辛伐他汀和阿托伐他汀与CYP3A4酶抑制剂/诱导剂在心内科患者中联用情况调查

目的:调查临床治疗中辛伐他汀和阿托伐他汀与CYP3A4酶抑制剂/诱导剂联合使用的情况。方法:随机抽取某三甲医院2012年度心内科应用辛伐他汀和阿托伐他汀的病例各50份,应用SPSS18.0统计软件,对患者的一般状况、用药情况及化验指标进行统计分析,计算各项指标的平均值或比例。结果:本调查纳入100名患者,66%的患者在使用辛伐他汀或阿托伐他汀的同时使用CYP3A4酶抑制剂,其中,辛伐他汀占30%,阿托伐他汀占36%,平均联合用药时间为(7.04±0.29)d。联合使用的CYP3A4酶抑制剂药物有氨氯地平片、地尔硫片、雷尼替丁片、胺碘酮、银杏叶片;CYP3A4酶诱导剂药物主要有卡马西平和醋酸泼尼松龙片。辛伐他汀或阿托伐他汀与CYP3A4酶抑制剂联合使用频率远远多于与CYP3A4酶诱导剂联合使用频率。比较合用和无合用CYP3A4酶抑制剂患者的主要生化指标,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:辛伐他汀或阿托伐他汀与CYP3A4酶抑制剂联合使用情况在该医院较常见。建议尽量避免联用具有相互作用的药物,如必须使用,应按说明书要求不超剂量用药,并充分关注药物相互作用导致的不良反应,对患者后续情况定期随访。

CYP3A4和CYP2B6药物诱导剂体外筛选体系的建立

目的构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台。方法利用双荧光素酶报告基因系统,将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和2B6启动子序列插入报告基因上游,将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞,用含有利福平或DMSO培养基培养48h后裂解进行双荧光素酶活性检测。结果经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著。结论本研究构建的CYP3A4和2B6体外筛选平台,可以有效地用于体外诱导剂的筛选。

4代甘草酸制剂对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性影响的比较

对国内外上市的4代甘草酸制剂对肝微粒体CYP3A酶活性的影响进行分析与比较.将CYP3A酶的特异性探针睾酮和不同浓度的甘草酸制剂加入体外大鼠肝微粒体孵育体系,用高效液相色谱法测定睾酮的羟基化代谢产物6β-羟基睾酮的含量,评价甘草酸制剂对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的影响.结果显示,所采用的方法符合生物样品检测标准;上市4代甘草酸制剂对CYP3A酶表现出诱导或抑制作用,第1、2代甘草酸制剂对CYP3A酶活性的影响以诱导作用为主,第3、4代甘草酸制剂对CYP3A酶活性的影响以抑制作用为主.每种甘草酸制剂对CYP3A酶活性强度的影响与给药浓度有关,结果有显著性差异.联合用药时应考虑不同甘草酸制剂对CYP3A酶活性的影响,研究结果为临床合用药物相互作用的研究以及剂量的调整提供依据.

综合性医院门诊处方中常见CYP3A4抑制剂和诱导剂的代谢性相互作用调查

代谢性相互作用是指两种或两种以上药物在同时或前后序贯用药时,在代谢环节发生的相互作用[1]。根据对药物代谢酶的作用结果,可以分为酶抑制作用和酶诱导作用。肝脏的细胞色素P450系统（CYP）在药物的代谢中起着重要作用,其中CYP3A4占肝脏CYP总量的30%,含量最高,

某院2016～2018年CYP3A4酶中效抑制剂地尔硫?联合用药情况调查

目的调查某院CYP3A4酶中效抑制剂与地尔硫[艹卓]的联合用药情况,为临床合理用药提供参考.方法对某院门诊药房2016~2018年地尔硫[艹卓]的联用处方进行汇总分析,包括患者的基本情况,联用CYP3A4酶诱导剂或者底物药物的种类、联用处方数和联用剂量.参考现有文献,从CYP3A4酶代谢角度对联合用药的合理性进行分析.结果收集地尔硫[艹卓]联用处方397例,联用具有药物间相互作用的处方309例,占77.8%.联用药物包括CYP3A4酶诱导剂吡格列酮,CYP3A4酶底物阿托伐他汀、辛伐他汀、硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、沙格列汀和瑞格列奈.结论应该避免已经明确的具有相互作用的药物联用,如果联用,应该调整剂量、加强患者用药教育,并监测可能导致的药物不良反应.

