CYP19A1对兔卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

旨在探究P450芳香化酶基因(cytochrome P450,family 19,subfamily A,polypeptide 1,CYP19A1)对兔卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)增殖和凋亡的影响。本研究选择健康状况良好的8月龄新西兰白兔母兔,采集卵巢组织,分离并鉴定GCs;利用一步克隆法获得兔CYP19A1基因全长序列,进行生物信息学分析;利用qRT-PCR、CCK8、FITC/PI等技术与方法,分析CYP19A1基因过表达和干扰对类固醇激素合成相关基因及GCs增殖和凋亡的影响。利用FSHR免疫荧光染色,鉴定分离的原代细胞是GCs,FSHR表达呈阳性。克隆CYP19A1基因,发现其cDNA全长为1512 bp,编码503个氨基酸。经生物信息学预测发现,CYP19A1蛋白是一种稳定的亲水性蛋白,含有一个P450家族结构域,与其它物种同源性较高。在GCs中,CYP19A1基因表达量的改变显著或极显著影响了类固醇激素合成相关基因IGF1R、CYP1B1、CYP1A1、BMP6、CYP17A1的表达(P<0.05或P<0.01)。过表达/干扰CYP19A1后,极显著上调/下调GCs增殖,极显著抑制/促进GCs凋亡水平(P<0.01)。综上所述,CYP19A1可以促进GCs增殖,抑制GCs凋亡,调控类固醇激素合成相关基因的表达,进而参与母兔卵泡发育进程。

中等强度有氧运动对衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR表达的影响

目的探究有氧运动对衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR的表达情况。方法以SD雄性大鼠为研究对象,随机分为D-半乳糖衰老组(D)、运动抑制衰老组(A)、D-半乳糖衰老运动组(DE)、对照组(C)和运动组(E),建立D-半乳糖衰老模型和有氧运动模型,运用Western Blot方法检测各组大鼠肾上腺CYP19A1,VDR的表达水平;运用SPSS13.0软件进行数据分析。结果①CYP19AI表达水平:运动抑制衰老组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01),D-半乳糖衰老运动组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01)。②VDR表达水平:D-半乳糖衰老运动组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01),运动抑制衰老组大于D-半乳糖衰老组(p<0.01),结论中等负荷的有氧运动能够显著性的提高衰老大鼠肾上腺CYP19A1和VDR的表达含量。

芳香化酶抑制剂对暗纹东方鲀CYP19A、DMRT1基因表达及性腺分化的影响

采用组织学和分子生物学方法,研究了投喂芳香化酶抑制剂来曲唑(LE)后暗纹东方鲀(Takifugu obscures)初孵仔鱼CYP19A、DMRT1基因表达以及性腺的组织学变化,以期进一步了解P450芳香化酶(P450arom)在鱼类早期性别分化过程中的作用。RT-PCR结果显示,对照组样品CYP19A和DMRT1表达显示性二态,雌性表达CYP19A基因,雄性表达DMRT1基因。LE处理组在性别分化期间,雄性样品单一表达DMRT1,雌性样品则同时表达CYP19A和DMRT1。qRT-PCR结果显示:LE处理组雌性仔鱼CYP19A基因表达被显著抑;虽然在仔鱼出膜后22d(dph)的表达水平高于9 dph,但仅为同日对照组的2.11%。LE处理组雌性样品22 dph时DMRT1基因表达量上调,至150 dph时达对照组雄性水平。55 dph的性腺组织学结果表明,LE处理可导致暗纹东方鲀稚鱼原始卵巢退化,并向功能性精巢发育。150 dph的LE处理组性腺均为精巢,并与对照组精巢发育同步。结论认为,暗纹东方鲀性腺分化期间P450arom是卵巢形成和维持发育所必须的,抑制P450arom活性可导致雌性暗纹东方鲀发生雄性化逆转。

