 ,从而促进细胞周期G1/S期转换 ,增加S期细胞数量 ,加速DNA合成 ,刺激肿瘤发生。

CyclinD1和P21在肥大乳房腺体组织中的表达及意义

目的:探讨肥大乳房中Cycl i nD1和P21的表达级意义。方法:采用免疫组化SP法,分别测定了34例腺性肥大乳房和30例正常体积乳房腺体中Cycl i nD1和P21的表达。结果:Cycl i nD1在34例肥大乳房中,阳性18例,阳性率52.94%;30例正常对照组中,全部表达阴性,阳性率0,两组间比较具有统计学意义(P<0.05)。P21在34例肥大乳房中,3例阳性,阳性率8.82%;正常对照组30例,阳性9例,阳性率30.00%。两组间比较具有统计学意义(P<0.05)。结论:乳房肥大的形成可能与Cycl i nD1增多和P21减少有关。

β-catenin/Tcf复合体、cyclinD1、c-myc在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Wnt/β-catenin通路中β-catenin/Tcf复合体和下游主要靶基因cyclinD1、c-myc在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用。方法转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量;采用免疫组化方法检测79例不同分化类型的鼻咽癌组织中cyclinD1、c-myc的表达。结果通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株（CNE-2和HONE-1）中的表达是高分化鼻咽癌细胞株（CNE-1）的80.12-123.6倍。在角化性鳞癌与分化型非角化癌、分化型非角化癌与未分化型非角化癌中,cyclinDl表达有统计学差异（均P〈0.05）。c-myc的表达在未分化型非角化癌和分化型非角化癌之间比较,同样有统计学差异（P〈0.01）。结论低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的核内β-catenin/Tcf复合体c、yclinD1和c-myc的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用。

RNA干扰PI3K基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的采用RNA干扰技术沉默人卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/AKT信号转导通路中PI3Kp110α基因,观察其对SKOV3细胞增殖的影响,以期为卵巢癌的基因治疗提供可靠的理论依据。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,脂质体介导靶向P13Kp110α基因的小干扰RNA(siRNA)转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用免疫荧光双标法观察RNA干扰48h后对PCNA蛋白、CyclinD1蛋白的影响。结果 RNA干扰组PCNA蛋白、CyclinD1蛋白阳性率较对照组与空白载体组明显减少,而对照组与空白载体组相比无明显差别。结论 RNA干扰P13Kp110α基因可下调PCNA蛋白、CyclinD1蛋白的表达,抑制细胞增殖,这种调控可能是通过PI3K/AKT信号通路及其下游靶分子进行的。以PI3Kp110α为靶点的RNA干扰技术有望成为卵巢癌基因治疗的新策略。

RhoC基因对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖和cyclinD1基因的影响

目的研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的增殖及cyclinD1 mRNA表达的影响。方法将正、反义RhoC cDNA真核表达载体,转染人胆管癌细胞QBC939,检测细胞生长曲线,RT-PCR检测cyclinD1在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞(QBC939-V)、转染正义RhoC的QBC939细胞(QBC939-S)、转染反义RhoC的QBC939细胞(QBC939-AS)的mRNA相对表达量。结果与QBC939及QBC939-V对照细胞相比,QBC939-S体外生长较快,QBC939-AS体外生长较慢,cyclinD1表达在QBC939-AS与对照组减少(P<0.05),cyclinD1表达在QBC939-S与对照组增加(P<0.05)。结论 RhoC可能通过调节cyclinD1来调控QBC939的增殖能力。

Rb、CyclinD1在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的 研究 Rb、CyclinD1在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化LSAB法检测42例子宫内膜癌中Rb、CyclinD1的表达。结果42例子宫内膜癌中19例Rb表达阳性,占45.2％,Rb与子宫内膜癌的细胞分级、肌层浸润深度有关(P<0.05);17例子宫内膜癌CyclinD1表达阳性,占40.5％,CyclinD1与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);Rb、CyclinD1)协同表达15例,均为晚期或低分化癌。结论Rb、CyclinD1作为细胞周期调节因子参与子宫内膜癌的发生、发展,其协同作用促进子宫内膜癌的发展,且预后不良。

膀胱移行细胞癌p^(16)、cyclin D_1蛋白免疫组织化学研究

目的 : 探讨p16、cyclinD1蛋白表达与膀胱移行细胞癌 (TCC)生物学行为的关系。方法 用免疫组化SP法检测 48例膀胱TCC组织中p16、cyclinD1蛋白的表达。结果 膀胱TCC组织中p16蛋白阳性表达率为 45 .8% ,与癌组织病理分级、临床分期密切相关 ,高分化、浅表性癌组织中p16蛋白阳性表达明显高于低分化、浸润性癌组织 (P <0 .0 5 )。cyclinD1蛋白阳性表达率为 6 2 .5 % ,浸润性癌组织阳性率明显高于浅表性癌组织 (P <0 .0 5 ) ,与癌组织病理分级无关。p16和cyclinD1蛋白表达呈负相关 (P <0 .0 1)。