基于尿液代谢组学研究肝药酶抑制剂对何首乌致肝损伤的影响-以CYP3A4为例

目的探讨CYP3A4亚型的特异性抑制剂酮康唑对何首乌致肝损伤的影响。方法将21只大鼠随机分为3组,每组7只,即正常对照组,何首乌组以及何首乌+酮康唑组。连续给药28 d。4周后收集大鼠尿液采用UPLC-Q-TOF-MS进行代谢组学研究,同时辅以血清生化指标及组织病理分析。结果血清生化指标显示与正常组相比何首乌组总胆酸和直接胆红素均显著升高,而酮康唑组总胆酸显著降低。肝脏病理结果显示何首乌组较正常组肝脏有轻到中度病理性改变,而何首乌+酮康唑组较何首乌组有所缓解。LC-MS代谢组学技术筛选到13个与何首乌致肝毒性相关的潜在生物标志物以及抑制CYP3A4后显著回调的4种生物标志物;代谢通路分析得到与何首乌肝毒性显著相关的代谢通路分别为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢和甘油磷脂代谢,而抑制CYP3A4后影响到的通路为甘油磷脂代谢通路。结论 CYP3A4被抑制后甘油磷脂代谢的回调可能是何首乌肝毒性缓解的原因。

不同剂量炔雌醚对小鼠器官鲜重、繁殖生理和肝肠CYP3A4酶含量的影响

为探究不同剂量炔雌醚对小鼠器官、激素和肝肠药解酶的影响,分别以0.008 mg/kg、0.04 mg/kg、0.2 mg/kg、1.0 mg/kg和5.0 mg/kg的炔雌醚油溶液连续3 d灌胃小鼠,首次给药7 d后解剖取材,检测其器官鲜重、雄鼠精子数量、血清中激素浓度、小肠和肝脏中CYP3A4酶含量的变化。结果发现:雌鼠肝脏鲜重随剂量增加而增大,5.0 mg/kg组比对照组增大89.7%;雌鼠小肠、肾脏和脾脏出现不同程度变化,但无明显剂量效应;0.2 mg/kg以上剂量炔雌醚导致雌鼠子宫不同程度的水肿;炔雌醚对雌鼠血清中雌二醇和促黄体素浓度无显著影响,仅1.0 mg/kg组雌鼠血清中卵泡生成素浓度较对照组显著升高;1.0 mg/kg和5.0 mg/kg组雌鼠肝脏中CYP3A4酶总含量较对照组分别显著增加59.1%和102.9%。不同剂量炔雌醚对雄鼠肝脏和脾脏鲜重影响显著,5.0 mg/kg剂量组肝脏和脾脏鲜重较对照组分别增大23.3%和130%,但小肠和肾脏无明显剂量效应;不同剂量炔雌醚对雄鼠睾丸鲜重无显著影响,附睾仅有5.0 mg/kg组较对照组显著减小;1.0 mg/kg和5.0 mg/kg组的精子密度和精子总数分别较对照组降低43.9%和70.5%;高剂量炔雌醚使血清中促黄体素和睾酮浓度均显著降低;5.0 mg/kg组雄鼠肝脏CYP3A4酶单位组织含量和总含量较对照组分别升高7.1%和30%。总之,炔雌醚对雌雄小鼠的繁殖均有抑制作用,但最低有效剂量不同,雌性有效剂量更低,而雌性肝脏及CYP3A4酶对炔雌醚的反应显著强于雄性,提示雌鼠肝脏对炔雌醚的代谢更快。

