探针药物法评价柚皮苷对人肝微粒体CYP2E1酶代谢活性的影响

目的:考察柚皮苷对CYP2E1酶代谢活性的影响,以探讨与其它以CYP2E1为主要代谢酶的药物联用时,是否可能产生潜在的相互作用。方法:在人肝微粒体代谢体系中,以氯唑沙宗作为底物探针,建立表征CYP2E1酶代谢活性的HPLC检测方法,分别考察体外代谢体系的最适宜底物浓度、代谢时间、pH值以及孵育温度。在确定的条件下,将柚皮苷稀释成不同浓度,分别与氯唑沙宗共同孵育于人肝微粒体代谢体系中,测定在有或无柚皮苷存在下氯唑沙宗的剩余量,以评估柚皮苷对CYP2E1酶代谢的影响。结果:在人肝微粒体孵育体系中,氯唑沙宗代谢最适宜的体外代谢条件为底物浓度2.4g/L,代谢时间3.5h,pH 7.5,孵育温度37℃。柚皮苷对CYP2E1酶代谢活性有一定的抑制作用,IC50为10.07μmol/L。结论:柚皮苷对经CYP2E1酶代谢的药物可能会产生微弱的药物相互作用。

体内、体外相结合评价CYP2E1酶活性的方法学研究

目的:以氯唑沙宗(chlorzoxazone,CZX)为"探针药物",建立一种快速、准确的体内、体外相结合评价细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)酶活性的HPLC-DAD检测方法。方法:体内实验为大鼠静脉注射CZX,剂量20 mg.kg-1,按时间点眼眶取血,检测CZX与其代谢产物6-羟基氯唑沙宗(6-hydroxy chlorzoxazone,6-OHCZX)的血浆药物浓度。体外实验为不同浓度CZX与大鼠肝微粒体温孵后,检测温孵体系中6-OHCZX的浓度,计算酶动力学参数来评价CYP2E1酶的活性。采用Agilent Extend-C18色谱柱(6 mm×100 mm,5μm),以非那西丁为内标,流动相为乙腈-0.6%乙酸水溶液,流速1.0 mL.min-1,紫外检测波长290 nm,柱温30℃。结果:体内、体外实验结果发现CZX,6-OHCZX的线性范围、日内和日间精密度、相对回收率、稳定性均符合生物样品的检测要求。结论:大鼠血浆及肝微粒体温孵体系中的其他内源性物质不干扰待测物的测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合CZX及其代谢产物6-OHCZX的测定。

CYP2E1 Ras I基因型对苯酚诱导的酶活性和DNA损伤作用的影响

[目的]研究3种CYP2E1 Ras I基因型对苯酚诱导永生化人淋巴细胞的CYP2E1酶活性及DNA损伤作用的影响。[方法]加入不同浓度的苯酚对CYP2E1 Ras I不同基因型的永生化人淋巴细胞进行24～72 h染毒,采用四甲基偶氮唑蓝法(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)测定细胞毒性并确定苯酚染毒剂量;采用苯胺分光光度法测定CYP2E1酶活性;采用单细胞凝胶电泳(SCGE)法测定DNA损伤作用。[结果]0．05％苯酚24 h染毒对CYP2E1 Ras I野生、杂合及突变基因型细胞均产生生长抑制作用,苯酚对细胞24～72 h染毒的最大无作用浓度为0．01％。各基因型细胞经一定浓度苯酚诱导后酶活性升高(P<0．05),其中野生型细胞经0．005％和0．01％浓度的苯酚染毒可出现酶活性增高的效应,突变型和杂合型细胞经0．01％浓度染毒可出现酶活性增高的效应,且染毒72 h时,在0．01％苯酚染毒剂量下各基因型细胞的CYP2E1酶活力出现明显差异,其中野生基因型细胞的CYP2E1酶活力显著高于突变型、杂合型基因型细胞(P<0．05)。各基因型细胞经一定浓度苯酚染毒后可出现DNA损伤效应,与对照相比,细胞的拖尾率、尾DNA含量及尾长显著升高(P<0．05),且染毒48 h、72 h时,野生基因型细胞的DNA损伤效应与突变型、杂合型细胞相比更为明显(P<0．05)。苯酚诱导后细胞的DNA损伤与CYP2E1酶活性之间呈现明显正相关性。[结论]CYP2E1 Ras I不同基因型明显影响苯酚对人淋巴细胞CYP2E1酶的诱导活性和DNA的损伤程度,其中CYP2E1 Ras I野生基因型细胞的作用最为明显。

温度对鲤CYP2E1同工酶活性的影响

为了探究温度对鲤CYP2E1同工酶活性的影响,本试验以氯唑沙宗(CZX)为探针药物探究不同水温(5、10、15、20、25、30℃)对鲤CYP2E1同工酶活性的影响。结果表明,CYP2E1同工酶的K_m值(以CZX作为探针)在反应温度为25℃时相对较低,其V_(max)(以CZX作为探针)在该温度时相对较高;反应温度对CYP450酶活性的影响能够间接反映水温对鱼类体内药物代谢的影响;可以推断鱼类在不同水温条件下药物动力学参数的差异主要是由于其CYP450酶在不同温度下的活性差异所造成的。

