CYP17A1基因突变致先天性肾上腺皮质增生症一例报道并文献复习

17α-羟化酶缺乏症(17-OHD)是先天性肾上腺皮质增生症(CAH)中的一种罕见类型,约占CAH的1%,其患病率为1∶50000。本文报道了1例疑似17-OHD患者,通过外显子测序鉴定了1个类固醇生成酶基因CYP17A1的基因突变,结合临床表现、体格检查、肾上腺和性腺功能检查等,最终将其明确诊断为CAH并给予规范治疗。故结合该病例,本文回顾总结了17-OHD的鉴别和诊断,以期提高临床对该病的认识,促进临床对17-OHD的规范诊治,为17-OHD的诊断和治疗提供更多的参考资料。

DNA甲基化修饰对金钱鱼卵巢Cyp17a1表达水平的影响

【目的】分析DNA甲基化修饰对金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢Cyp17a1表达的影响,进一步认识卵巢发育成熟相关基因表达的调控机制。【方法】分别取卵巢发育III、IV期的金钱鱼,以及投喂添加0(对照)、50、100μg/g雌二醇饲料30 d的2龄雌鱼,用MethPrimer软件分析其Cyp17a1基因CpG二核苷酸位点分布特征,并预测CpG岛;采用亚硫酸氢盐测序法检测不同发育时期卵巢以及投喂雌二醇个体卵巢中的Cyp17a1的DNA甲基化修饰水平,并用实时荧光定量PCR分析Cyp17a1基因表达水平。【结果】金钱鱼Cyp17a1翻译起始位点2000 bp后无CpG岛,取第1外显子含有5个CpG位点(翻译起始位点后106、116、129、148和203 bp处)的区域用于DNA甲基化水平检测。金钱鱼III期卵巢Cyp17a1外显子1的DNA甲基化修饰水平显著高于IV期卵巢(P<0.05),与其mRNA表达水平呈负相关。116、129和203 bp处DNA甲基化存在发育时期差异,但106和148 bp处差异不显著(P>0.05)。投喂雌二醇后,金钱鱼卵巢Cyp17a1 mRNA表达水平和第1外显子CpG富集区域整体DNA甲基化修饰水平无显著变化(P>0.05),但雌激素处理雌鱼翻译起始位点后148、203 bp处甲基化水平明显上升(P<0.05)。【结论】金钱鱼卵巢Cyp17a1第一个外显子CpG富集区的整体甲基化水平与基因表达呈负相关,饲料E2可上调Cyp17a1第一个外显子148、205 bp处甲基化水平,表明甲基化修饰参与金钱鱼Cyp17a1的表达调控。

黄芪多糖对地塞米松诱导MC-3T3-E1成骨细胞CYP17A1、CYP19A1 mRNA及蛋白表达的影响

目的 探究黄芪多糖对MC-3T3-E1成骨细胞增殖及CYP17A1、CYP19A1基因与蛋白表达情况的影响,初步探讨其治疗糖皮质激素骨质疏松症(GIOP)的作用机制。方法 以MC-3T3-E1成骨细胞为研究对象分为6组,分别为正常组,模型组,维生素D_(3)组(1×10^(-5) mmol·L^(-1)),黄芪多糖高、中、低剂量组(1、0.1、0.01mg·L^(-1))。MTT法检测黄芪多糖对地塞米松诱导MC-3T3-E1成骨细胞增殖抑制率的影响;比色法检测黄芪多糖对地塞米松诱导MC-3T3-E1成骨细胞上清液中钙含量的影响;ELISA法检测黄芪多糖对地塞米松诱导MC-3T3-E1成骨细胞上清液25(OH)D_(3)含量的影响;RT-PCR和Western blot法分别检测黄芪多糖对地塞米松诱导MC-3T3-E1成骨细胞CYP17A1、CYP19A1 mRNA和蛋白相对表达水平的影响。结果 MTT检测结果显示,与正常组比较,模型组MC-3T3-E1成骨细胞在24 h、36 h、48 h时增殖抑制率显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖高、中、低剂量组及维生素D3组MC-3T3-E1成骨细胞在24 h、36 h、48 h增殖抑制率均显著降低(P<0.01)。比色法检测结果显示,与正常组比较,模型组MC-3T3-E1成骨细胞钙含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖高剂量组MC-3T3-E1成骨细胞钙含量显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,与正常组比较,模型组MC-3T3-E1成骨细胞25(OH)D_(3)含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖高、中剂量组MC-3T3-E1成骨细胞25(OH)D_(3)含量显著升高(P<0.01)。RT-PCR,Western-Blot检测结果显示,与正常组比较,模型组MC-3T3-E1成骨细胞中CYP17A1、CYP19A1 mRNA和蛋白相对表达量显著下降(P<0.01);与模型组比较,黄芪多糖高剂量组MC-3T3-E1成骨细胞中CYP17A1、CYP19A1 mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.01),并与药物浓度呈正相关。结论 黄芪多糖可改善糖皮质激素骨质疏松症相关指标,其可能机制与提高MC-3T3-E1成骨细胞活性和CYP17A1、CYP19A1 mRNA和蛋白表达水平有关。

