非瓣膜性房颤华法林用量与CYP4502C9基因多态性的相关性

目的:深入研究CYP4502C9基因多态性与中原地区非瓣膜性房颤患者应用华法林抗凝达标时的维持量及出血等并发症的相关性。方法:选取2012年9月至2013年6月于郑州大学人民医院心血管内科采用华法林抗凝达标的66例非瓣膜性房颤患者作为研究对象,根据CYP4502C9基因多态性分为突变组和非突变组。记录一般情况、华法林维持量及INR值,随访服药期间发生的临床事件。结果:该样本CYP4502C9*3与CYP4502C9*2基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05),具有群众代表性;CYP4502C9*3基因非突变组华法林稳定达标时的平均维持量高于突变组[(2.656±0.185)mg/d VS(1.948±0.354)mg/d](P<0.05);突变组华法林用药初始阶段出血事件发生率高于非突变组(P<0.05)。结论:基因水平指导下的个体化给药方案可以提高华法林在非瓣膜性房颤患者用药中的安全性、有效性。

细胞色素P450 2C9*8与CYP2C9*27慢病毒表达载体的构建及在HEK239T细胞中的稳定表达

目的构建人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)及突变体CYP2C9*8与CYP2C9*27的慢病毒表达质粒,并于HEK293T细胞中稳定表达。方法反转录人肝总RNA获得c DNA,PCR扩增获得CYP2C9编码序列,并克隆至载体MigR1上,获得慢病毒表达重组质粒MigR1-CYP2C9。以该质粒为模板,重叠PCR方法分别引入449G>A与449G>T点突变,并分别克隆至MigR1,获得MigR1-CYP2C9*8与MigR1-CYP2C9*27慢病毒表达质粒。在HEK 293T细胞中进行病毒包装,并采用获得的慢病毒感染HEK293细胞,经流式分选和单克隆挑取获得稳定表达CYP2C9、CYP2C9*8与CYP2C9*27的细胞,命名为293T-2C9、293T-2C9*8与293T-2C9*27。实时定量PCR(qRT-PCR)与Western blot检测胞内CYP2C9表达。采用CYP2C9的特异性底物双氯芬酸对CYP2C9的活性进行评价。结果成功构建MigR1-CYP2C9、MigR1-CYP2C9*8与MigR1-CYP2C9*27表达载体。采用构建病毒感染获得的单克隆细胞293T-2C9、293T-2C9*8与293T-2C9*27在30代后荧光显微镜下观察可见绿色荧光表达率在100%,qRT-PCR与Western blot均表明有目标分子表达。提取自这三株细胞的微粒体均可催化双氯芬酸代谢为4-羟基双氯芬酸。结论成功构建稳定表达CYP2C9、CYP2C9*8与CYP2C9*27人源化细胞模型,该方法构建的细胞可用于CYP2C9*8与*27两个突变体的功能研究。

中国汉族患者CYP2C9基因多态性和年龄对华法林剂量的影响

目的:研究中国汉族患者细胞色素P450(CYP)2C9基因多态性和年龄对华法林剂量的影响,以利于其剂量的调整。方法:2008年4月至2009年3月在首都医科大学附属北京友谊医院服用华法林达稳定状态的住院患者161例纳入研究。患者被分为2组:老年组和成年组。老年组男55例,女45例,平均年龄(72±6)岁;成年组男34例,女27例,平均年龄(49±8)岁。记录患者所服用的华法林剂量、国际标准化比值(INR)、发生抗凝过量和出血的病例、抗凝治疗达稳定剂量-效应关系的时间;应用ABI3700DNA测序仪检测2组患者CYP2C9基因型,比较不同基因型和不同年龄患者华法林的维持剂量、治疗初始阶段抗凝过量发生率、出血发生率以及达稳定剂量-效应关系的时间。结果:2组患者CYP2C9AA基因型和AC基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。AC型患者华法林维持剂量明显低于AA型患者[(2.40±0.96)mg比(2.73±0.65)mg,P<0.01];在AA和AC型患者中,老年组患者华法林维持剂量均明显低于成年组患者[(2.47±0.48)mg比(3.24±0.85)mg,(2.08±0.71)mg比(2.72±1.04)mg,均P<0.01]。华法林治疗初始阶段,AC型患者抗凝过量发生率明显高于AA型患者(35.0%比5.7%,P<0.01);在AA型患者中,老年组患者抗凝过量发生率明显高于成年组(9.3%比0,P<0.05)。AC型患者出血发生率明显高于AA型患者(30.0%比5.0%,P<0.05);在AA型患者中,老年组患者出血发生率明显高于成年组(8.1%比0,P<0.05)。AC型患者应用华法林达稳定剂量-效应关系的时间明显长于AA型患者[(21.4±3.2)d比(10.0±3.5)d,P<0.01],相同基因型老年组与成年组患者达稳定剂量-效应关系的时间比较差异无统计学意义。结论:中国汉族患者CYP2C9基因型和年龄均可影响华法林的治疗剂量,CYP2C9基因多态性的检测结果可作为指导华法林剂量的依据。

华法林维持剂量与不同民族VKORC1和CYP2C9基因多态相关性研究

华法林是临床常用药,但是其维持剂量个体之间和民族之间差异比较大。特别是在治疗初期,使用华法林行抗凝治疗的并发症较多。文中简要综述了细胞色素P4502C9基因多态性、维生素K环氧化物还原酶亚单位1(VKORC1)基因多态性对华法林维持剂量的影响,以及它们在不同民族的分布情况。初步提出民族因素是导致华法林维持剂量出现差异的决定因素。