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诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ表达影响
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作者 薄琦 王鑫宇 +1 位作者 刘丹 张成 《创伤与急危重病医学》 2023年第5期308-312,共5页
目的探讨诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ(CaMKⅠ)表达的影响。方法选取成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(n=6)、常温复苏组(n=12)以及低温复苏组(n=12)。假手术组仅进行外科插管及相关... 目的探讨诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ(CaMKⅠ)表达的影响。方法选取成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(n=6)、常温复苏组(n=12)以及低温复苏组(n=12)。假手术组仅进行外科插管及相关手术操作,不建立失血性休克模型;常温复苏组及低温复苏组每只大鼠放血25 ml/kg,构建失血性休克模型,休克60 min后分别采取38℃和32℃复苏并维持60 min,复苏结束后将大鼠体温恢复至38℃并监测血流动力学3 h。大鼠复苏3 h后,3组均随机选取50%的大鼠处死,取小肠黏膜、肠系膜淋巴结及血液,剩余大鼠进行72 h生存分析。采用定量聚合酶链式反应(PCR)及蛋白质印迹法分别检测3组大鼠肠黏膜中CaMKⅠmRNA及蛋白表达情况,应用酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血清炎性因子表达情况,同时,进行细菌移位检测。结果复苏3 h后,低温复苏组大鼠的心率和平均动脉压(MAP)均低于常温复苏组,而心输出量、每搏量和射血分数均高于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。设定72 h为观察终点,假手术组大鼠于观察终点时全部存活,低温复苏组大鼠的生存时间为(63.50±9.59)h,明显长于常温复苏组的(46.83±19.59)h,差异有统计学意义(P<0.05)。在液体复苏3 h后,低温复苏组CaMKⅠmRNA表达水平、灰度值均明显低于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05);常温复苏组与低温复苏组CaMKⅠmRNA、蛋白表达水平均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组大鼠血清中CaMKⅠ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8水平明显低于常温复苏组和低温复苏组,IL-10水平高于常温复苏组,但低于低温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。低温复苏组大鼠血清中CaMKⅠ、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平明显低于常温复苏组,IL-10水平明显高于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。复苏3 h后,低温复苏组大鼠血液细菌移位量、肠系膜淋巴结细菌移位量均明显低于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在诱导性低温复苏条件下,失血性休克大鼠肠组织中CaMKⅠmRNA及蛋白水平表达降低,大鼠生存时间延长,CaMKⅠ下调可能是诱导性低温复苏减轻大鼠失血性休克肠缺血再灌注损伤的重要分子机制。 展开更多
关键词 失血性休克 诱导性低温 肠缺血再灌注损伤 Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
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水稻叶片Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶的纯化和活性测定
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作者 胡德文 何之常 +2 位作者 史红梅 张景昱 袁文静 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 2000年第6期751-755,共5页
通过高速离心、( NH4) 2 SO4沉淀、琼脂糖凝胶过滤和 Ca M- sepharose4B亲和层析 ,从 HPGMR( 5 8S)叶片中初步纯化出 Ca2 + / Ca M依赖性蛋白激酶 .纯化的 Ca2 + / Ca M依赖性蛋白激酶经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶线性梯度电泳 ,亚基分子量约... 通过高速离心、( NH4) 2 SO4沉淀、琼脂糖凝胶过滤和 Ca M- sepharose4B亲和层析 ,从 HPGMR( 5 8S)叶片中初步纯化出 Ca2 + / Ca M依赖性蛋白激酶 .纯化的 Ca2 + / Ca M依赖性蛋白激酶经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶线性梯度电泳 ,亚基分子量约为 5 5× 10 3.在 Ca2 + / Ca M依赖性蛋白激酶的标准反应体系中 ,存在过量的 ATP,提取磷酸化反应剩余的 ATP,用叶绿体 Mg2 + - ATP酶分解 ATP,最后用复合孔雀绿测定无机磷 ,从而来计算 Ca2 + / Ca M依赖性蛋白激酶的活性 .实验结果表明 ,该酶活性是依赖 Ca2 + 和 Ca M的 ,并且 EGTA和 展开更多
关键词 Ca^2+/cam依赖性蛋白激酶 Mg^2+-ATP酶 光敏核不育水稻农垦58S
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慢性染铅对小鼠海马Ca^(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响 被引量:4
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作者 文涛 孙黎光 +2 位作者 宗志宏 邢伟 刘素媛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期393-395,共3页