CYP17A1和CYP19基因多态性与男性不育的关联

本研究旨在探讨男性不育症患者中CYP17A1和CYP19基因的多态性与男性不育症之间的关系。方法 采用酚-氯仿法提取患者全基因组DNA,并运用多重PCR技术对AZF区域微小缺失的患者进行基因敲除。通过SNaPshot方法检测CYP17A1基因的rs743572和rs17115149位点,并运用SNaPshot分析其遗传变异。同时,利用PCR技术对CYP19基因进行扩增,并通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行基因型分析。结果 通过对CYP17A1位点rs743572和rs17115149的单体型分析,发现A-G和G-G单体型在两组之间存在显著差异,携带A-G单体型男性不育症患者发病率显著升高(P=0.01,OR=1.44,CI=1.11-1.86),而携带G-G单体型则显著降低了男性不育症的发病率。在前期研究中,还发现(TAAA)n重复序列大于9的患者存在显著的遗传变异(P<0.05),而(TAAA)n重复序列小于9的患者,其不育易感性显著增加(P=0.00,OR=1.43,CI=1.10-1.85)。结论 男性不育症患者中,CYP17A1基因rs743572位点的A等位和AA基因型与男性不育症发病风险密切相关。这一研究结果为进一步了解和预防男性不育症提供了重要的遗传学信息。

程序化设计的简并引物克隆半滑舌鳎CYP17基因

采用1种新的简并引物设计方法——CODEHOP法来克隆半滑舌鳎CYP17基因。该法结合NCBI、Blastp、BlockMaker、CODEHOP等生物信息学资源和DNAMAN、Oligo6.0等生物软件,程序性设计半滑舌鳎CYP17基因的CODEHOP引物,从半滑舌鳎卵巢组织中成功克隆了CYP17基因,该基因片段与其它物种的CYP17家族具有较高的同源性,经鉴定,该基因属于整个脊椎动物的CYP17基因群,尤其是鱼类亚群。实验结果表明,程序性设计的简并引物较传统简并引物特异性更高,假阳性率少,更有利于实验成功。

CYP17基因多态性与湖南汉族女性青春期后痤疮的相关性研究

目的探讨雄激素相关基因CYP17多态性与湖南汉族女性青春期后痤疮的相关性。方法提取不伴雄激素升高组(A组)和伴雄激素升高组(B组)女性青春期后痤疮患者和女性正常人对照组(C组)的血DNA标本。设计引物通过PCR技术扩增出包括CYP17基因多态位点的片段,用限制性内切酶MspA1Ⅰ进行酶切鉴定产物。并经测序证实CYP17基因的3种基因型。结果 A组基因型A1A2频率、B组基因型A1A2频率间以及分别与C组基因型A1A2频率比较,没有显著性差异(P>0.05);A组基因型A2A2频率和C组基因型A2A2频率比较,没有显著性差异(P>0.05);B组基因型A2A2频率分别与A组基因型A2A2频率和C组基因型A2A2频率比较,有显著性差异(P<0.05)。结论 CYP17基因-34bp处T→C碱基置换的存在将增大患伴雄激素升高的女性青春期后痤疮的风险。

