合成冰片对大鼠肝CYP450酶含量及CYP3A1 mRNA表达的影响

[目的]研究冰片对大鼠肝脏细胞色素氧化酶(cytochrom e P450,CYP450)含量及其亚型CYP3A1m RNA表达的影响。[方法W]istar大鼠合成冰片(设0.3gk/g和0.03gk/g剂量组,1次d/,连续7d)灌胃,以溶媒羧甲基纤维素纳(CM C-Na)和苯巴比妥钠为对照组,钙沉积法提取肝微粒体,紫外分光光度法测定CYP450含量,实时定量RT-PCR法检测肝脏CYP3A1m RNA的表达。[结果]0.3gk/g合成冰片口服可诱导大鼠肝脏CYP450酶含量增高(P<0.05),CYP3A1m RNA表达上调(P<0.05)。[结论]高剂量合成冰片口服可能影响肝脏药物代谢。

γ射线对大鼠肝脏代谢酶CYP3A1的多水平影响

目的探究γ射线对肝脏核心药物代谢酶CYP3A1在mRNA、蛋白以及代谢活性多水平的影响。方法Wistar大鼠随机分为对照组、辐射后24 h组、辐射后72 h组。6 Gyγ射线单次全身辐射实验组大鼠,于辐照后24 h、72 h眼眶静脉丛取血,进行血常规检测与血生化分析;取肝脏组织,RT-PCR定量CYP3A1 mRNA以及肝脏特异性的microRNA(miR-122-5p),Western blot分析CYP3A1蛋白表达水平;利用特异性底物咪达唑仑与液质联用方法检测CYP3A1代谢活性水平。结果与对照组相比,辐射组大鼠体重明显降低;白细胞数量明显减少;谷丙转氨酶活性持续降低,碱性磷酸酶活性明显降低,总胆红素、总胆汁酸水平明显升高,表明辐射后大鼠肝脏可能受损。CYP3A1 mRNA相对表达量在辐射后24 h、72 h持续明显升高;CYP3A1蛋白表达及代谢活性水平在辐射后24 h呈现较明显的升高趋势,在辐射后72 h较对照组明显上升。同时,监测到辐射24 h组和72 h组大鼠肝脏miR-122-5p表达量快速且持续下降。结论γ射线辐射对肝脏可能具有一定的损伤作用,其造成肝组织中关键代谢酶CYP3A1在mRNA和蛋白表达水平的持续上调,以及代谢活性水平的升高,调控机制可能与miR-122-5p有关。

乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用

目的:阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制。研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响。结果:乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升。结论:乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用。

甲基莲心碱对大鼠肝CYP450酶含量及CYP2D1,CYP3A1,CYP2E1mRNA的影响

目的:探讨甲基莲心碱对大鼠微粒体混悬液蛋白中细胞色素P450(CYP450)含量,及其对CYP450亚型CYP3A1,CYP2D1,CYP2E1的mRNA表达水平的影响。方法:Wistar大鼠48只,随机分成空白组、肝药酶诱导剂组、肝药酶抑制剂组,甲基莲心碱(Nef)低、中、高剂量组。对照组给予1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na),诱导剂组地塞米松100mg·kg-1,抑制剂组酮康唑40mg·kg-1,Nef低、中、高剂量组分别为Nef10,20,50mg·kg-1灌胃给药,1日1次,连续6d。取大鼠的肝制备肝微粒体,测定肝微粒体中的蛋白浓度,用分光光度计对样品进行比色测定CYP450总酶的含量。并采用实时定量反转录--聚合酶链反应(Quantitive real-time RT-PCR)定量分析了大鼠CYP450亚型CYP3A1,CYP2D1,CYP2E1的mRNA表达水平。结果:甲基莲心碱在高剂量组的P450含量与空白组比较有显著性差异(P<0.01),提示该药在较大剂量时(20～50mg·kg-1)对CYP450有诱导作用。Nef在高剂量时,分别对CYP3A1和CYP2D1有诱导作用,可显著升高二者的活性(分别为空白组的1.92,2.99倍,P<0.05);中剂量时对CYP2D1具有诱导作用(为空白组的2.40倍,P<0.05);Nef在3个剂量下对CYP2E1均无诱导作用。结论:Nef在20,50mg·kg-1剂量可增加CYP450总酶活性和CYP2D6mRNA的表达,在50mg·kg-1剂量可增加CYP3A1mRNA的表达,提示Nef在较高剂量时可诱导肝药酶加速自身代谢。

实时定量PCR法绝对定量检测大鼠肝脏CYP3A1和CYP3A2 mRNA的诱导表达(英文)

由CYP3A诱导作用引起的临床药物-药物间相互作用能同时降低CYP3A酶底物药物的体内暴露量和药理活性。CYP3A mRNA水平的增高常用于评价受试化合物对CYP3A酶的诱导作用。本实验建立并验证了一种绝对定量的实时PCR方法用于测定大鼠肝中CYP3A1和CYP3A2 mRNA的表达水平。设计的CYP3A1、CYP3A2和GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶,看家基因）引物具有很高的特异性。CYP3A1、CYP3A2和GAPDH在1-1×10~6 attomol/μL浓度范围内,循环阈值和对数浓度呈现良好的线性关系,并且具有良好的实验组内和组间可重复性。该方法成功应用于考察大鼠腹腔注射给予100 mg/kg地塞米松后肝脏中CYP3A1和CYP3A2 mRNA诱导作用随时间的变化规律。总RNA中CYP3A1和CYP3A2mRNA的基础水平分别为37.78和252.31 attomol/μg。随后CYP3A1和CYP3A2 mRNA水平逐渐增加并分别在24小时和42小时达到最大诱导效应,分别为基础水平的19倍和8倍。最终CYP3A1和CYP3A2 mRNA在地塞米松给药60小时后回落到各自的基础水平。

何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究

大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10 g·kg^(-1))7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响。与空白对照组相比,1,10 g·kg^(-1)何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P<0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg^(-1)组P<0.05,10 g·kg^(-1)组P<0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P<0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg^(-1)何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P<0.01)。