目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳... 目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。 展开更多
关键词 Ca^2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶 海马
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尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca^(2+)浓度及Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ_α表达的影响 被引量:4
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作者 王佩 王海祥 +3 位作者 刘瑞春 王维平 范月辉 胡华伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期226-228,共3页
目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋... 目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM+PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Mor-ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i变化,Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与PTZ组比较,NIM+PTZ组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]i下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM可以降低细胞内[Ca2+]i,提高CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力。 展开更多
关键词 尼莫地平 癫痫 空间学习记忆 Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα
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皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca^(2+)]_i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响 被引量:1
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作者 孙臣友 戚双双 +2 位作者 陈朝玉 刘能保 张敏海 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期270-274,共5页
目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT+MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标... 目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT+MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式[、Ca2+]i和CaMKⅡ表达的变化规律。结果:1 0-6和1 0-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2+]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少。MK-8 0 1和高浓度葡萄糖均能拮抗1 0-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用。结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2+]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因。 展开更多
关键词 皮质酮 海马 神经元 [CA^2+]I 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
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Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在PDGF诱导肝星状细胞胶原合成中的作用 被引量:2
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作者 安萍 刘亚玲 +2 位作者 全晓静 刘璐 罗和生 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2013年第1期10-12,共3页
目的观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对PDGF诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)colla-genα1(Ⅰ)合成的影响。方法 CaMKⅡαsiRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,real-time PCR法检测HSC collagenα1(Ⅰ)及TIMP-1 ... 目的观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对PDGF诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)colla-genα1(Ⅰ)合成的影响。方法 CaMKⅡαsiRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,real-time PCR法检测HSC collagenα1(Ⅰ)及TIMP-1 mRNA的表达,Western blot法检测collagenα1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1表达的变化,ELISA法检测HSC collagenα1(Ⅰ)分泌的变化。结果 CaMKⅡαsiRNA可显著抑制PDGF诱导下HSC collagenα1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1的转录、蛋白表达以及collagenα1(Ⅰ)的分泌,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CaMKⅡα信号参与了PDGF诱导下HSC collagenα1(Ⅰ)的产生与分泌,同时通过抑制MMP-2、促进TIMP-1的表达而阻止胶原的降解,是肝纤维化发展过程中PDGF信号的重要调控分子和肝纤维化的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 CA^2+ 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 肝星状细胞 血小板源性生长因子 胶原 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1