绿鳍马面鲀CYP17-I基因克隆及其在繁殖周期中的表达

为探究CYP17-I基因在绿鳍马面鲀繁殖周期中的作用及其与性激素水平变化的相关性,实验首先通过SmartTMRace技术克隆得到了绿鳍马面鲀CYP17-I c DNA全长序列1 580 bp,编码511个氨基酸。通过半定量RT-PCR技术检测了CYP17-I基因的时空表达,并采用放射免疫测定法检测雄鱼和雌鱼血清睾酮(T)和雌二醇(E2)的含量变化。结果发现,CYP17-I在卵巢、精巢和脑中表达量较高,其次为胃、心脏、脾脏、肾脏,在垂体和鳃中也检测到了微弱表达。在周期表达中发现,无论在卵巢还是精巢中,CYP17-I基因的表达水平与血清T含量密切相关,呈明显周期性变化,最高值均出现在5月份的卵细胞或精子成熟期,而与血清E2含量无显著的相关性。研究表明,CYP17-I在鱼类繁殖周期中对雄性激素睾酮的生成起关键的调控作用。

藏族CYP17与CYP19基因多态性与身高的相关关系

目的：探讨西藏藏族人群CYP17与CYP19基因多态性与人体身高发育的关系。方法：收集长期居住西藏且体检健康的藏族人血液标本200例（男108例，女92例），并同时测量其身高，提取DNA，设计引物，通过RFLP-PCR法对CYP17基因多态性进行检测；对CYP19基因经PCR扩增，电泳并回收后进行直接测序。结果：CYP17基因MspAII酶切位点基因多态性与藏族男性身高发育有关；与女性身高发育无明显相关性。CYPl9基因多态性与男、女身高均无相关。结论：CYP17基因可能是影响藏族男性身高个体差异的基因之一，而CYP19基因对藏族人群身高影响不明显。

泥鳅和大鳞副泥鳅细胞色素P450c17-Ⅰ(CYP17-Ⅰ)基因的克隆及组织表达分析

采用3'-和5'-RACE法克隆了泥鳅和大鳞副泥鳅CYP17-Ⅰ基因的c DNA全长序列,通过实时荧光定量PCR技术分析其表达情况。结果表明,泥鳅CYP17-Ⅰ基因c DNA全长1 706 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1 563 bp,编码520个氨基酸;大鳞副泥鳅CYP17-Ⅰ基因c DNA全长1 763 bp,ORF长1 545 bp,编码514个氨基酸。2种鳅CYP17-Ⅰ氨基酸序列都有1个信号肽、1个跨膜区、1个保守的蛋白结构域和3个功能保守区。相似度分析显示,2种鳅之间CYP17-Ⅰ相似度为99%,与其他鱼类的相似度也超过70%。系统进化分析显示,2种鳅之间关系最为接近,其系统发育关系基本符合传统的分类地位。qRT-PCR结果显示,CYP17-Ⅰ在2种鳅的肠、肌肉、心脏、胃、肝脏、精巢、卵巢、脾脏等8个组织均有表达,在精巢和卵巢中表达量相对较高。

