二甲基氨基偶氮苯对肝脏和大脑组织中CYP2D1基因表达的影响

目的 研究二甲基氨基偶氮苯 (DAB)对大鼠肝脏和大脑组织中CYP2D1基因表达的影响。方法 用二甲基氨基偶氮苯 (DAB)诱发大鼠形成肝癌 ,应用改进的逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR )技术检测CYP2D1mRNA的表达情况。结果 第1次PCR经 3 0轮循环扩增后 ,正常大鼠和肝癌大鼠的肝脏组织中均有CYP2D 1表达 ,而大脑组织中无表达 ;第 2次PCR以前次的产物作为模板 ,再经 3 0轮扩增后 ,可见正常大鼠和肝癌大鼠的肝脏组织及大脑组织中均有CYP2D 1表达 ,大脑组织PCR产物电泳条带密度低于肝脏组织。结论 肝癌大鼠的肝脏组织中有CYP2D1表达 ,其表达水平与正常组织一样 ,大脑组织中CYP2D1虽有表达 ,但是其表达水平明显低于肝脏组织。

藏药佐太对药物代谢酶CYP2C11和CYP2D1的活性及蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨佐太对药物代谢酶CYP2C11和CYP2D1活性,以及蛋白和mRNA表达的影响。方法 140只SD大鼠,雌雄各半,随机分为CYP2C11(给予探针药物苯妥英)和CYP2D1(给予探针药物右美沙芬)两大组,每大组设7个小组,为对照组、小剂量单次给药组、小剂量多次给药组、中剂量单次给药组、中剂量多次给药组、大剂量单次给药组、大剂量多次给药组,每小组10只。采用探针药物法测定大鼠给予佐太后药物代谢酶活性的变化;ELISA法测定大鼠给予佐太后药物代谢酶蛋白表达的变化;实时定量PCR法测定大鼠给予佐太后药物代谢酶mRNA表达的变化。结果与对照组比较,单次给予佐太12.0 mg·kg^(-1)后,CYP2C11的活性显著升高105.3%;单次给予佐太3.8 mg·kg^(-1)后,CYP2D1的活性显著升高193.5%;CYP2D1的蛋白表达显著升高84.3%;CYP2D1的mRNA表达显著升高76.4%,其他组无显著性变化。多次给予佐太1.2、3.8、12.0 mg·kg^(-1)后,CYP2C11的活性分别显著升高436.8%、131.6%、226.3%;CYP2C11的蛋白表达分别显著升高88.1%、38.7%、54.2%;CYP2C11的mRNA表达分别显著升高126.8%、135.2%、100.0%;CYP2D1的活性分别显著升高145.2%、71.0%、58.1%;CYP2D1的蛋白表达分别显著升高84.5%、73.7%、33.4%;CYP2D1的mRNA表达分别显著升高118.2%、67.3%、36.4%,其他组无显著性变化。结论藏药佐太对CYP2C11和CYP2D1的活性,蛋白质及mRNA表达均具有显著升高效果,显示佐太在作为合剂时可诱导肝药酶代谢加快。

甲基莲心碱对大鼠肝CYP450酶含量及CYP2D1,CYP3A1,CYP2E1mRNA的影响

目的:探讨甲基莲心碱对大鼠微粒体混悬液蛋白中细胞色素P450(CYP450)含量,及其对CYP450亚型CYP3A1,CYP2D1,CYP2E1的mRNA表达水平的影响。方法:Wistar大鼠48只,随机分成空白组、肝药酶诱导剂组、肝药酶抑制剂组,甲基莲心碱(Nef)低、中、高剂量组。对照组给予1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na),诱导剂组地塞米松100mg·kg-1,抑制剂组酮康唑40mg·kg-1,Nef低、中、高剂量组分别为Nef10,20,50mg·kg-1灌胃给药,1日1次,连续6d。取大鼠的肝制备肝微粒体,测定肝微粒体中的蛋白浓度,用分光光度计对样品进行比色测定CYP450总酶的含量。并采用实时定量反转录--聚合酶链反应(Quantitive real-time RT-PCR)定量分析了大鼠CYP450亚型CYP3A1,CYP2D1,CYP2E1的mRNA表达水平。结果:甲基莲心碱在高剂量组的P450含量与空白组比较有显著性差异(P<0.01),提示该药在较大剂量时(20～50mg·kg-1)对CYP450有诱导作用。Nef在高剂量时,分别对CYP3A1和CYP2D1有诱导作用,可显著升高二者的活性(分别为空白组的1.92,2.99倍,P<0.05);中剂量时对CYP2D1具有诱导作用(为空白组的2.40倍,P<0.05);Nef在3个剂量下对CYP2E1均无诱导作用。结论:Nef在20,50mg·kg-1剂量可增加CYP450总酶活性和CYP2D6mRNA的表达,在50mg·kg-1剂量可增加CYP3A1mRNA的表达,提示Nef在较高剂量时可诱导肝药酶加速自身代谢。