沼泽型水牛CYP19A1基因克隆、序列分析及组织表达研究

旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水牛CYP19A1的理化性质、蛋白质二级及三级结构;应用QRT-PCR技术对CYP19A1在水牛组织的表达进行了差异分析。测序结果表明:水牛CYP19A1基因的编码区全长1 512bp,共编码503个氨基酸。多重序列比较分析显示水牛CYP19A1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、人、马相应序列相似性分别为99%、98%、91%、86%和84%,结合系统进化树分析结果推测,CYP19A1基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。定量分析结果显示:水牛CYP19A1在水牛垂体、大脑、肝脏、骨骼、卵巢、肌肉和心脏组织具有不同程度的表达,其中垂体和大脑表达量最高,骨骼和卵巢次之,肌肉表达最低。本研究成功地克隆了沼泽型水牛CYP19A1基因并研究了其在不同水牛组织中的表达规律,为阐明其在水牛性腺中参与的激素合成转化规律等研究奠定了理论基础。

大黄鱼cyp19a/b基因的克隆与表达分析

克隆得到了调节雌雄激素平衡的大黄鱼cyp19a/b基因,cyp19a基因c DNA全长1805 bp(NCBI登录号:FJ800566),其中开放阅读框1557 bp,编码518个氨基酸;cyp19b基因c DNA全长2268 bp(NCBI登录号:FJ800567),其中开放阅读框1503 bp,编码500个氨基酸.荧光定量PCR分析显示cyp19a基因在性腺中有明显的表达,且在卵巢中的表达量极显著且高于精巢;在肌肉、脑、肝脏、肾脏、脾脏等组织器官中基本不表达.而cyp19b基因在脑、脾脏和肝脏中有较高表达,在性腺和其他器官中基本不表达.

CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性

目的探讨CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性。方法选择2014年3月至2018年3月汉中市中心医院收治的女性乳腺癌患者300例为乳腺癌组,同时选择健康女性300例作为对照组,采集2组受试者血样,采用Sanger测序法对CYP19A1基因上rs4646、rs6493487、rs1062033、rs17601876和rs3751599共5个位点进行分型,分析CYP19A1基因多态性与乳腺癌患病风险的相关性。结果 CYP19A1基因上5个候选单核苷酸多态性均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。乳腺癌组CYP19A1基因上rs4646位点的等位基因C、rs6493487位点的等位基因G及rs17601876位点的等位基因A频率低于对照组(P<0.05)。乳腺癌组CYP19A1基因上rs4646位点的AA基因型、rs6493487位点的AG和GG基因型、rs17601876位点的AG和AA基因型频率低于对照组(P<0.05),而rs1062033位点的GG基因型频率高于对照组(P<0.05)。rs4646和rs6493487在显性遗传模型和加性遗传模型下与降低乳腺癌患病风险有相关性(P<0.05),rs1062033在隐性遗传模型下与增加乳腺癌风险有相关性(P<0.05),而rs17601876在3个遗传模型下均与降低乳腺癌风险有相关性(P<0.05)。结论 CYP19A1基因上的rs4646、rs6493487、rs17601876位点多态性与降低乳腺癌患病风险相关,而rs1062033位点多态性与增加乳腺癌患病风险相关。

雌牙鲆CYP19A基因启动子“CpG”岛区的单核苷酸多态性及与繁殖性能的关联分析

芳香化酶基因(CYP19)编码的芳香化酶是雄激素转化为雌激素的关键酶,在鱼类性腺发育及繁殖内分泌过程中起着重要的作用。本研究采用聚合酶链式反应-单链构象多态(PCR-SSCP)和放射性免疫方法(RAI)对61尾雌牙鲆进行了CYP19A基因启动子CpG岛区多态性检测,并将其与繁殖性能进行了关联分析。CpG岛区存在3种类型的基因型(pattern1、pattern2、pattern3),经测序发现CpG岛区有以下突变:T-1927插入或缺失、C-1899插入或缺失、T-1772C、C-1766T、TGTCAAC-1752^-1744插入或缺失(11个SNPs连锁突变)。方差分析结果表明:此位点对雌二醇(E2)水平的效应达到显著(P<0.05)水平,经多重比较分析,具有pattern1基因型的个体的雌激素(E2)水平显著低于pattern2和pattern3基因型个体的雌激素水平(P<0.05),同时pattern1基因型的个体的mRNA表达量显著低于pattern2和pattern3基因型个体的mRNA表达量(P<0.05)。以上结果表明,CYP19A基因调控区甲基化位点突变可能导致芳香化酶的表达量,进而影响牙鲆繁殖内分泌过程;同时也阐明了这些与牙鲆繁殖性状相关的SNPs可以用于生产实践中进行标记辅助选择具有优良繁殖性能的牙鲆。