n-6/n-3多不饱和脂肪酸对乳腺癌大鼠乳腺癌组织CYP17和CYP19表达的影响

目的探讨不同n-6/n-3多不饱和脂肪酸(PUFA)膳食构成比对MNU诱导的乳腺癌大鼠血清雌二醇水平及乳腺组织CYP17、CYP19 mRNA表达的影响。方法雌性SD大鼠65只随机分为5组,即n-6 PUFA组、10∶1 n-6/n-3组、5∶1 n-6/n-3组、1∶1 n-6/n-3组和正常对照组,前4组以50 mg/kg MNU单次腹腔注射诱导大鼠乳腺肿瘤发生,正常对照组注射等体积无菌生理盐水。给药后立即分组喂养不同饲料,并在8周和18周时经阴道涂片证实间情期,股动脉取血液并剖取乳腺组织,采用放射免疫法检测血清雌二醇水平,利用RT-PCR技术检测乳腺组织中CYP17、CYP19 mRNA表达状况。结果4组乳腺癌大鼠血清雌二醇水平及乳腺组织中CYP17、CYP19的表达较正常对照组均有所升高,其中n-6组最高,其余各组随n-6/n-3值减小而下降,1∶1 n-6/n-3组显著低于n-6组。结论不同n-6/n-3 PUFA膳食构成比对MNU诱导的乳腺癌大鼠血清雌二醇水平及乳腺组织CYP17、CYP19 mRNA的表达具有不同影响,1∶1 n-6/n-3 PUFA膳食构成比能有效抑制乳腺癌大鼠血清雌二醇水平及乳腺组织CYP17、CYP19 mRNA表达的升高。

中国汉族人多囊卵巢综合征患者CYP17基因多态性分析

目的:探讨CYP17基因-34bp处T→C碱基置换与多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制的关系。方法:采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)分析法,对中国汉族人118例PCOS患者和106例对照组的CYP17基因-34bp碱基置换进行检测;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清睾酮(T)水平,比较CYP17基因多态性与PCOS患者T水平之间的关系。结果:中国汉族人PCOS组CYP17基因型频率分布为9.9%(A1A1)、56.4%(A1A2)、33.7%(A2A2),对照组为20.0%(A1A1)、52.0%(A1A2)、28.0%(A2A2),2组间比较差异无统计学意义(χ2=0.190,P>0.05);PCOS组A1、A2等位基因频率为38.1%、61.9%,对照组为46.0%、54.0%,2组间比较差异无统计学意义(χ2=3.032,P>0.05);PCOS组A2A2基因型组的T水平((1.63±0.58)μg/L)高于A1A2组((1.30±0.85)μg/L)和A1A1组((1.00±0.66)μg/L)(P<0.05),且含A2组(A1A2,A2A2)的T水平((1.43±0.67)μg/L)显著高于不含A2组(A1A1)的T水平(P<0.05)。结论:CYP17基因-34bp处T→C碱基置换的存在与PCOS高T血症之间有一定的相关性,可能是PCOS的易感基因之一。

CYP17基因多态性和雌激素暴露因素交互作用与乳腺癌易感的关系

目的:探讨CYP17基因多态性和雌激素暴露因素交互作用与乳腺癌易感的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测武汉市430例正常女性和210例女性乳腺癌患者雌激素代谢酶CYP17基因多态性;采用非条件logistic回归模型对CYP17基因多态性、雌激素暴露因素进行单因素和多因素分析。结果:乳腺癌患者雌激素代谢酶CYP17 A2/A2基因型频率为6.7%,显著高于对照组的2.4%(P<0.05),CYP17变异等位基因A2病例组的频率为16.2%,亦明显高于对照组10.6%(P<0.05);logistic回归分析显示:CYP17 A2/A2基因型与乳腺癌的发生具有统计学关联(P=0.013),CYP17基因多态性和雌激素暴露因素交互作用对乳腺癌的发病具有统计学意义的关联。结论:雌激素代谢酶CYP17基因多态性、雌激素暴露有关因素及其交互作用与乳腺癌易感有相关性。

CYP17基因多态性与痤疮中医分型的相关性

目的探讨CYP17基因多态性与痤疮中医分型的相关性。方法提取肝郁气滞型、湿热内蕴型痤疮患者和正常对照者的血DNA标本。设计引物通过PCR技术扩增出包括CYP17基因多态位点的片段,用限制性内切酶Ms- pA1Ⅰ进行酶切,产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,确定出CYP17基因的3种基因型(A1A1、A1A2、A2A2),并经测序证实。结果肝郁气滞型组基因型A1A2频率、湿热内蕴型组基因型A1A2频率间及分别与正常对照组基因型A1A2频率比较,差异无显著性意义(P>0.05);肝郁气滞型组基因型A2A2频率和正常对照组基因型A2A2频率比较,差异无显著性意义(P>0.05);湿热内蕴型组基因型A2A2频率分别与肝郁气滞型组基因型A2A2频率和正常对照组基因型A2A2频率比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论CYP17基因-34bp处T→C碱基的置换存在与痤疮湿热内蕴型有关。