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石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca^(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响 被引量:26
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作者 吕佩源 尹昱 +2 位作者 王伟斌 梁翠萍 李文斌 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期73-76,共4页
目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗... 目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 。 展开更多
关键词 痴呆 血管性 小鼠 海马 钙调蛋白 Ca^2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶 显微镜检查 共焦 石杉碱甲 静息态[Ca^2+]i
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糖尿病大鼠脑细胞周期依赖性蛋白激酶5和蛋白激酶A参与调节Tau蛋白磷酸化 被引量:1
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作者 曲忠森 李亮 +3 位作者 钟士江 倪宏 赵永波 王群 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1308-1313,共6页
细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase5,Cdk-5)及蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)是调节Tau蛋白磷酸化的重要激酶,其对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠脑内Tau蛋白磷酸化的作用如何,目前尚不明确.为探讨胰岛素缺乏的DM大... 细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase5,Cdk-5)及蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)是调节Tau蛋白磷酸化的重要激酶,其对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠脑内Tau蛋白磷酸化的作用如何,目前尚不明确.为探讨胰岛素缺乏的DM大鼠海马Cdk-5及PKA对Tau蛋白磷酸化的作用,用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DM大鼠模型,Fura-2负载及荧光测定细胞内游离Ca2+浓度,免疫沉淀法测定Cdk-5活性,放射性配体结合实验检测PKA的活性,蛋白质印迹检测Tau蛋白磷酸化的水平.结果提示:在DM大鼠海马神经元,Ca2+浓度升高,Cdk-5及PKA活性升高,Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202和Ser396/Ser404位点的磷酸化增强.Cdk-5的特异性抑制剂roscovitine可降低DM大鼠Cdk-5活性,但不能降低PKA活性,使Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点磷酸化水平降低,但不降低Ser396/Ser404位点的磷酸化,roscovitine处理正常大鼠后,上述酶的活性及Tau蛋白的磷酸化无明显变化.首次从整体水平上证实DM大鼠海马Cdk-5及PKA活性升高,协同促进Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点和Ser396/Ser404位点的磷酸化,神经元内游离Ca2+浓度升高可能起重要作用. 展开更多
关键词 糖尿病 细胞周期依赖性蛋白激酶-5 蛋白激酶A TAU蛋白 CA^2+ roscovifine
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结直肠癌中钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ的表达及其意义
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作者 齐海燕 徐菲 徐荣臻 《浙江创伤外科》 2015年第5期853-856,共4页
目的分析钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ体内外的表达情况并探讨其机制,为临床诊断治疗提供新的靶点。方法采用半定量RT-PCR技术检测3种人结直肠癌细胞系、20对结直肠癌组织及其配对癌旁组织中CAMKⅡδmRNA的表达水平;利用Western B... 目的分析钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ体内外的表达情况并探讨其机制,为临床诊断治疗提供新的靶点。方法采用半定量RT-PCR技术检测3种人结直肠癌细胞系、20对结直肠癌组织及其配对癌旁组织中CAMKⅡδmRNA的表达水平;利用Western Blot技术及免疫组化SP技术检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中CAMKⅡδ蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理参数进行分析。