非受体酪氨酸激酶抑制剂CYT387对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡影响及作用机制

目的探讨非受体酪氨酸激酶(JAK)抑制剂CYT387对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡的作用及其相关信号通路的关系。方法选取4株MM细胞株(RPMI-8226、LP-1、U266、XG-7)及北京积水潭医院自2012年3月至2015年3月收治的26例MM患者为研究对象。对26例MM患者的骨髓及肿瘤组织进行免疫组化磷酸化JAK2(p-JAK2)表达检测。采用蛋白免疫印迹法检测4株MM细胞株中JAK2的磷酸化水平。采用蛋白免疫印迹法对XG-7细胞株用不同浓度CYT387处理后的磷酸化信号转导及磷酸化STAT3(p-STAT3)进行检测。采用不同浓度CYT387处理4株MM细胞株和JAK2不同磷酸化水平的MM原代肿瘤细胞后,进行细胞活力检测。蛋白免疫印迹法检测相同浓度CYT387处理后LP-1细胞株在不同时间点B细胞淋巴瘤/白血病2(BCL2)、B细胞淋巴瘤-特大型(BCL-xL)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达状况。结果26例MM肿瘤组织中,13例(50%)呈p-JAK2阳性表达。4株细胞株全部p-JAK2阳性表达。随着CYT387浓度增加,XG-7和LP-1细胞株的p-STAT3的表达显著降低(P<0.05)。外源白细胞介素6(IL-6)的刺激可整体提高p-STAT3的表达,但并不能改变CTY387呈浓度依赖性显著降低p-STAT3表达的趋势(P<0.05)。4株MM细胞株和3例MM原代肿瘤细胞,随着CYT387浓度增加细胞活力均显著降低(P<0.05),p-JAK2阳性的原代MM细胞更为显著(P<0.05)。用相同浓度的CYT387处理LP-1细胞株后,检测caspase-3表达处于高水平,而BCL-xL、BCL2、PARP表达水平逐渐下降,具有时间依赖性(P<0.05)。结论CYT387可通过阻断MM细胞内IL-6/JAK/STAT信号通路抑制肿瘤增殖,同时可以引发凋亡相关蛋白活化诱导MM细胞凋亡。

JAK1/JAK2抑制剂外用对特应性皮炎小鼠模型的影响

目的观察JAK1/JAK2抑制剂外用对特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠模型的影响并探讨其作用机制。方法将18只BALB/C小鼠随机分为正常组、模型组、治疗组。模型组及治疗组应用2,4-二硝基氯苯诱导AD模型后,皮损处分别涂抹不含JAK1/JAK2抑制剂的空白软膏、JAK1/JAK2抑制剂软膏,连续涂抹14天。正常组仅脱毛,不给予任何治疗。实验第28天肉眼观察各组小鼠背部皮损处表现;HE染色观察皮损组织病理形态;ELISA法检测血清IgE水平;RT-qPCR法检测皮损组织IL-4、IL-5、IFN-γ mRNA表达。结果治疗组背部皮损处表现及组织病理形态较模型组明显改善,血清IgE含量明显减低,皮损组织IL-4、IL-5、IFN-γ mRNA相对表达量明显减少。结论 JAK1/JAK2抑制剂外用对AD小鼠模型具有较好的治疗作用,其机制之一可能与抑制皮损组织IL-4、IL-5、IFN-γ mRNA表达相关。