亚洲人群CYP17(-34T/C)基因多态性与子宫内膜异位症易感性的Meta分析

目的应用Meta分析探讨亚洲人群中细胞色素氧化酶17基因(CYP17)(-34T/C)基因多态性和子宫内膜异位症(EMs)易感性的关系。方法检索Pubmed、中国知网、万方、中国生物医学文献数据库(CBM)等中、英文数据库中发表的关于亚洲人群CYP17(-34T/C)基因多态性和EMs易感性的文献。对文献进行质量评价、筛选和提取相关病例对照研究资料,利用R软件进行Meta分析,计算合并的比数比(OR)及其95%可信区间(CI)。结果共纳入文献6篇,累计病例组662例,对照组937例。分析结果显示:等位基因对比模型(T vs.C):OR=1.283,95%CI:0.948-1.737;杂合子模型(TC vs.CC):OR=1.181,95%CI:0.919-1.518;纯合子模型(TT vs.CC):OR=1.612,95%CI:0.899-2.889;显性模型(TT+TC vs.CC):OR=1.320,95%CI:0.932-1.871;隐性模型(TT vs.TC+CC):OR=0.716,95%CI:0.456-1.123。结论本次Meta分析结果显示,在亚洲人群中CYP17(-34T/C)基因多态性与EMs易感性并无显著相关性,但需要开展更多设计细致、实施良好的大样本量病例-对照研究以得到更科学可信的结论。

CYP17基因多态性和环境暴露因素交互作用与前列腺癌易感性的关系

目的探讨CYP17基因多态性和环境因素暴露交互作用与前列腺易感性的关系。方法采用病例对照设计,采集128例病例和128例对照的血样,应用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)技术检测外周血细胞色素P450家族17(CYP17)基因型。采用Logistic回归模型进行多因素分析。结果与对照组相比,饮酒30年以上、吸烟30年以上、饮食中猪肉摄入较多、遗精年龄早于16岁、首次性生活年龄早、35岁以前每周性生活次数多、肿瘤家族史是前列腺癌的危险因素,而经常吃水果、喝绿茶、卷心菜摄入较多是保护因素。基因CYP17的A2/A2多态突变型能够增加前列腺癌发生风险(OR=2.63,95%CI值:1.37~3.58),且有剂量效应梯度。CYP17基因多态性与首次遗精年龄和家族史因素间存在交互作用。结论 CYP基因多态性、环境相关因素暴露及其交互作用与前列腺癌有相关性。

CYP17单核苷酸多态性的研究进展

CYP17基因编码的细胞色素P45017α羟化酶/17,20裂解酶在类固醇激素的合成中作用关键,CYP17基因5′端-34碱基T→C单核苷酸多态性位点位于调控区,可能有调控体内雄激素、雌激素的作用,A2A2型基因可能与多囊卵巢综合征雄激素增高有关、携带A1等位基因的妇女患子宫内膜异位症的风险可能更高、携带A2型等位基因卵巢癌患者死亡风险可能较A1A1型增加、携带A2等位基因的妇女可能患乳腺癌风险较高、携带A2等位基因的前列腺癌患者存活时间可能更长、携带CYP17基因A2等位点的女性乳腺癌的患者服用他莫西芬更易发生肝脏脂肪变性。CYP17基因多态性参与某些致病的机制尚需进一步研究。