结果CAMKⅡδmRNA水平在3种结直肠癌细胞系中均有较高的表达,其中SW620表达最高,依次为HT-29、RKO。20对结直肠癌组织,有16对癌组织中CAMKⅡδmRNNA表达高于癌旁组织,其值分别是0.48±0.31和0.25±0.16,两者之间有统计学差异(P=0.002)。1 Western Blot的检测结果与RT-PCR的检测结果相一致,同样可以观察到CAMKⅡδ在配对的癌组织中的表达强于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化提示CAMKⅡδ在结直肠癌组织中免疫反应强阳性,而癌旁正常组织中表达明显减弱。20例结直肠癌组织标本中,CAMKⅡδ的阳性表达率为55%(11/20),明显高于癌旁正常组织的表达率20%(4/20)。(P=0.022)结论 CAMKⅡδ在结直肠癌细胞系及结直肠癌组织中高表达,提示可能促进肿瘤细胞的不断增殖,与直肠癌的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ 钙/钙调素(Ca^2+/cam)NF-κB 结直肠癌
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血管性痴呆小鼠海马神经细胞静息态[Ca^(2+)]_i及CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA表达的变化 被引量:10
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作者 吕佩源 李文斌 +2 位作者 尹昱 王伟斌 粱翠萍 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期146-149,共4页
目的 :观察血管性痴呆小鼠海马神经细胞内静息态游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)和钙调素 (CaM)、CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达水平的变化 ,探讨上述因素在血管性痴呆发病中的作用。方法 :采用双侧颈总动脉线结、缺血 /再灌注的... 目的 :观察血管性痴呆小鼠海马神经细胞内静息态游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)和钙调素 (CaM)、CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达水平的变化 ,探讨上述因素在血管性痴呆发病中的作用。方法 :采用双侧颈总动脉线结、缺血 /再灌注的方法 ,制备小鼠血管性痴呆模型 ,并设假手术组作为对照。分别于术后第 2 9d、第 30d进行学习、记忆成绩测试 ,然后快速取海马制备海马活细胞 ,以Fluo 3/AM为荧光探针 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察两组海马神经细胞静息态 [Ca2 + ]i 变化 ,并应用RT PCR技术检测海马神经细胞内CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA的表达水平。结果 :①模型组的学习和记忆成绩均低于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;②模型组神经细胞静息态 [Ca2 + ]i 显著高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;而CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA表达水平低于假手术组 ,具有极其显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :海马神经细胞静息态 [Ca2 + ]i增高、CaMmRNA和CaMPKⅡmRNA表达减少是导致小鼠血管性痴呆发生的机制之一。 展开更多
关键词 血管性痴呆 小鼠 海马 神经细胞 静息态[Ca^2+]i 钙调素 钙调素依赖性蛋白激酶
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Ca^(2+)/CaMPKⅡ与脑缺血兴奋毒性关系的研究 被引量:1
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作者 裴林 纵艳艳 +2 位作者 张磊 孙亚锋 张光毅 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1996年第2期115-119,共5页
采用大鼠海马脑片体外缺血模型,观察了“缺血”或谷氨酸及氯胺酮对海马脑片Ca ̄(2+)/CaMPKⅡ活性的影响,同时观察了缺血对神经元胞外谷氨酸堆积的影响。结果如下:(1)Ca ̄(2+)/CaMPKⅡ活性随“缺血”时间... 采用大鼠海马脑片体外缺血模型,观察了“缺血”或谷氨酸及氯胺酮对海马脑片Ca ̄(2+)/CaMPKⅡ活性的影响,同时观察了缺血对神经元胞外谷氨酸堆积的影响。结果如下:(1)Ca ̄(2+)/CaMPKⅡ活性随“缺血”时间的延长而逐渐下降,缺血10,20和30min,酶活性分别为对照组的63%,44%和29%(10min,P<0.002;20和30mm,P<0.001),提示该酶对缺血非常敏感。(2)单纯过量外源性谷氨酸作用30min,能引起酶活性显著下降到仅为对照组的24%,提示脑缺血时酶活性的抑制与兴奋毒性有关。(3)海马脑片在体外缺血30min时,谷氨酸在胞外的堆积增加2倍多(从128±20升高到431±74nmol·mg ̄(-1)pro·min ̄(-1),n=6)。(4)氯胺酮对“缺血”和单纯外源性谷氨酸所诱导的酶活性抑制均有明显的拮抗作用,但其拮抗作用显著不同,前者可使酶活性恢复至对照的62%,后者高达92%。说明脑缺血引起酶活性下降不仅与NMDA受体有关,而且与其它因素有关。 展开更多
关键词 大鼠 海马脑片 脑缺血 氯胺酮 Ca2+/cam依赖性蛋白激酶 谷氨酸 兴奋毒性
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谷氨酸对培养的皮质神经元Ca^(2+)/CaMPKⅡ活性的影响 被引量:1
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作者 高灿 纵艳艳 张光毅 《徐州医学院学报》 CAS 1997年第6期3-6,共4页