CYP19a1基因的单核苷酸多态性与中国汉族成人寻常痤疮的关联研究

目的：初步探索CYP19a1基因的单核苷酸多态性（SNP）与中国汉族成人寻常痤疮发病和严重程度的关系。方法：共纳入309例Pillsbury分级Ⅰ～Ⅳ的寻常痤疮患者，分为轻度组（I级，99例）和中重度组（Ⅱ～Ⅳ级，210例）。从患者外周静脉血中抽提DNA组．经多重聚合酶链式反应（PCR）获取目的基因片段后，采用SNaPshot分型技术检测CYP19a1基因上的10个候选SNP位点的基因型。结果：①rs28892002位点在显性遗传模式下，CC基因型的分布频率在中重度组显著高于轻度组（58．5％vs．46．5％．P=-0．046，OR=0．614，95％CI=0．379—0．993）；②rs2255192-rs4646-rs10064-rs700519这组单倍型在显性模式下，其C—C—C—C、C—C—T—C基因型在两组间分柿差异有统计学意义（P值分别为0．0000、0．0216，OR值分别为5．0198和2．0707）。结论：中国汉族人群中．CYP19a1基因上的rs28892002位点CC野生纯合子基因型可能增加中重度寻常痤疮的患病风险；rs2255192-rs4646-rs10064-rs700519这组单倍型在显性模式下，其C—C—C—C、C—C—T—C基因型可能减少中、重度寻常痤疮的患病风险。

雌二醇和甲基睾酮暴露对食蚊鱼CYP19a表达的影响

探讨17β-雌二醇(E2)和17ɑ-甲基睾酮(MT)暴露对食蚊鱼(Gambusia affinis)CYP19a基因表达的影响。采用静水暴露方法,分别设置2、10、50、100 ng/L E2和MT各4个实验组,并设置对照组和平行组,定量测定第7,14,21,28 d性腺组织CYP19a mRNA表达水平的变化。E2暴露实验结果显示,初始相对较低浓度的E2(2、10 ng/L)对食蚊鱼CYP19a基因的表达起促进作用,而较高浓度的E2(50、100 ng/L)对CYP19a起抑制作用;随着暴露时间的延续,食蚊鱼CYP19a基因的表达受低浓度E2的影响不明显,而高浓度的E2则极明显上调食蚊鱼CYP19a基因的表达。MT暴露的实验结果显示,初始所有MT实验浓度组(2、10、50、100 ng/L)均对食蚊鱼CYP19a基因起促进作用;随着暴露时间的延长,较低浓度MT对食蚊鱼CYP19a基因产生的影响不明显,较高浓度的MT则显著性地抑制食蚊鱼CYP19a的表达。结果表明,两种典型环境激素对食蚊鱼CYP19a基因表达的影响十分显著,鱼类CYP19a基因mRNA表达适合作为环境激素污染的生物标志物。