血塞通注射液等36种中药对大鼠CYP2D1的作用

目的:研究血塞通注射液等36种中药对大鼠肝微粒体CYP2D1的作用。方法:建立右美沙芬的高效液相-紫外测定方法;以右美沙芬为探针药物,通过考察其体外转化率的变化评价受试中药对大鼠CYP2D1的作用。结果:血塞通注射液、清开灵注射液、银黄口服液、蓝芩口服液使探针药物的转化率分别为(218.7±11.6)pmol/min.mg、(214.9±19.7)pmol/min.mg、(204.3±13.3)pmol/min.mg、(127.0±41.4)pmol/min.mg,显著低于对照组(431.5±4.2)pmol/min.mg,四种药物的IC50分别为1.0ml/100ml、0.6ml/100ml、0.2ml/100ml、0.1ml/100ml。结论:血塞通注射液、清开灵注射液、银黄口服液、蓝芩口服液体外对大鼠CYP2D1有显著抑制作用,且呈浓度依赖性。

UPLC-MS用于体外大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP2D1酶代谢活性表征及动力学研究

目的建立大鼠肝微粒体CYP1A2和CYP2D1酶活性的快速测定方法并考察两种CYP酶反应动力学。方法利用CYP1A2和CYP2D1选择性探针底物即非那西丁与右美沙芬进行温孵实验,采用超高压液相色谱与质谱联用（UPLC-MS）的方法建立相应代谢产物的含量测定方法。结果非那西丁代谢产物对乙酰氨基酚的线性范围为0.409∽10.227μmol·L-1（r2=0.999 1）,LOD和LOQ值分别为0.067和0.267μmol·L-1;右美沙芬代谢产物去甲右美沙芬为0.020∽5.051μmol·L-1（R2=0.998 0）,LOD和LOQ值分别为0.002和0.007μmol·L-1。方法回收率分别为95.9%∽104.0%和102.1%∽107.1%,精密度以RSD值表示均低于5%。CYP酶活性测试及反应动力学表明,CYP1A2和CYP2D1的米氏常数（Km值）分别为（28.4±2.7）和（13.9±1.3）μmol·L-1;其代谢活性（底物浓度为10μmol·L-1时）分别为（1.47±0.12）和（3.98±0.09）nmol·mg-1。结论本实验建立的UPLC-MS分析方法快速、灵敏、准确、可靠,适用于药物代谢研究中CYP1A2和CYP2D1体外活性测定及其反应动力学分析。

血塞通注射液对大鼠体内CYP2D1的影响

目的:研究血塞通注射液连续多次给药后对大鼠CYP2D1酶的影响。方法:12只大鼠采用自身对照的实验方法,先后单用探针药物(氢溴酸右美沙芬10mg.kg-1)以及合用血塞通注射液(180mg.kg-1)7d,采用HPLC法测定血浆中右美沙芬的浓度,观察血塞通注射液对大鼠CYP2D1酶的影响。结果:右美沙芬单用以及与血塞通注射液合用的主要药动学参数分别为t1/2β(153.1±25.4)min,(179.5±48.6)min(P<0.05);AUC0→t(85.6±9.9)mg.L-1.min,(105.2±21.2)mg.L-1.min(P<0.01),CL(0.098±0.012)mL.kg-1.min-1,(0.080±0.016)mL.kg-1.min-1(P<0.01)。结论:血塞通注射液对大鼠CYP2D1酶有明显抑制作用。

