食蚊鱼CYP19b基因克隆及环境激素暴露对其表达的影响

为探讨17β-雌二醇(E2)、17α-甲基睾酮(MT)和雄烯二酮(AED)暴露对食蚊鱼脑组织CYP19b表达的影响,首次克隆和分析了食蚊鱼(Gambusia affinis)CYP19b c DNA的全系列。采用静水暴露方法,分别设置2、10、50和100 ng/L E2、MT和AED各4个实验组,并设置对照组和平行组,定量测定了1、3、5和7d脑组织中的CYP19b m RNA表达水平的变化。成功克隆了食蚊鱼CYP19b基因全长,获得基因片段总长1670 bp,ORF(Open Reading Frame)是从52 bp到1554 bp,共编码501个氨基酸。通过与其他相关鱼类CYP19b基因编码的氨基酸序列相似性作比较,食蚊鱼CYP19b基因氨基酸序列的同源性很高。结果显示,短时间的暴露,E2较低浓度组(2和10 ng/L)对食蚊鱼作用不明显,但E2相对较高浓度组(50和100 ng/L)能显著地上调食蚊鱼CYP19b基因的表达(P<0.01)。暴露早期MT对CYP19b表达无明显影响,随着暴露时间的持续延长,除了MT较高浓度组(50 ng/L)外,其他各浓度组MT对CYP19b的表达有显著的抑制作用(P<0.01),并呈一定的剂量相关关系。AED作为雄激素类似物与MT的作用效果相似,相对较高浓度(50和100 ng/L)的AED抑制CYP19b的表达(P<0.01)。研究结果初步表明,3种典型环境激素对食蚊鱼CYP19b基因表达的影响十分显著,但不同的暴露浓度及不同的取样时间点可能表现为促进或抑制CYP19b基因的表达。

大黄鱼cyp19a/b基因的克隆与表达分析

克隆得到了调节雌雄激素平衡的大黄鱼cyp19a/b基因,cyp19a基因c DNA全长1805 bp(NCBI登录号:FJ800566),其中开放阅读框1557 bp,编码518个氨基酸;cyp19b基因c DNA全长2268 bp(NCBI登录号:FJ800567),其中开放阅读框1503 bp,编码500个氨基酸.荧光定量PCR分析显示cyp19a基因在性腺中有明显的表达,且在卵巢中的表达量极显著且高于精巢;在肌肉、脑、肝脏、肾脏、脾脏等组织器官中基本不表达.而cyp19b基因在脑、脾脏和肝脏中有较高表达,在性腺和其他器官中基本不表达.

青鳉脑型芳香化酶 cyp19b 基因的敲除和鉴定

芳香化酶是调节雄激素向雌激素合成转换的关键酶。脑型芳香化酶(cyp19b)的表达在成鱼青鳉的脑中呈现显著雌雄性差异,在性腺中微弱表达且无明显性别差异。为探讨cyp19b基因的生理功能,采用CRISPR/Cas9系统靶向敲除cyp19b基因。在青鳉cyp19b基因的第2和第4外显子上分别设计一个靶位点,通过显微注射gRNA和Cas9蛋白到一细胞期的受精卵进行cyp19b双靶点基因敲除。研究结果表明:成功获得两种可遗传的cyp19b突变等位基因型种鱼,并通过杂合子交配、基因组PCR及DNA测序分析,选育得到两种cyp19b敲除突变型纯合子品系。表型观察分析显示,两种突变型纯合子品系均无明显雌雄性偏差,胚胎均可以正常发育,成鱼均可以正常生殖,提示cyp19b基因的缺失可能不直接影响性腺的雌雄性分化。cyp19b基因如何影响性腺分化和发育,有待进一步深入探讨。

CYP19和CYP1B1基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症易感性的关联分析

目的研究分析CYP19和CYP1B1基因多态性与感染妊娠期肝内胆汁淤积症之间的关联性。方法选择50例妊娠期肝内胆汁淤积症患者作为研究组,另选同期50例正常妊娠期孕妇作为对照组。使用等位基因特异性聚合酶链式反应(PCR)技术与聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术分析两组研究对象的CYP19基因以及CYP1B1基因多态性。结果两组研究对象经电泳实验结果可知,CYP19基因型经Rsal酶切后分出AA型、AG型以及GG型;CYP1B1基因型有CC型与CG型,未发现有GG型。研究组患者CYP19的AA、AG以及GG基因型频率分别为40.00%、48.00%、12.00%,与对照组孕妇的32.00%、52.00%、16.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组患者CYP19的A、G等位基因频率分别为64.00%、36.00%与对照组孕妇的58.00%、42.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组患者CYP1B1的CC、CG基因型频率分别为72.00%、28.00%,与对照组孕妇的82.00%、18.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组患者CYP1B1的C、G等位基因频率分别为86.00%、14.00%,与对照组孕妇的91.00%、9.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠期肝内胆汁淤积症的发生与CYP19基因第3外显子Rsal酶切以及CYP1B1基因外显子3密码432多态性不具有明显的关联性。

饥饿对金鱼卵巢型和脑型芳香化酶基因表达的影响研究

采用RT-PCR技术,研究了金鱼性腺型芳香化酶基因(CYP19A)和脑型芳香化酶基因(CYP19B)的表达对饥饿胁迫的响应机制.研究结果表明:正常投喂的雌性金鱼中CYP19A基因mRNA在卵巢、肝脏、肾脏、肌肉、鳃、头肾、脾脏、脑、肠和心脏10个组织均有表达,表达量呈现递减趋势;饥饿胁迫后,CYP19A基因mRNA在脑和卵巢中表达的变化规律基本一致,即饥饿5d时表达量显著降低(P<0.05),随后表达水平维持稳定.正常投喂的雌性金鱼CYP19B基因mRNA在脑、头肾、性腺、脾、肌肉和心脏6个组织中表达呈现递减趋势;CYP19B基因mRNA在脑和卵巢中的表达量,在饥饿5d时表达量显著降低(P<0.05),随后表达水平维持稳定.这些结果说明,雌性金鱼在饥饿条件下,性激素合成关键酶基因在脑和卵巢中的表达量显著降低,可能影响卵巢发育。