白念珠菌H310D突变型14α-去甲基化酶的克隆、表达及活性的初步研究

利用错配内部引物 ,采用重组PCR方法获得H31 0D突变型白念珠菌 1 4α 去甲基化酶(CYP5 1 ) ,构建H31 0D突变型CYP5 1蛋白的表达载体pYCYP5 1M ,转化进入酵母菌INVSC - 1中 ,半乳糖诱导蛋白的表达 ,微量液基稀释法测定表达野生型及突变型CYP5 1蛋白的宿主酵母菌对氟康唑的MIC。表达的CYP5 1蛋白占微粒体蛋白酶系的 1 5 % ;表达突变蛋白的酵母菌MIC值是表达野生蛋白的酵母菌MIC值的 2倍。CYP5 1蛋白H31 0D的突变导致表达突变蛋白的酵母菌对氟康唑MIC的升高 ,证明H31 0残基对CYP5 1蛋白与氟康唑的结合有一定作用 ,为研究新型抗真菌前导化合物寻找新的靶点。