大黄苷元对大鼠药物代谢酶CYP2A6、CYP3A4活性的影响

研究大黄苷元对大鼠体内药物代谢酶CYP2A6、CYP3A4活性的影响,以预测大黄与临床常用药物的相互作用.大鼠分组,分别灌胃不同质量浓度大黄苷元、质量分数0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、苯巴比妥钠(PB)、地塞米松(DEX)、β-奈黄酮(β-NF)和酮康唑(KET),取各给药组给药后24 h的肝微粒体(RLM)与CYP2A6、CYP3A4的探针底物香豆素、睾酮进行体外温孵,通过高效液相色谱法分别测定各底物的代谢产物7-羟基香豆素、6β-羟基睾酮的生成量,考察大黄苷元对CYP2A6、CYP3A4活性的影响.大黄苷元高、中、低剂量给药组代谢产物7-羟基香豆素的生成量高于空白给药组和KET给药组,均有统计学意义(P<0.05)、(P<0.01),大黄苷元高剂量给药组代谢产物6β-羟基睾酮的生成量高于空白给药组和KET给药组,均有统计学意义(P<0.05)、(P<0.01).随着大黄苷元给药剂量的增加,7-羟基香豆素、6β-羟基睾酮的生成量均随之增加.大黄苷元对CYP2A6、CYP3A4均有诱导作用,并且随着大黄苷元剂量的增加,其对CYP2A6、CYP3A4诱导作用均增强.

附子配伍干姜对CYP1A2和CYP3A4酶活性影响

目的:探索附子配伍干姜对附子主要成分乌头类生物碱的代谢酶亚型CYP1A2和CYP3A4酶活性的影响。方法:通过采用"Cocktail"探针药物法,利用特异性探针底物咖啡因和咪达唑仑,建立同时测定两种探针药物血药浓度的高效液相色谱方法,并计算其药动学参数,评价两种代谢酶活性。结果:干姜组与对照组比较,咖啡因的主要药动学参数t1/2β、AUC、CL和K10均没有显著性差异(P>0.05),表明干姜组对CYP1A2酶活性无影响;咪达唑仑的主要药动学参数t1/2β和AUC增大,CL和K10降低,且都具有显著性差异(P<0.05),表明干姜组能够抑制CYP3A4酶活性。附子干姜组与对照组比较,咖啡因和咪达唑仑的主要药动学参数t1/2β、AUC、CL和K10均无统计学差异(P>0.05)。结论:干姜组对CYP3A4酶具有抑制作用,能够减慢附子中主要药效成分乌头类生物碱在体内的代谢,因此,从代谢酶的角度可以阐明姜附配伍,能够增强附子的药效。

草鱼肾细胞中细胞色素P450 3A基因诱导表达及其酶活性分析

采用基因克隆技术获取草鱼(Ctenopharyngodon idellus)细胞色素P450 3A(CYP3A)cDNA序列长1 849 bp,包含完整开放阅读框(open reading frame,ORF)1 542 bp,1个终止密码和含polyA信号3′UTR;ORF编码514个氨基酸,含信号肽(29 aa),2个跨膜螺旋区(23 aa,23 aa),血红素结合域(21 aa)和6个底物识别位点(SRS1-6);与其他脊椎动物CYP3A氨基酸序列相似度达60%～92%。用实时定量PCR和分光光度计法分别研究了草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idellus kidney cell line CIK)中利福平(rifampicin,RIF)诱导CYP3A基因表达和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性,采用红霉素脱甲基酶活性法测定CYP3A的活性。结果显示,诱导组CIK细胞中CYP3A mRNA表达量在8 h最高,而CYP3A酶活在10 h最高;CYP3A mRNA和酶活性与对照组均具显著差异性(P<0.05)。CYP3A转录水平先于相应酶活变化表达,且转录水平表达显著高于酶活性,这很可能反映了RIF对CYP3A的诱导主要作用于转录水平而不直接作用于酶活,本研究旨为药物对CYP3A转录调控和活性调节提供科学依据,并为渔药代谢酶的研究提供理论依据。

双荧光素酶报告基因系统检测CYP3A4* 1G增强CYP3A4表达的调控作用

目的:探讨CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达的负调控作用。方法:设计合成包含CYP3A4*1G G或A等位基因的一系列基因片段(外显子10与内含子10交界处287和181 bp),构建CYP3A4*1G正向位于CYP3A4启动子上游的荧光素酶报告基因载体,与内参质粒pRL-TK共转染Hep G2细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果:与CYP3A4启动子相比较,G与A等位基因在287 bp DNA片段中均降低了荧光素酶表达(F=795.575,P<0.001),且G与A等位基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CYP3A4启动子相比较,G与A等位基因在181 bp DNA片段中均降低了荧光素酶表达(F=23.218,P<0.001),而G与A等位基因对CYP3A4启动子活性的抑制程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在CYP3A4内含子10与外显子10交界处CYP3A4*1G存在与CYP3A4*1G变异无关的CYP3A4启动子的抑制元件,该抑制元件对CYP3A4*1G增强CYP3A4基因表达起负调控作用。

