异甘草酸镁对CCl_4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察异甘草酸镁对CCl_4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响,从代谢酶方面探讨异甘草酸镁保肝作用的机制。方法将大鼠分为正常对照组、模型组和给药组,每组6只。尾静脉注射给药,给药组给予20mg/kg异甘草酸镁,正常组及模型组给予同容积生理盐水,连续14d。模型组及给药组于给药第13天20:00点灌胃25%CCl_4,剂量为1.6mL/kg,制备大鼠急性肝损伤模型。各组大鼠于末次给药2h后,从髂动脉放血处死,取肝组织进行苏木精-伊红染色,观察肝组织病理形态变化;采用RT-PCR及Western-blot检测各组大鼠肝组织中CYP1A2、CYP2E1蛋白及mRNA表达水平。结果肝组织病理学检查显示异甘草酸镁能改善肝组织损伤;模型组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),给药组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平较模型组显著降低(P<0.05)。结论异甘草酸镁能够治疗肝损伤,其减毒机制可能与抑制CYP1A2、CYP2E1的表达有关。

CD44和CYP2E1基因多态性与食管癌的相关性研究

背景与目的:食管癌是一种常见的恶性肿瘤,由于侵袭转移,手术后存活率低,而CD44和CYP2E1就是和侵袭转移相关的基因,因此我们研究了CD44和CYP2E1基因多态性与食管癌的关系。方法:应用PCR及Western blot技术等方法对45例食管癌患者癌组织及癌旁组织进行CD44表达分析和CYP2E1基因多态性分析。结果:癌组织中CD44蛋白呈高表达,明显高于癌旁组织,差异具有显著性(P<O.01)。CYP2E1三种基因型中,C1C1、C1C2基因型的表达明显高于C2C2,差异具有显著性(P<O.05)。结论:食管癌组织中CD44和CYP2E1多态性改变与食管癌的易感性关系较密切。

阿卡波糖、二甲双胍、吡格列酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织肿瘤坏死因子-α及细胞色素P4502E1的影响

目的观察阿卡波糖、二甲双胍、吡格列酮对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞色素P4502E1(CYP2E1)的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组(普通饲料喂养)、非酒精性脂肪肝组(高脂饮食喂养)、阿卡波糖干预组[高脂饮食喂养加阿卡波糖100 mg/(kg.d)灌胃]、二甲双胍干预组[高脂饮食喂养加二甲双胍500 mg/kg.d)灌胃]、吡格列酮干预组[高脂饮食喂养加吡格列酮15 mg/(kg.d)灌胃]。饲养12周末处死大鼠,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性以及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量,测量空腹血糖(FBG)及胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察肝脏病理形态学的变化;Real time PCR和免疫组化法检测肝组织中TNF-α及CYP2E1 mRNA及蛋白表达的变化。结果 3种药物干预组均可降低ALT,AST,ALP活性(P<0.05),减少TC,TG,FFA含量(P<0.05),改善大鼠肝脏病理形态学改变,降低肝脏中TNF-α及CYP2E1 mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。二甲双胍、吡格列酮两组间无显著差异(P>0.05),阿卡波糖组的作用明显低于前两者(P<0.01)。结论阿卡波糖、二甲双胍、吡格列酮均可减少TNF-α及CYP2E1的表达,改善非酒精性脂肪肝的病理变化,其中二甲双胍、吡格列酮作用相似,阿卡波糖作用较弱。

细胞色素P4502E1和氧化应激与大鼠非酒精脂肪性肝炎的关系

目的观察大鼠非酒精脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepattiis,NASH)组织病理形态学改变,探讨其与细胞色素P4502E1的表达和氧化应激的关系。方法用高脂饮食制备非酒精脂肪性肝人鼠模型,正常组普通饲料喂养,12w末处死各组大鼠,全自动生化仪测定血清ALT、AST、血糖、胰岛素,光镜下观察肝组织病理形态学改变,测定肝组织CYP450及同工酶CYP2E1含量,TBA法和黄嘌呤氧化酶法测定肝组织MDA含量和SOD活性。结果与对照组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、血糖、胰岛素显著升高(P<0.05),肝组织MDA及CYP2E1含量显著增高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05),肝脏的脂肪变性程度和炎症活动度均显著增高(P<0.05)。结论成功复制NASH大鼠模型,CYP2E1与非酒精性脂肪性肝炎有关,MDA和SOD在NASH脂质过氧化反应中发挥重要作用。

