高脂诱导非酒精性脂肪肝对CYP2A5表达的影响

为了研究高脂诱导脂肪肝对CYP2A5表达的影响,选取雄性C57BL/6J小鼠18只,随机分成对照组(control)、高脂组(NAFLD)和阳性对照组(PYR),每组6只,分别饲喂基础饲料和高脂饲料,阳性对照组饲喂基础饲料在处死前一天给予吡唑诱导,连续8周后小鼠断颈处死,取肝脏测定mRNA,CYP2A5的蛋白表达和酶活性。其结果阳性对照组CYP2A5的mRNA、蛋白表达和酶活性与对照组相比分别增加229%、80%、151%差异极显著(P<0.01)。高脂诱导组与对照组相比CYP2A5的mRNA、蛋白表达和酶活性分别增加69%、34%、43%(P<0.01)。表明高脂诱导非酒精性脂肪肝可增加CYP2A5的mRNA、蛋白表达水平和酶活力。

Real-time PCR方法检测高脂饲喂小鼠肝脏CYP2A5的表达

为了建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型小鼠肝组织中CYP2A5表达的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)方法。高脂饮食诱导小鼠至8周,采用qRT-PCR方法检测小鼠肝脏中CYP2A5的表达水平,同时评价该方法的特异性。建立了小鼠肝组织中CYP2A5的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示,该方法的溶解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明,高脂诱导的NAFLD小鼠肝组织中CYP2A5的表达水平极明显高于正常对照组(P<0.01)。表明该实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏度强,为进一步研究小鼠CYP2A5的表达提供了试验基础。

UPLC-Orbitrap HRMS法测定小鼠血液中香豆素及其代谢物

以香豆素为探针底物,建立了测定小鼠血液中香豆素及其代谢物的超高效液相色谱-轨道阱高分辨质谱(UPLC-Orbitrap HRMS)法.以4-甲基伞形酮为内标,样品用乙腈沉淀蛋白后,直接进入XDB-C_(18)色谱柱分离并采用一级全扫描和数据依赖二级扫描(Full MS/dd MS^2)模式进行质谱分析.通过测定7-羟基香豆素的生成量评估5-甲氧基补骨脂素(5-MOP)对小鼠CYP2A5酶活性的影响.结果表明:各目标物的检出限为0.011~0.016 ng/m L,回收率和日内精密度分别为90.2%~110.4%和1.86%~7.08%.方法选择性好,分析效率高,适合于小鼠血液中香豆素及其代谢物的测定.5-MOP组小鼠香豆素的最大血药浓度Cmax为对照组的1.42倍(P<0.01),药时曲线下面积AUC0-∞为1.59倍(P<0.05),半衰期t_(1/2)为1.05倍(P<0.01),5-MOP能够显著抑制小鼠CYP2A5酶活性.

细胞色素P4502A5研究概述

在细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)超家族中,小鼠肝脏的细胞色素P4502A5(cytochrome P4502A5,CYP2A5)可被结构不相关的肝毒性化合物诱导,在肝炎和肝毒性过程中发挥独特的增量调节作用。研究CYP2A5的基因表达调控、催化、诱导或抑制机制及其在化学异物代谢中的作用对于指导人类临床合理用药、预防癌症发生、提高药物疗效和降低药物的毒副作用具有重要意义。作者对CYP2A5的特性、影响因素及其与疾病的关系进行了综述。

夏枯草水提物对吡唑-脂多糖诱导肝损伤的保护作用

目的研究夏枯草水提物对吡唑-脂多糖诱导的小鼠肝脏损伤的保护作用。方法将42只小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、夏枯草水提物低、中、高剂量组以及阳性对照组。灌胃给予小鼠夏枯草水提物,同时采用腹腔注射吡唑-脂多糖造成小鼠肝损伤模型,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽(GSH)的活性/含量以及细胞色素酶CYP2E1和CYP2A5的蛋白表达水平。结果吡唑-脂多糖能够引起提高CYP2E1和CYP2A5的蛋白表达以及肝脏氧化应激并造成肝损伤;夏枯草水提物能够显著降低CYP2E1和CYP2A5的蛋白表达,降低氧化产物H2O2和MDA的含量,以及提高抗氧化系统中CAT、T-SOD活性和GSH含量。结论研究表明夏枯草可能通过抑制CYP2E1和CYP2A5的蛋白表达降低吡唑-脂多糖诱导肝组织内的氧化应激,从而对吡唑-脂多糖引起的肝损伤起保护作用。