广西麻鸡CYP19A1基因的克隆、序列分析和组织表达谱研究

为了克隆和分析广西麻鸡CYP19A1基因的编码区序列和产蛋期CYP19A1在各组织中的表达谱,根据Gen Bank已公布的鸡CYP19A1基因序列,设计特异性引物,从广西麻鸡卵巢PCR扩增CYP19A1基因编码区序列,将其克隆至p MD-18T载体,测序获得CYP19A1基因全序并对其进行序列分析。设计定量引物,对卵巢、睾丸和子宫等16个组织CYP19A1的表达谱进行了分析。结果表明:广西麻鸡CYP19A1基因的编码区长度为1 509 bp,共编码502个氨基酸。与参考序列相比,存在两处同义突变,一处错义突变(天冬氨酸突变为谷氨酸);物种间的同源性分析显示,广西麻鸡CYP19A1基因与鸡(Gallus gallus)、牛(Bos taurus)、马(Equus caballus)、人(Homo sapiens)、猕猴(Macaca muiatta)、小鼠(Mus musculus)、猪(Sus scrofa)的序列同源性分别为99.8%、72.5%、84.3%、84.4%、97.4%、81.5%、80.3%;进化树分析显示,广西麻鸡与鸡亲缘关系最近,与猪的亲缘关系最远。产蛋期CYP19A1的表达谱显示,CYP19A1在产蛋期特异在卵巢中表达,在其他组织中的表达量极低或不表达。结果为进一步研究鸡CYP19A1基因对鸡产蛋性能的影响奠定了基础。

兰州鲇性腺型芳香化酶cyp19a1a基因克隆及表达定位分析

【目的】性腺型芳香化酶基因cyp19a1a在硬骨鱼类性腺发育和性别决定过程中具有重要作用,克隆分析该基因在生长和体型性状具有性别二态性兰州鲇(Silurus lanzhouensis)不同组织的表达与定位,并对已获得YY超雄个体的雌雄同体亲本进行不同组织表达验证分析,为加快培育全雄兰州鲇良种新品种提供理论依据和技术支撑。【方法】采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)法获得兰州鲇cyp19a1a全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测该基因在3月龄、1龄和3龄兰州鲇正常雌雄鱼和3龄雌雄同体鱼的不同组织表达,并采用免疫组织化学法(IHC)分别检测该基因在3月龄、1龄和3龄正常雌性鱼性腺组织的表达与定位。【结果】cyp19a1a c DNA序列全长为2168 bp,其中5′非编码区(Untranslated region,UTR)53 bp,开放阅读框(OFR)1707 bp,3′UTR408 bp,编码568个氨基酸残基,具有芳香化酶氨基酸序列的保守功能区。兰州鲇cyp19a1a mRNA主要在性腺表达,3龄雌雄同体表达特征与3龄正常繁育个体相同,且卵巢表达量显著高于精巢(P<0.05);正常繁育养殖个体表达量随性腺发育而显著增加。IHC结果显示,不同时期卵巢组织中,卵原细胞仅在3月龄和1龄分布且没有发现阳性信号,卵母细胞在不同时期均有分布且信号随着卵母细胞发育而逐渐增强,其中3月龄至1龄主要分布于胞质,3龄时主要分布于胞质、滤泡膜以及放射膜和鞘膜细胞;不同时期精巢组织中仅在间质细胞有微弱表达。【结论】cyp19a1a基因在兰州鲇卵巢发育和卵细胞生长发育过程中都具有重要作用,对精巢发育和维持以及精子发生具有一定的促进作用,在雌雄同体兰州鲇性腺中的作用和兰州鲇正常繁育个体一致。本研究为鱼类性别决定与分化以及性腺发育调控机制提供了重要的理论依据。

尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a原核表达与蛋白纯化

为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定,证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(E.coli)BL21中,优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示,在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后,cyp19a1a重组蛋白大量表达,并以包涵体形式存在。通过Ni2+-NTA层析柱和切胶纯化,获得与预期片段大小一致的表达蛋白,并用Western blotting验证了纯化的蛋白为目的蛋白。本研究为制备cyp19a1a抗体和研究高温对cyp19a1a蛋白表达的影响提供了重要的基础。