CYP2E1酶活性与正己烷氧化损伤的相关性

将48只小鼠随机分为低、中、高剂量染毒组和对照组,染毒组分别以500、1 000、2 000 mg/kg正己烷灌胃染毒,对照组灌服等容量的溶剂花生油。灌胃容量0.1 ml/10 g,1次/d,3周后脱臼处死,摘取肝脏制备肝匀浆组织液。检测正己烷体内代谢酶CYP2E1的活性、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量。随着染毒剂量的增加,肝脏指数有增大的趋势(F=8.015,P=0.000),肝组织中CYP2E1的活性、髓鞘碱性蛋白(MBP)和MDA含量有增加的趋势,SOD水平明显降低(F=4.771,P=0.010)。Pearson相关分析显示,CYP2E1酶活性与肝组织内SOD和MBP含量呈正相关性。表明正己烷对小鼠的CYP2E1酶具有激活作用,随着正己烷浓度的增加,机体启动抗氧化保护机制,CYP2E1酶活性被抑制,正己烷产生氧化损伤和神经功能损伤叠加作用,加重了正己烷的毒性损伤。

Relationship between genetic polymorphisms of metabolizing enzymes CYP2E1, GSTM1 and Kazakh's esophageal squamous cell cancer in Xinjiang, China

AIM: To analyze the relationship between genetic polymorphisms of metabolizing enzymes CYP2E1, GSTM1 andKazakh's esophageal squamous cell cancer in China.METHODS: The genotypes of cytochromes P450 (CYP) 2E1 and glutathione S-transferase (GST) M1 were investigated by polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) following PCR in 104 Kazakh's patients with esophageal cancer (EC) and 104 non-cancer controls.RESULTS: The frequency of CYP2E1 c1/c1 genotype was significantly higher in patients with cancer (77.9%) thanin control subjects (24.0%) (P＜0.05; OR, 11.13; 95%CI,5.84-21.22). The difference of GSTM1 null was significantly more frequent in the cancer (34.6%) vsthe control group (3.8%) (P＜0.05; OR, 13.24; 95%CI, 4.50-38.89). On the other hand, the combination of GSTM1 presence and CYP2E1 c1/c1 genotypes increased the risk for cancer (P＜0.05;OR, 13.42; 95%CI, 6.29-28.3).CONCLUSION: The CYP2E1 c1/c1, GSTM1 deletion genotypes are genetically susceptible biomarkers for ESCC in Kazakh population. Individuals with allele c1 of RsaI polymorphic locus for CYP2E1 may increase the risk of ESCC. Moreover, CYP2E1 wild type (c1/c1) increased thesusceptibility to ESCC risk in Kazakh individuals with GSTM1 presence genotype.

抗结核药物致肝损害与CYP2E1基因多态性

目的探讨抗结核药物致肝损害(ATLI)易感性与代谢酶基因(CYP2E1基因)多态性的关系。方法采用Meta分析的方法,对国内外公开发表的有关CYP2E1基因多态性与ATLI易感性的关系的研究文献进行综合定量再分析,根据资料异质性检验决定采用随机效应模型或固定效应模型计算合并OR值。发表偏倚用失安全数法估计。结果共纳入国内外研究文献5篇,累计肝损害组194例,对照组639人,CYP2E1c1/c1基因型与ATLI易感性关系之间的合并OR值为1.86(95%CI=0.95～3.66),排除1篇研究对象为儿童的文献,合并OR值为2.22(95%CI=1.51～3.26)。结论 ATLI易感性与CYP2E1基因多态性无关;但携带CYP2E1c1/c1基因型的成人结核病患者发生肝损害的危险性可能会增加。

酒精性肝病与CYP2E1的变化

目的介绍酒精性肝病患者肝脏细胞色素酶P4502E1(CYP2E1)的变化和CYP2E1改变对药物代谢的影响及影响机制,以期对酒精性肝病患者合理用药有所帮助。方法根据酒精性肝病导致CYP2E1表达增多,综述CYP2E1表达升高对相关小分子化合物和药物代谢产生的影响。结果与CYP2E1代谢相关的很多化合物和药物会在酒精性肝病人群中产生不良反应。结论 CYP2E1表达增多是酒精性肝病患者对一些药物产生不良反应的原因。

胆宁片防治非酒精性脂肪肝的实验研究

目的研究胆宁片对大兔脂肪肝的防治作用。方法采用高胆固醇膳食致兔脂肪肝模型,研究胆宁片对大兔非酒精性脂肪肝的防治作用。结果模型组与胆宁片组的TC数值分别为(15.36±9.01)mg/dL、(2.67±5.35)mg/dL,TG分别为(1.11±0.42)mmol/L、(0.56±0.2)mmol/L,LDL-C分别为(13.16±7.39)mmol/L、(1.98+5.00)mmol/L,HDL-C分别为(0.49±0.23)mmol/L、(0.90±0.29)mmol/L,2组数据相比较,差异有显著性统计学意义(P<0.01),模型组新西兰兔的肝脏组织CYP7A1 mRNA表达较胆宁片组低,其中模型组与胆宁片组条带值分别为(0.56±0.14)(1.02±0.09),差异有统计学意义(P<0.001)。而模型组CYP2E1 mRNA表达较胆宁片组高,其中模型组与胆宁片组条带值分别为(1.49±0.31)(1.22±0.20),差异有统计学意义(P<0.05)。结论胆宁片对实验性大兔脂肪肝有一定的治疗作用。