附子人参配伍对CYP1A2和CYP3A4酶活性的影响

目的:通过建立"Cocktail"探针药物法及体外肝微粒体孵育体系,测定大鼠肝微粒体中CYP1A2和CYP3A4酶的活性,探索附子配伍人参对附子主要成分乌头类生物碱的代谢酶CYP1A2和CYP3A4酶活性的影响。方法:采用"Cocktail"探针药物法,利用CYP1A2和CYP3A4酶的特异性探针底物咖啡因和咪达唑仑,建立同时测定两种探针底物的体外肝微粒体孵育体系;采用RP-HPLC法测定两种探针底物在大鼠肝微粒体孵育体系中的浓度,计算CYP1A2和CYP3A4酶活性的变化。结果:与空白组比较,附子组、人参组、附子人参组对CYP1A2酶活性没有影响,附子组、附子人参组对CYP3A4酶活性没有影响,人参组对CYP3A4酶活性有抑制作用,进而减慢附子主要药效成分乌头类生物碱的代谢,因此,从代谢酶角度可以阐释,附子人参配伍能够增强附子的药效。

细胞色素氧化酶CYP3A4基因多态性研究进展

CYP3A4是人类肝脏及肠道中一种主要的细胞色素P450酶,约占成人肝脏P450酶总量的25%,体内许多药物、内源性化合物和环境污染物都由它代谢,大约有38个类别共150多种药物是它的底物,涉及抗癫痫药、抗精神病药。

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.

CYP3A4*1G基因型酶活性及多态性对椎管内分娩镇痛中舒芬太尼镇痛效果的影响

目的探究CYP3A4*1G基因型酶活性及多态性对椎管内分娩镇痛中舒芬太尼镇痛效果的影响。方法本研究选取30只10周龄雌性SD大鼠,根据CYP3A4*1G基因型不同分为GG基因型大鼠组、GA基因型大鼠组和AA基因型大鼠组,每组各10只。另选取2018年1—3月就诊于首都医科大学附属北京妇产医院且经产科医师评估可经阴道分娩的100例足月(≥37周)孕妇为研究对象,所有孕妇在最后1次产检时抽取外周静脉血2ml,检测其CYP3A4*1G基因型。根据CYP3A4*1G基因型不同将研究对象分为GG基因型孕妇组(57例)、GA基因型孕妇组(33例)和AA基因型孕妇组(10例)。比较分析不同基因型大鼠的CYP3A4*1G酶活性以及本研究中孕妇与东亚人群中的CYP3A4*1G基因型频率。比较分析各组孕妇不同时间点的舒芬太尼血药浓度,各组均采用随机数字表法抽取5例孕妇,采用高效液相色谱法检测蛛网膜下隙注入舒芬太尼后10min、15min和20min的血药浓度。比较分析各组孕妇于蛛网膜下隙注入舒芬太尼后0h、0.5h、1h和2h的视觉模拟评分法(visual analog score,VAS)评分。记录各组孕妇蛛网膜下隙注入舒芬太尼后1h内的不良反应发生情况。结果与GG基因型大鼠组比较,GA基因型大鼠组和AA基因型大鼠组的CYP3A4*1G酶活性均显著降低(P<0.05)。本研究中的等位基因频率和基因型频率与1000Genomes数据库和gnomAD数据库中的东亚人群比较差异均无显著性(P>0.05)。蛛网膜下隙注入舒芬太尼后10min,三组患者的舒芬太尼血药浓度比较差异均无显著性(P>0.05);蛛网膜下隙注入舒芬太尼后15min和20min,与GG基因型孕妇组比较,GA基因型孕妇组和AA基因型孕妇组的舒芬太尼血药浓度均显著升高(P<0.05)。由于AA基因型孕妇组的例数较少,达不到统计检验效能的要求,因此将AA基因型孕妇组(10例)和GA基因型孕妇组(33例)合并为突变组(43例)进行后续分析。在蛛网膜下隙注入舒芬太尼后的0.5h、1h和2h,突变组的VAS评分均显著低于GG基因型孕妇组(P<0.05)。蛛网膜下隙注入舒芬太尼后1h内,突变组恶心、呕吐、瘙痒和胎心监护异常的不良反应发生率显著高于GG基因型孕妇组(P<0.05)。结论CYP3A4*1G的GA亚型、AA亚型的酶活性显著低于GG亚型,且CYP3A4*1G的突变型均可增加椎管内分娩镇痛中舒芬太尼的血药浓度,从而加强舒芬太尼的镇痛效果,但同时不良反应发生率更高。