目的研究谷氨酸(Glu)对皮质神经元的损伤及对Ca2+/CaMPKⅡ活性的影响。方法500μmol/LGlu作用10min,测Ca2+/CaMPKⅡ及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果Ca2+/CaMPKⅡ活性和正常对照... 目的研究谷氨酸(Glu)对皮质神经元的损伤及对Ca2+/CaMPKⅡ活性的影响。方法500μmol/LGlu作用10min,测Ca2+/CaMPKⅡ及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果Ca2+/CaMPKⅡ活性和正常对照相比下降46.3%,100μmol/L氯胺酮几乎完全保护该酶活性;LDH活性在1h时无明显变化,24h时明显升高。结论(1)Glu对皮质神经元损伤致Ca2+/CaMPKⅡ活性下降早于LDH变化;(2)Ca2+/CaMPKⅡ活性下降主要由NMDA受体介导,与非NMDA受体无关。 展开更多
关键词 Ca2+/cam依赖性蛋白激酶 皮质神经元 原代培养 谷氨酸 氯胺酮
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非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响
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作者 徐卫星 刘华 张岩 《国际眼科杂志》 CAS 2024年第4期508-514,共7页
目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学... 目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。 展开更多
关键词 Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(camKⅡ) 自生肽2相关抑制肽(AIP) 迁移 人视网膜色素上皮细胞(ARPE) 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)
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谷氨酸诱导大鼠海马脑片Ca^(2+)/CaM PK Ⅱ活性的抑制作用
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作者 张光毅 裴林 纵艳艳 《徐州医学院学报》 CAS 1996年第4期331-333,共3页
目的研究外源性谷氨酸对海马脑片Ca2+/CaMPKⅡ活性的影响及氯胺酮的保护作用,同时研究缺氧对神经元外谷氨酸堆积的影响。方法采用体外培养的大鼠海马脑片研究这些作用。结果(1)海马脑片在体外缺氧30min,谷氨酸在胞... 目的研究外源性谷氨酸对海马脑片Ca2+/CaMPKⅡ活性的影响及氯胺酮的保护作用,同时研究缺氧对神经元外谷氨酸堆积的影响。方法采用体外培养的大鼠海马脑片研究这些作用。结果(1)海马脑片在体外缺氧30min,谷氨酸在胞外的堆积增加2倍多;(2)单纯过量外源性谷氨酸能引起酶活性显著下降,仅为对照组的24%,提示脑缺氧时酶活性的抑制与兴奋毒性有关;(3)氯胺酮对单纯外源性谷氨酸所诱导的酶活性抑制有明显的拮抗作用,说明脑缺氧引起酶活性下降与NMDA受体介导有关。结论脑缺氧时该酶活性的抑制与下列通路有关:谷氨酸→NMDA受体→Ca2+→Ca2+靶酶。 展开更多
关键词 谷氨酸 CA^2+/cam 蛋白激酶 缺氧 海马脑片
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氯胺酮对大鼠海马脑片缺氧诱导Ca^(2+)/CaM PK Ⅱ活性抑制的拮抗作用
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作者 张光毅 裴林 纵艳艳 《徐州医学院学报》 CAS 1996年第4期334-336,共3页
目的研究Ca2+和氯胺酮对海马脑片Ca2+/CaMPKⅡ活性的影响。方法采用大鼠海马脑片体外缺氢模型进行实验,结果(1)有钙或无钙培养时,酶活性随缺氧时间的延长均下降,但前者比后者酶活性下降更显著,提示外Ca2+在神... 目的研究Ca2+和氯胺酮对海马脑片Ca2+/CaMPKⅡ活性的影响。方法采用大鼠海马脑片体外缺氢模型进行实验,结果(1)有钙或无钙培养时,酶活性随缺氧时间的延长均下降,但前者比后者酶活性下降更显著,提示外Ca2+在神经元缺氧损伤中起重要作用;(2)氯胺酮对缺氧所诱导的酶活性抑制均有明显的拮抗作用,说明脑缺氧引起酶活性下降与NMDA受体介导有关。结论脑缺氧时该酶活性的抑制与下列通路有关:NMDA受体→Ca2+→Ca2+靶酶。 展开更多
关键词 海马脑片 缺氧 氯胺酮 CA^2+/cam 蛋白激酶
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CaMKⅡ磷酸化介导海马长时程增强的诱导及淀粉样β蛋白引起的长时程增强伤害 被引量:5
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作者 殷文娟 李新毅 祁金顺 《中西医结合心脑血管病杂志》 2008年第5期557-559,共3页
目的探讨大鼠海马在体长时程增强(LTP)的诱导与Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的关系;CaMKⅡ磷酸化水平在淀粉样β蛋白(Aβ)所致海马LTP伤害中的作用。方法电生理手段记录大鼠在体海马CA1区场电位变化;免疫组化技术... 目的探讨大鼠海马在体长时程增强(LTP)的诱导与Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的关系;CaMKⅡ磷酸化水平在淀粉样β蛋白(Aβ)所致海马LTP伤害中的作用。方法电生理手段记录大鼠在体海马CA1区场电位变化;免疫组化技术测定海马脑片CaMKⅡ磷酸化水平。结果高频刺激(HFS)成功诱导海马CA1区LTP,同时,CaMKⅡ的磷酸化水平明显升高;25nmol Aβ25-35预处理可时间依赖性压抑海马LTP的诱导;Aβ25-35预处理可时间依赖性压抑海马CaMKⅡ的磷酸化水平。结论在LTP诱导过程中,电生理指标场兴奋性突触后电位的LTP变化与免疫组织化学实验中磷酸化CaMKⅡ的变化相一致;CaMKⅡ磷酸化作用的下调可能参与了Aβ对在体海马LTP的抑制。 展开更多
关键词 Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 LTP 免疫组化 海马 大鼠
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过氧化氢对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2表达的影响及CaMKⅡ的作用 被引量:1
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作者 朱莉萍 金肆 +1 位作者 苏远 王迪浔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1968-1972,共5页
