CaMKⅡ-p38通路在异丙酚诱导神经干细胞凋亡中的作用

目的分析不同浓度异丙酚对神经干细胞凋亡的影响及Ca MKⅡ-p38通路在其中的作用。方法取孕14 d大鼠分离胚胎神经干细胞,分为异丙酚低、中、高浓度组(A1,A2,A3组),对照组(B组)及溶剂组(C组),A1,A2,A3组分别给予质量浓度2.5,5.0及10.0μg/m L异丙酚处理,B组不作处理,C组给予脂肪乳替代异丙酚,分析各组细胞增殖及凋亡情况,Western Blot法分析Ca MKⅡ及p38的表达情况。结果 A组处理12 h后细胞增殖率无显著性差异(P>0.05),处理48,72 h后呈现出浓度和时间依赖性;与B组相比,C组细胞凋亡率与死亡率无显著性差异(P>0.05),A1,A2,A3组凋亡率和死亡率显著升高(P<0.05),且呈现剂量依赖性;随着异丙酚处理浓度的提高,P-p38及P-Ca MKⅡ的表达量显著升高(P<0.05)。结论不同浓度异丙酚处理会抑制神经干细胞增殖促进凋亡,Ca MKⅡ-p38通路有重要作用,为临床麻醉用药的合理性和安全性提供试验基础。

左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中CAMKⅡ及NCX3表达的影响

目的:通过建立氯化锂-匹罗卡品点燃的癫痫大鼠模型,应用左乙拉西坦(LEV)灌胃进行抗癫痫治疗,通过免疫组化方法观察海马区钙调素依赖蛋白激酶(Ca MKⅡ)Ⅱ及钠钙交换体(NCX3)蛋白的表达变化,同时通过水迷宫测试观察长期应用对认知功能的影响。方法:3周龄健康Wistar大鼠120只分为生理盐水组、癫痫模型组、正常给药组及治疗组,应用氯化锂-匹罗卡品造模成功后7d、14d及28d断头取脑组织,应用免疫组化方法观察大鼠海马组织中CAMKⅡ及NCX3的表达变化,并且在第四周应用水迷宫评价每组大鼠的空间学习记忆的能力。结果:反复惊厥可导致大鼠海马神经细胞损伤,Ca MKⅡ及NCX表达下降,与对照组相比,左乙拉西坦(LEV)可以改善细胞内钙超载,提高Ca MKⅡ及NCX3蛋白的表达。同时第4周结果显示长期应用LEV不会出现Ca MKⅡ的过量表达。结论:LEV能很好的控制癫痫发作,可能与其能提高Ca MKⅡ及NCX3蛋白的表达有关,同时能通过控制癫痫的发作进而改善其反复发作后所造成的学习记忆能力下降。

补阳还五汤对间歇低氧大鼠心肌miR-214/CaMKⅡ信号通路的影响

目的:探讨补阳还五汤对慢性间歇低氧大鼠心肌损伤的保护作用及分子机制。方法:采用间歇低氧大鼠心肌为研究对象,实验随机分为常氧组、间歇低氧组、补阳还五汤组,每组8只。利用超声心动仪评估大鼠左心室结构与功能,HE染色法观察大鼠心肌病理学变化,TUNEL法及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒法检测组织氧化应激水平及凋亡效应;qPCR 检测心肌组织中miR-214、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)变化,Western blot检测CaMKⅡ蛋白表达变化。结果:与间歇低氧组对比,补阳还五汤组左室舒张末期内径(LVIDd )、左室收缩末期内径(LVIDs )减少(P <0.05),射血分数(EF)和心肌缩短分数(FS)增加(P<0.05),补阳还五汤能够明显减少氧化损伤,MDA 表达水平及 Tunel 阳性细胞数明显降低,而 SOD 表达升高(P<0.05)。此外,补阳还五汤组上调miR-214表达,显著抑制CaMKⅡ表达(P<0.05)。结论:补阳还五汤可通过调控miR-214 /CaMKⅡ信号通路改善间歇低氧大鼠心肌组织损伤引起的氧化应激反应。

黄芪甲苷通过CaMKⅡ信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:从钙调素蛋白依赖激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)信号通路的角度探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其可能机制。方法:原代培养新生乳鼠心肌细胞,10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察KN93(Ca MKⅡ抑制剂)、黄芪甲苷3,10,30 mol/L剂量组对肥大细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞骨架;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房利钠肽(ANP)mRNA表达;Wertern blot检测心肌细胞Ca MKⅡ表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组细胞体积、总蛋白含量、ANPmRNA和Ca MKⅡ表达分别增加98.14%、52.63%、87.37%和55.22%。黄芪甲苷可有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,黄芪甲苷30 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.67%、总蛋白含量降低33.87%、ANPmRNA表达降低40.00%,Ca MKⅡ的表达降低31.73%。结论:黄芪甲苷可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca MKⅡ信号通路有关。

心痛方对急性心肌梗死大鼠CaMKⅡ mRNA表达及钙离子浓度的影响

目的:探究心痛方对心肌梗死大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)mRNA表达及钙离子(Ca2+)浓度的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、心痛方高剂量组、心痛方低剂量组、硫氮卓酮组,采用结扎冠状动脉的方法建立急性心肌梗死大鼠模型,运用RT-PCR法测定各组大鼠心肌组织Ca MKⅡmRNA的表达,激光扫描共聚显微镜法检测心肌组织内Ca2+浓度,HE染色法测定心肌梗死面积。结果:与模型组比较,心痛方高、低剂量组与硫氮卓酮组Ca MKⅡmRNA表达及Ca2+浓度均降低、心肌梗死面积缩小(P<0.01或P<0.05);与心痛方低剂量组比较,心痛方高剂量组、硫氮卓酮组Ca MKⅡmRNA表达、Ca2+浓度均降低(P<0.01),心痛方高剂量组心肌梗死面积缩小(P<0.05);与硫氮卓酮组比较,心痛方高剂量组Ca MKⅡmRNA表达、Ca2+浓度均降低(P<0.01),心痛方高、低剂量组心肌梗死面积均缩小(P<0.01或P<0.05)。结论:心痛方能下调急性心肌梗死大鼠Ca MKⅡmRNA的表达,降低胞内Ca2+浓度,从而拮抗钙超载对心肌细胞的损害,缩小心肌梗死面积。

白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的抑制作用

目的:探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素(ISO)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的作用及其可能机制。方法:异丙肾上腺素10μmol/L诱导心肌细胞肥大,实验分为:正常组、异丙肾上腺素组、白藜芦醇25μmol/L组、白藜芦醇50μmol/L组、N-[2-[N-(4-氯肉桂)-N-甲基氨基]苯基]-N-(2-羟乙基)-4-甲氧苯磺酰胺磷酸酯盐(KN93)0.2μmol/L组。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;鬼笔环肽染色测细胞大小;RT-PCR测细胞内ANP mRNA表达;Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化,电泳法测定钙调蛋白激酶(Ca MKⅡ)蛋白表达。结果:异丙肾上腺素使心肌细胞蛋白含量增加,细胞体积增大,ANP mRNA表达增加,[Ca2+]i瞬变增加,Ca MKⅡ蛋白表达增高。与异丙肾上腺素组相比,白藜芦醇50μmol/L和KN93 0.2μmol/L组蛋白含量降低,细胞体积减少,ANP mRNA表达降低,[Ca2+]i瞬变降低,Ca MKⅡ蛋白表达降低。结论:白藜芦醇可通过降低胞内[Ca2+]i瞬变和Ca MKⅡ表达抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大。