鸭CYP7α1基因原核表达载体的构建及蛋白诱导表达

本研究旨在构建鸭重组表达载体pET32a-CYP7α1,获取其融合蛋白,为开展鸭CYP7α1蛋白在脂类代谢中作用的深入研究提供基础。试验以樱桃谷鸭为材料,通过克隆获得CYP7α1基因的ORF序列,并连接至原核表达载体pET32a中,构建了重组表达载体pET32a-CYP7α1,转入表达宿主Rossetta-gam(iDE3)进行诱导表达。结果表明CYP7α1基因ORF区共编码512个氨基酸,SDS-PAGE电泳分析表明,重组蛋白大小约为59 ku,其主要以包涵体的形式存在,其最佳诱导条件为温度37℃,时间4 h,IPTG浓度0.6 mmol/L。