去乙酰酶抑制剂N-(2-氨苯基)-4-[N-(吡啶-3-甲氧羰基)氨甲基]苯甲酰胺的合成

以3 羟甲基吡啶为起始原料,采用碳酰二咪唑(CDI)法在0～10℃下搅拌反应,合成中间体4 [N (吡啶 3 甲氧羰基)氨甲基]苯甲酸(Ⅰ),收率为83 9%;然后与氯甲酸乙酯及三乙胺在0～10℃下搅拌反应,制得酸酐活性中间体(Ⅱ);它不经分离直接与邻苯二胺在室温条件下反应10h即得目标产物:N (2 氨苯基) 4 [N (吡啶 3 甲氧羰基)氨甲基]苯甲酰胺,经硅胶柱层析提纯后,收率为45 0%,总收率为37 8%,合成具有一定绿色化学特性;经质谱、核磁和红外等谱学方法鉴定了目标分子结构。

4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物抑制HIV整合酶链转移活性的主要微观结构因素探究

以25个4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物为研究对象,利用遗传函数逼近法(GFA)构建了10个二维定量构效关系(2D-QSAR)模型,从中选取最优模型并检验其预测可靠性,并分析4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物抑制HIV整合酶链转移活性的主要微观结构因素。结果表明,最优2D-QSAR模型的R^(2)=0.7776、Q^(2)=0.6421、r^(2)=0.87、(r^(2)-r′02)/r^(2)=0.01、k′=0.97、r^(2)_(m)=0.58,具有较高的稳定性和外部预测能力;热力学描述符AlogP、电拓扑状态描述符ES_Sum_sssN、ES_Sum_ssCH 2和空间描述符Shadow_nu是影响4-氨基-1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类化合物抑制HIV整合酶链转移活性的主要微观结构因素,其中Shadow_nu是最重要的微观结构因素。

MSCT特征及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4与甲状腺癌TNM分级的相关性

目的研究多层螺旋CT(MSCT)特征及血清谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、成纤维生长因子受体4(FGFR-4)与甲状腺癌TNM分级的相关性。方法回顾性选择2018年1月至2020年12月于马鞍山十七冶医院诊治的甲状腺癌患者46例纳入实验组,其中Ⅰ+Ⅱ期27例,Ⅲ+Ⅳ期19例,同期于本院就诊的良性甲状腺良性结节患者46例纳入对照组。两组均行MSCT及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4诊断。观察两组MSCT特征,血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平。观察实验组不同TNM分级患者MSCT特征,血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平。分析甲状腺癌患者MSCT特征及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平与不同TNM分级的相关性。结果实验组病灶形态不规则比例、边缘不清晰比例、实性及囊实性比例、不均匀强化比例、砂砾样钙化比例及病灶数目多发比例分别为73.91%、82.61%、39.13%、76.09%、56.52%、84.78%,均大于对照组(8.70%、15.22%、4.35%、36.96%、6.52%、17.39%),差异均有统计学意义(P<0.05);两组病灶直径≥5 mm比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组血清GPX3、FGFR-4水平分别为(226.96±26.17)μg/L、(31.28±3.45)ng/mL,均高于对照组[(82.85±8.53)μg/L、(22.64±2.55)ng/mL],TIMP-2水平为0.43±0.06,低于对照组(0.75±0.08),差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ+Ⅱ期患者病灶形态不规则比例、边缘不清晰比例、实性及囊实性比例、不均匀强化比例、砂砾样钙化比例及病灶数目多发比例均大于Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期患者病灶直径≥5 mm比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ+Ⅳ期患者血清GPX3、FGFR-4水平均高于Ⅰ+Ⅱ期患者,TIMP-2水平低于Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,病灶形态不规则、边缘不清晰、实性及囊实性、不均匀强化、砂砾样钙化、病灶数目及血清GPX3、FGFR-4水平与甲状腺癌患者TNM分级均呈正相关(P<0.05),血清TIMP-2水平与甲状腺癌患者TNM分级呈负相关(P<0.05);病灶直径≥5 mm与甲状腺癌患者TNM分级不相关(P>0.05)。结论甲状腺癌存在多种典型的MSCT特征及血清GPX3、TIMP-2、FGFR-4水平异常改变,且甲状腺癌病灶多种MSCT特征及血清GPX3、FGFR-4、TIMP-2水平与TNM分级显著相关。

