SARS冠状病毒N蛋白和CYP4F3的相互作用

目的:研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法:应用免疫共沉淀、GST-pulldown、BIACORE实验验证SARS-CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果:SARS-CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用,BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS-CoVN蛋白的亲和常数为KD=4.3×10-11。结论:SARS-CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物,这为进一步探讨SARS-CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。

中国汉族人群CYP4F3基因多态性的研究

目的:研究CYP4F3基因单核苷酸多态性(SNP)在中国汉族人群中的分布,为进一步研究该基因群体遗传学特征及与疾病易感性的相关性提供更为详实的数据。方法:对CYP4F3基因进行重测序,构建连锁不平衡模式,选择标签SNP在192例北京和424例广州汉族个体中进行基因分型。结果:CYP4F3基因重测序共检出30个SNP,连锁不平衡分析显示广州和北京地区人群的连锁不平衡模式不同,但选择的8个标签SNP的等位基因和基因型频率分布在2个人群中的差异无统计学意义。结论:中国北京地区汉族与广州地区汉族人群CYP4F3基因多态性无显著差异,但不同种族间存在差异。

细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)的纯化及动力学研究

目的:纯化细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)以及测定酶促反应动力学参数。方法:应用免疫共沉淀技术纯化CYP4F3A酶,通过LTB4降解实验测定其米氏常数。结果:纯化的CYP4F3A浓度为0.12 mg/ml,Km=2.643±0.106μmol/L,Vmax=24.97±1.163 nmol/(min.nmol)。结论:获得从哺乳动物细胞中纯化的CYP4F3A具有较强LTB4降解活性,并通过测定其酶动力学常数,为研究CYP4F3A活性调节机制打下基础。

麦冬皂苷D对心肌细胞脂肪酸代谢酶的影响

该研究探讨麦冬皂苷D对人源心肌细胞AC-16中主要脂肪酸代谢酶的影响,为麦冬的心血管保护机制和临床安全应用提供参考依据。利用CCK-8试剂(cell counting kit-8细胞计数试剂)检测不同浓度的麦冬皂苷D对心肌细胞的活力影响,同时在显微镜下观察不同浓度麦冬皂苷D对心肌细胞形态和数量的影响,并应用RT-PCR技术检测麦冬皂苷D对心肌细胞中脂肪酸代谢酶CYP2J2、CYP4F3、CYP4A11、CYP4A22、CYP4F2 mRNA表达的影响,Western blot法检测不同浓度麦冬皂苷D孵育下CYP4F3蛋白的表达水平。细胞活力检测结果表明,与对照组相比,低浓度的麦冬皂苷D对心肌细胞存活率没有影响,高于20μmol·L^(-1)的麦冬皂苷D能促进存活率。显微镜下观察到低于100μmol·L^(-1)的麦冬皂苷D对心肌细胞形态和数量均未产生明显影响。RT-PCR结果表明,与对照组相比,5μmol·L^(-1)的麦冬皂苷D能引起CYP2J2和CYP4F3 mRNA的轻度上调,高浓度麦冬皂苷D(10、20μmol·L^(-1))能显著诱导CYP2J2和CYP4F3 mRNA表达(P<0.05),呈现剂量依赖性。同样浓度的麦冬皂苷D对CYP4A11、CYP4A22、CYP4F2 mRNA表达影响较小。Western blot结果表明,20μmol·L^(-1)的麦冬皂苷D能显著诱导CYP4F3的蛋白表达(P<0.05),且呈现剂量依赖性。综合上述结果,低于100μmol·L^(-1)的麦冬皂苷D不会影响AC-16心肌细胞的活力,麦冬皂苷D能够选择性诱导CYP2J2和CYP4F3的表达,调控脂肪酸信号分子的代谢途径,从而起到保护心血管系统的作用。