构建高效抑制细胞色素P450 2E1基因转录位点的siRNA表达载体

目的寻找高效抑制细胞色素P450 3E1(CYP2E1)基因转录的位点,构建该位点的siRNA表达载体。方法用PCR的扩增物作为表达框架,直接转染E47细胞,产生siRNA抑制CYP 2E1基因转录,筛选高效抑制CYP 2E1基因表达的位点,并构建BS/U6/CYP2E1的表达质粒,转染E47细胞,观察该质粒在E47细胞中发生RNAi效果。结果4个备选位点的抑制效率最高,用该位点构建BS/U6/CY2E1的表达质粒可有效地、特异地抑制CYP2E1基因的表达。结论用PCR产物作为表达框架,在体内产生双链的siRNA作为筛选高效的RNA干扰位点的方法,既快速又简便。用该位点的构建BS/U6/CYP2E1的表达质粒可用于CYP2E1基因的功能研究、酒精性脂肪肝病和非酒精性脂肪性肝病的发病机制及肿瘤发生的研究等领域中。

利福平致大鼠肝损伤模型肝组织CYP2E1表达的动态观察

目的:动态观察利福平肝损伤大鼠肝组织中CYP2E1的表达。方法:健康清洁级SD大鼠48只,雌雄各半,随机分成正常组和利福平组两组,各24只。利福平组实验大鼠每天以利福平混悬液50mg/(kg.d)灌胃,正常组大鼠每天以去离子水灌胃。分别在实验7、14、21天末及停药后14天末各取6只实验大鼠脱臼处死,迅速打开腹腔,取部分肝组织置4%多聚甲醛溶液中固定24小时,石蜡包埋切片,进行CYP2E1免疫组化染色。结果:利福平组大鼠肝组织CYP2E1表达跟正常组比较明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),其中第14天时达到最高点。利福平组CYP2E1表达在21天时有所下降,停药14天后,CXP2E1表达明显下降,跟实验第7、14天时比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利福平所致肝毒性有一定蓄积效应,这种效应可随着停药而改善。CYP2E1表达可反应利福平致肝组织损伤的程度。

混苯接触工人遗传损伤和代谢酶基因多态性的关系

[目的]探讨混苯接触工人外周血淋巴细胞染色体损伤状况及其与代谢酶基因CYP2E1和NQO1多态性的关系。[方法]采用胞质分裂阻滞微核实验评价461名混苯作业工人和88名对照组工人的染色体损伤水平,应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性检测CYP2E1 Pst和NQO1609基因多态性。[结果]接触组和对照组淋巴细胞微核率分别为(2.12±1.87)‰和(1.19±1.68)‰,差异有统计学意义(P<0.01),单因素和多因素分析结果均显示,NQO1609野生纯合者(CC)为染色体损伤的易感人群。年龄增长是微核率增加的危险因素,未发现性别、吸烟、饮酒与微核率之间的关系。[结论]双核淋巴细胞微核数可以作为苯接触早期健康损害的指标。混苯中甲苯和二甲苯可能不是导致遗传损伤的主要物质。混苯接触诱导的染色体损伤与NQO1609位点多态有关。

CYP2E1在大蒜油拮抗正己烷神经损伤中的作用

目的研究CYP2E1在大蒜油（garli coil，GO）阻止正己烷（n—hexane）致大鼠周围神经损伤的作用及其机制。方法雄性Wistar大鼠50只，随机分为正常对照组、GO对照组、正己烷模型组、GO低剂量加正己烷组和高剂量加正己烷组（n=10）。模型组及GO低、高剂量组大鼠分别给予2000mg／kg正已烷灌胃；GO低、高剂量组大鼠在正己烷灌胃前1h分别给予40、80mg／kgGO灌胃，GO对照组给予80mg／kg，每周6次，持续10周。每2周测步态评分，监测大鼠周围神经损伤情况。于第10周末，断头处死大鼠，检测肝组织中CYP2E1表达及活力的改变，以及血清中2，5-己二酮（2，5-HD）含量的变化。结果与正常对照组相比，GO对照组大鼠肝脏中CYP2E1含量及活力分别下降83．1％和48．3％，且差异均有统计学意义（P〈0．01）；与正常对照组相比，模型组大鼠肝脏中CYP2E1含量及活力分别升高122．5％和72．2％，且差异均有统计学意义（P〈0．01）；与模型组相比，GO低、高剂量组大鼠肝脏中CYP2E1含量分别降低32．9％和39．1％，且CYP2E1活力分别降低27．4％和44．5％，差异均有统计学意义（P〈0．01）；与模型组相比，GO低、高剂量组大鼠血清中2，5-HD含量分别下降47．7％和78．7％，且差异均有统计学意义（P〈0．01）。各组步态评分显示，模型组及GO低、高剂量组均明显高于对照组，但GO低、高剂量组低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GO能够有效拮抗正己烷的外周神经损伤，其机制可能与肝脏中CYP2E1含量及活力降低，使正己烷代谢为2，5-HD减少有关。