人参皂苷F1通过激活孕烷X受体诱导CYP3A4的表达

目的探索人参皂苷F1(ginsenoside F1)是否通过激活孕烷X受体(PXR)实现对CYP3A4基因表达及酶活性的诱导作用。方法利用本实验室构建的PXR-CYP3A4稳定转染Hep G2工程细胞株结合荧光素酶报告基因技术,检测人参皂苷F1对PXR的转录激活效应;用不同浓度的人参皂苷F1处理LS174T细胞,并通过Q-PCR和酶活性试剂盒检测CYP3A4的mRNA表达和酶活性变化。结果不同浓度人参皂苷F1作用于LS174T细胞以后,可以浓度依赖性地诱导CYP3A4 mRNA水平的表达,并且增强其酶活性;同时,PXR-CYP3A4稳定转染Hep G2工程细胞株结合荧光素酶报告基因检测结果亦表明,人参皂苷F1能够浓度依赖性地增强PXR的转录激活效应。结论本研究揭示了人参皂苷F1可诱导CYP3A4的基因表达并增强其酶活性,这一过程可能与人参皂苷F1对孕烷X受体的激活有关。

基于荧光探针技术检测30种农兽药及其二元、三元组合对CYP3A4酶的联合毒性

在农业生产中混合使用多种农药或兽药越来越普遍,但因药剂联合毒性效应的不确定性而对人体健康产生严重威胁。本文基于酶抑制法原理,利用荧光探针NEN(N-乙基-1,8-萘二甲酰亚胺)直接检测CYP3A4酶的活性,建立了广谱筛查混合农兽药联合毒性效应的方法,并以常用的30种农兽药及其典型的23种二元和26种三元组合为研究对象,检测了农兽药混合物对CYP3A4酶的联合毒性效应,其中标准质量浓度根据食品安全国家标准规定的农兽药最大残留限量确定。结果表明:3种质量浓度梯度下对CYP3A4酶均具有协同作用的混合农兽药组合有克百威+多菌灵、克百威+吡虫啉、啶虫脒+烯酰吗啉、吡虫啉+多菌灵、氯氰菊酯+啶虫脒+烯酰吗啉、克百威+啶虫脒+多菌灵、吡虫啉+啶虫脒+多菌灵、吡虫啉+啶虫脒+烯酰吗啉、毒死蜱+啶虫脒+多菌灵和联苯菊酯+啶虫脒+多菌灵。当单一农兽药对CYP3A4酶活性的抑制率较高时,与其他农兽药混合后联合毒性效应呈拮抗作用,而当单一农兽药对酶活性的抑制率低于2%时,则与其他农兽药混合后联合毒性效应呈现不确定性。农兽药组合在低浓度下对CYP3A4酶的联合毒性往往存在较强的协同作用,但随着浓度的升高,联合毒性效应从协同变为拮抗作用。分析农兽药与CYP3A4酶之间的构效关系可知,含有芳氯基团的数量与对酶活性的抑制程度成正相关,含有3个芳氯及以上基团的农兽药对CYP3A4酶活性的抑制作用最为显著,抑制率在30%以上,如百菌清、毒死蜱、甲基毒死蜱、咪鲜胺等;含有2个芳氯或“强吸电子基团+1个芳氯”基团的农兽药,对CYP3A4酶活性的抑制作用较强,抑制率在18%以上,如苯醚甲环唑、哒螨灵和异菌脲等。具有氨基甲酸酯基团的农兽药单独作用于CYP3A4酶毒性较小或几乎没有毒性时,与其他农兽药混合后显示较强的协同作用。本研究建立的检测方法为广谱筛查混合农兽药联合毒性提供了新思路,检测结果可为进一步在细胞和动物水平制订农兽药混剂的风险评估方案提供依据。