CYP2D家族基因在大鼠肝癌组织中的表达及突变研究

背景与目的:观察二甲氨基偶氮苯(Dimethylaminoazobenzene,DAB)诱导大鼠形成肝癌后细胞色素CYP2D家族基因的表达水平及突变并分析其意义。材料与方法:用DAB诱导大鼠形成肝癌,RT_PCR定量分析CYP2D1、CYP2D2和CYP2D4mRNA在肝脏中的表达水平,并对各PCR产物测序分析,观察是否有点突变。结果:CYP2D2和CYP2D4的mRNA表达水平在肝脏癌组织中及癌旁组织中明显低于正常组织,两者在癌组织中的表达水平低于在癌旁组织;CYP2D1在肝脏癌组织中及癌旁组织中的的表达水平虽低于正常组织,但之间无明显的差异性。CYP2D2在肝脏癌组织的PCR产物经测序分析存在碱基插入突变。结论:DAB可以不同程度降低CYP2D家族基因在肝脏的表达,并可以诱发CYP2D2基因点突变,CYP2D家族基因差异性与肝癌形成有密切关系。

毛冬青胶囊对大鼠体内细胞色素P450代谢活性的影响

目的:采用Cocktail探针药物法研究毛冬青胶囊对大鼠CYP1A2、CYP3A2、CYP2C6、CYP2D1、CYP2D2和CYP2E1体内代谢活性的影响。方法:分别以茶碱、咪达唑仑、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬和氯唑沙宗作为探针底物,将大鼠随机分为3组:空白对照组、毛冬青的低剂量组和高剂量组。低、高剂量组每日分别灌胃给予毛冬青胶囊1.8、3.6 g·kg-1,空白对照组每日给予与低剂量组等体积的生理盐水,各组均为1次/天,连续14 d。各组分别于第15天给予Cocktail探针药物,于给药前、后不同时间点取血,用LC-MS/MS检测各探针药物的血药浓度,计算药代动力学参数。结果:茶碱低剂量组cmax、AUC0-t有极显著差异(P≤0.01);甲苯磺丁脲高剂量组和氯唑沙宗低剂量组AUC0-t有显著差异(P≤0.05);其他无统计学差异。结论:毛冬青胶囊对大鼠体内CYP2C6和CYP1A2有强诱导作用,对CYP2E1有中强诱导作用,其他亚型基本无影响。

Caspase抑制剂F1013对大鼠肝CYPs含量及其主要亚型mRNA表达的影响

目的:探讨Caspase抑制剂F1013对大鼠肝CYPs含量及其主要亚型CYP1A2,CYP2D1,CYP2E1,CYP2C11,CYP3A1 mRNA相对表达水平的影响。方法:Wistar大鼠40只,随机分成空白组、诱导剂组、F1013低、中、高剂量组。空白组和诱导剂组分别灌胃给予0.9%氯化钠溶液和地塞米松50 mg·kg-1.d-1,F1013低、中、高组分别肌内注射F1013 1.25,2.5,5.0 mg·kg-1.d-1,每日1次,连续6 d。取大鼠肝组织制备肝微粒体,测定微粒体蛋白浓度及CYP总酶含量。并采用实时定量荧光RT-PCR法分析大鼠CYP各主要亚型mRNA的相对表达水平。结果:F1013低、中、高组肝微粒体CYP总酶含量与空白组比有显著增高(P<0.05),提示该药对CYP总酶有诱导作用。低剂量组CYP2D1酶活性显著升高(为空白组2.54倍,P<0.05);中剂量组CYP1A2及CYP2E1酶活性显著升高,分别为空白组4.24和2.46倍(P<0.05);3个剂量的F1013对CYP2C11均无显著诱导作用。结论:F1013在1.25,2.5,5.0 mg.kg-1剂量范围内,可显著诱导CYP总酶活性。F1013 1.25 mg·kg-1可诱导CYP 2D1 mRNA表达,2.5 mg·kg-1剂量可诱导CYP1A2及CYP2E1 mRNA的表达,其诱导机制可能与升高各主要亚酶mRNA相对表达水平有关。

