腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。

急性缺氧对大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用

目的:本实验采用膜片钳单通道技术研究缺氧条件下对培养新生大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用;方法:取1 ～3天的SD大鼠海马神经元组织,制成细胞悬液,加入含80 %DMEM(dulbecco' s modified eagle' s medium)、20 %小牛血清培养基进行培养,将培养3 ～5天的形态典型的神经元置于对称性高钾溶液中,用膜钳技术记录单通道电流,其通道电流通过膜片钳放大器(CEZ -2200)放大,滤波(3KHz)后,经A/D、D/A转换器输入计算机,采用pClamp6 .0 .6软件采样分析;结果:在细胞贴附式下,应用氰化钠(20μmol/L)造成细胞急性缺氧,在缺氧早期(5 ～20 min)通道开放概率增加(P<0 .01或P<0 .05 ,n=5) ,而缺氧后期(20 ～30 min) ,通道开放概率明显降低,表明缺氧时间对通道的开放概率有明显影响。结论:缺氧早期神经元钙激活钾通道有自身激活作用,当钙激活钾通道激活时,钾离子外流增加,产生膜的复极化,使去极化不易产生,从而稳定细胞膜及降低细胞的兴奋性,这可能是缺氧早期神经元自身的一种代偿机制。

吡拉西坦对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究吡拉西坦对原代培养海马神经元钙激活钾通道 (KCa通道 )的作用 ,以揭示吡拉西坦抗缺血性脑损伤的电生理机制。方法 应用膜片钳制技术记录原代培养的海马神经元的单通道电流活动 ,经 p- CL AMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果 吡拉西坦对 KCa通道具有明显的激活作用 ,增加通道开放概率 ,缩短通道关闭时间 (P<0 .0 1)。结论 吡拉西坦可能通过激活

镁对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究Mg2 +对海马神经元钙激活钾通道的作用 ,以揭示Mg2 +抗缺血性脑损伤的机制。方法 应用膜片钳制技术inside-out方式记录原代培养的海马神经元单通道电流活动 ,经p -CLAMP软件进行微机采样储存数据和数据分析处理。结果 Mg2 +在一定浓度范围内对海马神经元钙激活钾通道具有明显激活作用 ,增加通道开放概率 (Po) ,缩短通道关闭时间。结论 Mg2 +对海马神经元钙激活钾通道的激活作用可能为Mg2 +抗缺血性脑损伤的重要机制之一。