多囊卵巢综合征患者颗粒细胞中miR-1270及其靶基因CYP19A1的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-1270(miR-1270)及其靶基因细胞色素P45019A1(CYP19A1)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵丘颗粒细胞中的表达,并评价其临床意义。方法回顾性分析2019年4月至2020年12月期间行IVF或ICSI助孕的PCOS患者(PCOS组)和无PCOS的不孕患者(对照组)的临床资料,记录两组患者的基本临床资料和促排卵情况。并收集两组患者的卵丘颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵丘颗粒细胞中miR-1270与CYP19A1的表达。双荧光素酶报告基因系统检测miR-1270是否靶向结合CYP19A1。将miR-1270的模拟物或抑制剂转染至人卵巢颗粒细胞瘤细胞KGN,采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测CYP19A1的表达变化,采用ELISA测定KGN细胞培养液上清中雌二醇(E 2)的浓度。结果PCOS组不孕患者的窦卵泡数、体重指数(BMI)、抗苗勒管激素(AMH)、LH、LH/FSH、催乳素(PRL)、睾酮(T)均显著高于对照组(P<0.05),获卵数亦显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,PCOS组卵丘颗粒细胞中miR-1270表达量显著降低(P<0.05),CYP19A1表达量显著增加(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实了CYP19A1和miR-1270之间是直接结合的,并且miR-1270通过靶向结合CYP19A1抑制E 2合成。结论miR-1270靶向负调控CYP19A1的表达,影响PCOS患者卵丘颗粒细胞中E 2的生成,为PCOS患者卵泡发育障碍提出了可能的分子机制。

花鲈性腺分化组织学及性别相关基因cyp11b和cyp19a1a的表达分析

以花鲈(Lateolabrax maculatus)1~214 dph(day post hatching)的仔稚鱼、幼鱼以及18月龄的雌鱼和雄鱼为研究对象,研究了花鲈早期性腺发生、发育和分化情况;分析了性腺分化过程中性别相关基因(cyp11b和cyp19a1a)的表达及与性别之间的关系。结果显示,在30 dph[全长为(1.28±0.10)cm],首次在中肾管前端的腹腔膜周围观察到原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),说明30 dph前是花鲈胚后PGCs迁移至生殖嵴的关键时期;在55 dph[全长为(2.45±0.19)cm],观察到一对呈对称分布的原始性腺已经形成,说明花鲈幼鱼的原始性腺在30~55 dph(全长为1.28~2.45 cm)之间发生;55~180 dph时(全长为2.45~12.28 cm),原始性腺不断发育变大,并且一直处于未分化状态;180 dph后性腺开始分化;在195 dph[全长(14.54±1.54)cm]观察到精巢开始分化,卵巢于205 dph[全长为(15.86±0.94)cm]开始分化,且性腺的解剖学分化要早于细胞学分化;18月龄的花鲈幼鱼性腺发育到Ⅱ期。性别分化相关基因cyp19a1a在花鲈卵巢中的表达量高于同期精巢,说明其在卵巢的分化及维持中发挥更关键的作用,而cyp11b在18月龄幼鱼Ⅱ期精巢中的表达量显著高于同时期的卵巢及Ⅰ期精巢,说明其主要在精巢的分化及维持中扮演重要角色。本研究结果不仅可以丰富花鲈的繁殖生理学资料,也为其性别调控技术的研究提供了科学依据。

食蚊鱼CYP19a基因的克隆与序列分析

硬骨鱼类CYP19基因与生物的性别分化和激素调节相关,因此可开发用来探究环境激素污染与基因表达的关系。本研究首次克隆和分析了食蚊鱼CYP19a cDNA的全系列,为将CYP19基因作为监测环境激素生物标志物的研究提供了全面的实验数据。根据CYP19a基因c DNA保守区域设计引物,扩增保守区域并测序。采用RACE法扩增食蚊鱼CYP19a基因c DNA序列全长,对其蛋白序列进行同源性分析,并将序列应用于CYP19a mRNA转录水平的RT-PCR法检测中。成功克隆食蚊鱼CYP19a基因全长,获得CYP19a基因总长为2020 bp,ORF为238～1791 bp,共编码518个氨基酸,对其编码的蛋白质进行有关信号肽、跨膜螺旋、亲水性/疏水性、一级结构、二级结构和三级结构分析,与其他硬骨鱼类底鰆、青鰆、平鲷、鲫、鲤和斑马鱼的性腺CYP19a基因作同源性比较,其基因相似度分别为93%、84%、84%、71%、71%和66%。用MEGA6.0软件对19个物种的CYP19a基因进行聚类分析,食蚊鱼CYP19a基因与底鰆、青鰆同源性最高,说明芳香化酶在进化上相对保守。确定从食蚊鱼性腺所克隆的CYP19a基因是芳香化酶基因,证明食蚊鱼的芳香化酶是由CYP19a和CYP19b两种基因编码的。食蚊鱼卵巢芳香化酶具有3个高度保守的片段,并具有催化活性。