CYP17和CYP3A4基因多态性与成都地区妊娠期肝内胆汁淤积症关系的研究

目的探讨参与雌激素合成和代谢的细胞色素P 450酶系的CYP 17和CYP 3A 4基因多态性与成都地区妊娠期肝内胆汁淤积症(in trahepatic cho lestas is of pregnancy,ICP)的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对成都地区100例ICP患者(ICP组)和100例正常孕妇(对照组)的CYP 17基因启动子区-1931T/C多态和CYP 3A 4基因转录启动子区-290A/G多态进行分析。结果ICP组和对照组均存在CYP 17基因T/C多态,但两组CYP 17基因型TT、TC、CC频率和等位基因T、C频率的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。两组孕妇均未检测到CYP 3A 4-V(即CYP 3A 4*1B)等位基因,所有孕妇的CYP 3A 4基因型均为w t/w t型。结论CYP 17基因启动子区T/C多态与成都地区ICP发病风险无相关性;成都地区妊娠妇女不存在CYP 3A 4基因-290A/G多态。

CYP17基因多态性与围绝经期综合征的关系

在围绝经期,女性由于卵巢功能的逐渐衰退,体内雌激素的下降,可以出现一系列近期及远期症状如潮热、盗汗、抑郁、失眠、骨质疏松、心血管疾病及老年性痴呆等,这严重影响着更、老年期女性身心健康及生活质量。但并不是所有女性都出现围绝经期症状,且有症状女性的严重程度又不尽相同。因此推测,围绝经期综合征的这种多样性表现可能与某些基因多态性有关联。

CYP17A1基因的复合杂合突变导致17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症

目的通过1例17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17-OHD)患者的临床特点和基因突变分析,探讨17-OHD的基因分子机制及突变对P450 c17蛋白功能的影响。方法收集患者临床资料,提取患者外周血白细胞DNA,PCR扩增CYP17A1基因的8个外显子及内含子边界,测序确定CYP17A1基因的突变位点,用突变位点保守性分析和计算机模拟P450 c17蛋白三维结构,分析突变对P450 c17蛋白功能的影响。结果患者临床表现及内分泌功能检查完全符合17-OHD特点,PCR产物和克隆测序发现,CYP17A1基因的一个等位基因的第2外显子125位密码子发生了CGA→CAA的突变,导致Arg125 Gln错义突变,另一个等位基因的第6外显子的第360和361密码子缺失G核苷酸及C转换为A核苷酸,导致Leu361Phe错义突变和以后的移码突变,形成一个只包含417个氨基酸的截短蛋白,该蛋白缺乏17α-羟化酶和17,20碳链裂解酶催化活性部位。通过P450 c17蛋白分子三维建模分析表明,121位色氨酸与血红素和125位精氨酸分别形成氢键,当125位精氨酸突变为谷氨酰胺时,121位色氨酸不能再与125位谷氨酰胺形成氢键,从而使P450 c17蛋白分子结构的稳定性受到影响,影响了其功能。结论通过CYP17A1基因突变分析,进一步从分子遗传学方面证实了患者的临床诊断,CYP17A1突变导致的P450 c17蛋白的结构改变是该17-OHD患者临床表现的基因分子基础。

CYP17基因单核苷酸多态与子宫内膜异位症和子宫腺肌病易感性的关系

目的探讨CYP17基因T-C单核苷酸多态与子宫内膜异位症(内异症)和子宫腺肌病(腺肌病)易感性的关系。方法蛋白酶K消化-饱和酚氯仿法提取外周血白细胞基因组DNA,聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对61例内异症(内异症组)、59例腺肌病(腺肌病组)和65例健康女性(对照组)进行基因分型。结果①内异症组和腺肌病组A1A1基因型频率及A1等位基因频率均高于对照组,差异均有统计学意义;内异症组与腺肌病组之间差异均无统计学意义。②A1A1和A1A2基因型个体发生内异症的相对危险度(OR)分别是A2A2型个体的4.615倍(1.704-12.504,P=0.002)和3.467倍(1.339-8.977,P=0.009),发生腺肌病的相对危险度分别是A2A2型个体的3.692倍(1.337-10.196,P=0.010)和3.867倍(1.505-9.933,P=0.004),差异均有统计学意义。结论 A1A1、A1A2基因型增加内异症和腺肌病的易感性,A1等位基因可能是内异症和腺肌病的遗传易感基因,内异症和腺肌病发病机理相似。