人类肝癌发生过程中cyclinD1和CDK4及p16蛋白的表达

目的 研究肝细胞癌（HCC）发生过程中细胞周期调控因子cyclinD1、CDK4和p16蛋白表达及其意义。方法 应用免疫组织化学SP染色法检测正常肝组织、慢性肝炎，肝硬化，癌周肝硬化和肝癌组织中cyclinD1，CDK4和p16蛋白表达。对免疫组化结果进行计算机图象定量分析。结果 cyclinD1，CDK4和p16蛋白的阳性单位（positive unit，PU）和面数密度（area number density，NA）从慢性肝炎（PU分别为39．4、41．0和33．3；NA分别为236．7、272．7和237．4），肝硬化（PU分别为40．8、45．2和43．6；NA分别为313．8，354．6和322．9）癌周肝硬化（PU分别为55．5、59．4和54．4；NA分别为481．9、488．9和432．6）到肝癌（PU分别为59．6、63．7和58．1；NA分别为549．2、587．7和451．3）表达逐渐增强。癌周肝硬化和肝癌组织中cyclinD1、CDK4、p16的表达明显高于慢性肝炎和肝硬化（P值分别为0．034、0．020、0．030、0．007、0．003和0．005）但癌周肝硬化和肝癌组织之间差异无统计学意义，P值分别为0．433、0。535和0．447。慢性肝炎和肝硬化中cyclinD1、CDK4、p16阳性信号主要定位于胞核，而癌周肝硬化和HCC中主要定位于胞质。P16与HCC的分化程度有关，但未发现cyclinD1、CDK4与肿瘤分化程度之间有相关性。结论 cyclin-细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）．细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKIs）调控网络中，相关调控因子的异常可能参与了HCC的发生、发展。CyclinDl、CDK4的过度表达可能是肝癌发生过程中的早期事件。在HCC的发生过程中p16高表达可能是细胞周期正反馈调控的结果，在HCC的发生中可能属于早期事件，而p16表达下降或缺失可能是肝癌发生过程中的晚期事件。

靶向转录因子STAT3的Decoy核苷酸对膀胱癌细胞体外增殖的抑制作用

目的：研究核转录因子STAT3的诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)对人膀胱癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：采用阳离子聚合物Sofast为转染试剂将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24及5637细胞；用MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞术检测ODNs的转染效率；荧光显微镜检测ODNs入核情况；RT-PCR及Western blot检测转染ODNs前后bcl-xl、cyclinD1和c-myc表达水平的变化。结果：ODNs可有效地转染至细胞内,部分可进入核内,转染效率呈剂量依赖关系；STAT3 decoy ODNs可抑制膀胱癌细胞的增殖,100 nmol/L组抑制率最明显,达40%～48%；100 nmol/L decoy ODNs明显抑制bcl-xl、cyclinD1和c-myc mRNA及蛋白的表达水平。结论：STAT3 decoy ODNs可显著抑制膀胱癌细胞的增殖。其作用机制可能是通过下调癌基因c-myc、细胞周期基因cyclinD1及凋亡相关基因bcl-xl的基因转录及蛋白表达而实现的。

胃癌组织中幽门螺旋杆菌感染与SOX2、CyclinD1蛋白表达的相关性研究

目的探讨胃癌组织中幽门螺旋杆菌(HP)感染与SOX2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达的相关性。方法收集2014年1月—2015年1月河北北方学院附属第一医院经胃镜和病理检查明确诊断的胃癌标本50例,根据是否感染HP分为HP阳性组(36例),HP阴性组(14例)。采用^(13)C呼气试验和吉姆萨染色(Giemsa)法检测幽门螺旋杆菌感染,采用免疫组织化学法标记SOX2、CyclinD1,检测其在胃黏膜组织中的蛋白表达情况。比较胃癌组织SOX2、CyclinD1蛋白表达与胃癌临床病理特征之间的关系及与HP感染的相关性。结果 SOX2蛋白的表达水平与胃癌患者的性别、年龄和肿瘤大小无关(P>0.05),与临床分期、浸润深度和分化程度有关(P<0.05);CyclinD1蛋白的表达水平与胃癌患者的性别、年龄和肿瘤大小无关(P>0.05),与临床分期、浸润深度和分化程度有关(P<0.05)。SOX2阳性颗粒定位于细胞核,呈棕黄色颗粒。SOX2蛋白在HP阳性组胃癌组织中阳性表达率为5.6%,在HP阴性组阳性表达率为35.7%,2组比较差异有统计学意义(x^2=5.316,P<0.01)。CyclinD1主要定位于胃癌细胞的细胞核,呈棕黄色颗粒。HP阳性组胃癌组织中CyclinDl蛋白阳性表达率为66.7%,HP阴性组表达率为28.5%,2组比较差异具有统计学意义(X^2=2.119,P<0.05)。胃癌组织中HP感染与SOX2蛋白表达呈负相关(r=-0.81l,P<0.01),与CyclinD1蛋白表达呈正相关(r=0.274,P<0.05)。结论 HP感染可能诱发胃癌,SOX2、CyclinD1蛋白可能参与胃癌的发生、发展过程。