泥鳅cyp19a1基因克隆及其在倍性间的表达差异

克隆并分析泥鳅cyp19a1a的全长cDNA和5′侧翼序列,用qRT-PCR技术比较cyp19a1a在二倍体、四倍体泥鳅组织间和倍性间的表达差异。结果发现,泥鳅cyp19a1a的cDNA全长1905 bp,包括29 bp的5′TR、301 bp的3′UTR和1575 bp的ORF序列,其氨基酸序列中存在I-螺旋区、芳香化酶特异保守区以及血红素结合区等重要功能域。用hiTAIL-PCR克隆获得2040 bp的5′侧翼序列,在该序列上预测到典型元件TATA-box,以及C/EBPβ、SRY、ER、CREB、GR等转录因子结合位点。12月龄四倍体泥鳅的体长、体质量均显著高于二倍体,但性腺发育明显滞后于二倍体。cyp19a1a和cyp19a1b分别在二倍体、四倍体泥鳅的性腺和脑中的表达量最高。倍性间比较结果显示,cyp19a1a在四倍体各组织中的表达均高于二倍体(除精巢外);cyp19a1b在四倍体雌鳅脑中的表达量显著高于二倍体,但在四倍体雄鳅脑中的表达量显著低于二倍体。综合分析上述结果,四倍体中相对较高的cyp19a1a表达可能与其性腺所处发育时期有关,较晚的性成熟有利于泥鳅将更多能量用于个体生长。由于cyp19a1及其催化产生的雌激素还可以通过GH-IGF通路调节鱼类的生长,推测cyp19a1在泥鳅倍性间的差异表达可能与二倍体、四倍体间的生长生殖差异密切相关。

温度对泥鳅和大鳞副泥鳅性腺分化的影响和CYP19a基因的克隆与时空表达

向性成熟的泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)和大鳞副泥鳅(Paramisgurnusdabryanus)个体注射绒毛膜促性腺激素,对所获得的卵子和精子进行人工授精。把胚胎分别置于20℃、25℃和30℃条件下,使其发育。经性腺检查发现,随着温度的升高两种泥鳅中雄性个体所占的比例明显升高,获得明显的偏雄比率群体。根据已知细胞色素P450芳香化酶CYP19a基因序列设计嵌套简并引物用巢式PCR扩增并克隆出了两种泥鳅的CYP19a的DNA片段。泥鳅CYP19a片段和大鳞副泥鳅CYP19a片段分别长941bp和935bp。在此基础上用各自的特异引物克隆出两种泥鳅CYP19a的相应cDNA片段。通过基因组DNA和cDNA序列的比较证明两种泥鳅的CYP19a基因均包含2个内含子和3个外显子,编码的蛋白质序列长84氨基酸残基。以GAPDH基因为对照,分别对2种泥鳅成体组织和不同发育阶段胚胎的CYP19a进行了半定量RTPCR表达分析,结果表明,二者在成体组织中具有大致相似的表达模式,在卵巢和脑组织中表达量较大,在精巢和肝组织中微量表达,在胚胎中二者的表达模式差异较大。