鸡尾酒法评价猫人参对大鼠细胞色素450酶活力的影响

目的运用鸡尾酒法评估猫人参对大鼠CYP450酶活性(CYP2B1、CYP2D1、CYP3A2、CYP1A2、CYP2C11)影响。方法 24只大鼠随机分成猫人参低、中、高3组和对照组。猫人参组给予大鼠猫人参煎煮液(0.15 g/ml),低剂量组0.5 ml/只,中剂量组1.0 ml/只,高剂量组2.0 ml/只,对照组给予大鼠生理盐水2 ml/kg,持续给药30 d。30 d以后,4组灌胃给予大鼠5种探针药物,采集血浆样品,后用UPLC-MS/MS检测血浆中探针药及其代谢产物的浓度。结果与对照组对比,猫人参低中高3组的安非他酮的AUC都有升高(P <0.05),CL降低(P <0.05),高剂量组的美托洛尔AUC升高(P <0.05)、CL降低(P <0.05),低剂量组羟基美托洛尔的CL降低(P <0.05),低剂量组和高剂量组的甲苯磺丁脲AUC升高(P <0.05),参高剂量组的非那西汀AUC降低(P <0.05)。结论连续30 d大鼠灌胃猫人参,说明可能稍有抑制大鼠CYP2B1、CYP2D1和CYP2C9酶活性,稍有诱导大鼠CYP1A2酶活性的作用。

鸡尾酒法评价石蒜对大鼠细胞色素P450酶活性的影响

目的运用鸡尾酒法评价石蒜对细胞色素P450酶活性的影响。方法将大鼠随机分为对照组和石蒜低、高剂量组。对照组给予生理盐水,石蒜低、高剂量组大鼠灌胃给药0.5,1.0 g·kg^(-1)石蒜,连续给药15 d。然后第16天给予探针药物,UPLC-MS/MS检测探针药浓度。结果与对照组对比,石蒜低剂量组和高剂量组的安非他酮AUC_((0-t))、C_(max)都显著升高(P<0.05),CL_(z/F)显著降低(P<0.05)。与对照组对比,石蒜高剂量组的美托洛尔、咪达唑仑和非那西丁AUC_((0-t))显著降低(P<0.05)、CL_(z/F)显著升高(P<0.05),而低剂量组与对照组比较差异无统计学意义。与对照组对比,石蒜组的甲苯磺丁脲AUC_((0-t))、CL_(z/F)差异无统计学意义,C_(max)显著降低(P<0.05)。结论石蒜能抑制大鼠CYP2B1酶活性,诱导大鼠CYP2D1、CYP3A2和CYP1A2酶活性,稍有诱导大鼠CYP2C11酶活性的作用。

基于超高效液相色谱-串联质谱技术评估金荞麦对大鼠细胞色素P450同工酶活力的影响

目的运用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术评估金荞麦对大鼠CYP450酶活性影响。方法24只大鼠随机分成金荞麦低剂量、中剂量、高剂量3组和对照组。金荞麦组给予大鼠金荞麦煎煮液(0.15 g/ml),低剂量组0.5 ml/只,中剂量组1.0 ml/只,高剂量组2.0 ml/只,对照组给予大鼠生理盐水2 ml/kg,持续给药30 d。30 d以后,4组灌胃给予大鼠5种探针药物,采集血浆样品,后用UPLC-MS/MS检测血浆中探针药及其代谢产物的浓度。结果与对照组对比,金荞麦的低剂量组的美托洛尔AUC、C_(max)升高(P<0.05),CL降低(P<0.05)。与对照组对比,金荞麦中剂量组和高剂量组的羟基美托洛尔C_(max)升高(P<0.01)。与对照组对比,金荞麦低剂量的羟基咪达唑仑AUC和C_(max)降低(P<0.05),CL升高(P<0.05),中剂量组的C_(max)降低(P<0.05)。结论金荞麦对大鼠CYP2B1、CYP1A2和CYP2C9酶活性影响不大。