激活素A调节人卵巢颗粒细胞Smad2和CYP19A表达的研究

目的 探讨激活素A通过Smad2和CYP19A表达促进颗粒细胞增殖的作用途径。方法2017年3~8月,在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的患者中,选取体外受精-胚胎移植(IVFET)或卵胞质内单精子注射(ICSI)两种助孕方式治疗的15例患者为研究对象。取分离纯化的卵巢颗粒细胞,经原代培养48h后分组:激活素A组添加50μg/ml的激活素A,Bimagrumab组添加5μM选择性ActRⅡ抑制剂Bimagrumab,混合组同时添加50μg/ml的激活素A与20μM的Bimagrumab,再继续培养24h。采用Western印迹法检测蛋白表达水平,逆转录及实时PCR检测mRNA表达水平,细胞免疫荧光化学检测蛋白定位。采用单因素方差分析、t检验进行统计学分析。结果 激活素A组中ActRⅡ、p-Smad2/Smad2蛋白表达水平均高于空白对照组,Bimagrumab组中ActRⅡ和p-Smad2/Smad2蛋白表达水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示Bimagrumab对ActRⅡ有抑制效果,激活素A对ActRⅡ有促进效果。混合组中CYP19A1蛋白表达低于空白对照组,激活素A组中CYP19A1蛋白表达水平高于空白对照组;差异有统计学意义(P<0.05)。激活素A组中Smad2和CYP19A1mRNA表达水平高于空白对照组,混合组中Smad2和CYP19A1mRNA表达水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫化学染色显示,Smad2和CYP19A1存在于卵巢颗粒细胞中,Smad2阳性染色定位于细胞胞浆,CYP19A1阳性染色定位于细胞胞浆和细胞膜。结论 颗粒细胞分泌因子激活素A激活ActRⅡ信号通路,增加p-Smad2/Smad2和CYP19A1的表达水平,进一步促进颗粒细胞增殖和分化。

CYP19A1基因多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究

目的 CYP19基因编码产物芳香化酶在雄激素代谢中发挥重要作用。文中探讨CYP19A1基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)发病及性激素的相关性。方法采用病例-对照的研究方法,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法对373例PCOS者(PCOS组)和313例正常对照者(对照组)中CYP19A1基因多态性位点rs2899470进行基因分型,分析2组基因型频率及等位基因频率,并比较不同基因型与年龄、初潮年龄、体重指数(body mass index,BMI)及血清多种性激素水平的关系。结果对照组与PCOS组在年龄、BMI、激素水平差异有统计学意义(P<0.01),在AAM方面差异无统计学意义(P>0.01)。rs2899470基因型频率在PCOS组(GG:44.5%;TG:49.6%;TT:5.9%)和对照组(GG:39.3%;TG:48.6%;TT:12.1%)的分布差异有统计学意义(P=0.013),PCOS组等位基因G的频率明显高于对照组(69.3%vs 63.6%,P=0.025)。PCOS组雌激素/睾酮值与rs2899470基因型有关,PCOS组GG、TG、TT基因型差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CYP19A1基因多态位点rs2899470与PCOS发病有相关性。PCOS患者的rs2899470基因型与血清雌激素/睾酮水平有关。

牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中CYP19A1表达差异分析

旨在探索CYP19A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达水平。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测CYP19A1在牦牛不同级别卵泡(≤3 mm、3~5 mm、5~8 mm及≥8 mm)和卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟的不同阶段(成熟0 h、12 h、18 h及24 h)中的表达水平,免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP19A1蛋白在COCs中的表达定位。结果显示:CYP19A1基因在不同级别的卵泡中均有表达,在卵泡发育早期表达量最高,随卵泡发育呈低水平表达;CYP19A1基因在COCs中的相对表达量显示,未成熟(0 h)COCs的表达量最低,成熟18 h的COCs表达水平达到最高值,之后呈下降趋势。通过免疫荧光技术发现COCs中CYP19A1蛋白的表达主要集中在卵丘细胞上。推测CYP19A1在卵巢颗粒细胞中的表达有助于卵泡发育和卵母细胞成熟雌二醇(Estradiol,E2)的分泌,对卵泡和卵母细胞早期发育有积极的调控作用,为进一步探索CYP19A1在牦牛雌性生殖中的作用机制提供了理论支撑。