目的:探讨过氧化氢(H2O2)对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在其中的作用。方法:采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H2O2处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性,采用RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达水平,采用We... 目的:探讨过氧化氢(H2O2)对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在其中的作用。方法:采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H2O2处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性,采用RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达水平,采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果:H2O2增强COX-2表达,呈浓度和时间依赖性。100μmol/L H2O2处理肺动脉内皮细胞4 h,COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组,COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%(P<0.05),蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%(P<0.05)。CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H2O2的这一效应。结论:H2O2可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达,CaMKⅡ是H2O2增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。 展开更多
关键词 Ca^2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶 过氧化氢 环氧合酶
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人CaMKKβ蛋白的原核表达、纯化及活性测定
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作者 刘亚晋 谭初兵 +2 位作者 时丽丽 潘晓菲 徐为人 《中国医药生物技术》 2014年第3期208-213,共6页
目的对原核体系表达的CaMKKβ蛋白体外活性进行探索,为针对CaMKKβ、AMPK药物研发提供科研基础。方法克隆人CaMKKβ基因,建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ,将其转化入E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内,在16℃、0.02 mmol/L IPTG条件下诱... 目的对原核体系表达的CaMKKβ蛋白体外活性进行探索,为针对CaMKKβ、AMPK药物研发提供科研基础。方法克隆人CaMKKβ基因,建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ,将其转化入E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内,在16℃、0.02 mmol/L IPTG条件下诱导重组表达CaMKKβ蛋白,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白,并利用Glo?Max Assay方法检测其活性。结果通过基因测序表明pET28a-CaMKKβ质粒构建成功;重组人CaMKKβ蛋白可溶性表达量较高,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白纯度可达80%以上,活性检测结果表明,大肠杆菌体系内表达的人CaMKKβ蛋白在CaM/Ca2+存在与否情况下,酶活基本一致。结论成功构建原核表达载体pET28a-CaMKKβ,实现重组人CaMKKβ在原核体系内可溶性表达,活性测定表明原核体系内表达的CaMKKβ自主酶活性较强,受CaM/Ca2+影响较小。 展开更多
关键词 钙-钙调素依赖性蛋白激酶 腺苷酸活化蛋白激酶 色谱法 亲和 cam/Ca2+ cam/Ca2+
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钙调蛋白/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ和心律失常的关系 被引量:4
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作者 黄鑫 李莉 《中国医师进修杂志》 2006年第5期76-78,共3页
关键词 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 心律失常 Ca^2+结合蛋白 协同调节作用 camKⅡ 第二信使 生理功能 疾病状态 细胞内 心肌病
原文传递
慢性复合性应激大鼠学习和记忆与海马突触后致密物质CaMKII的表达变化 被引量:17
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作者 孙臣友 刘能保 +5 位作者 张敏海 刘少纯 程少荣 李辉 刘向前 汪薇曦 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期19-23,共5页
目的 探讨慢性复合性应激对大鼠学习和记忆的影响 ,Ca2 + 钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的表达 ,及其在学习与记忆中的作用。 方法 采用行为训练和免疫组织化学相结合的方法 ,将大鼠随机分为应激组和对照组 ,应激组动物进行 6... 目的 探讨慢性复合性应激对大鼠学习和记忆的影响 ,Ca2 + 钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的表达 ,及其在学习与记忆中的作用。 方法 采用行为训练和免疫组织化学相结合的方法 ,将大鼠随机分为应激组和对照组 ,应激组动物进行 6周的慢性复合性应激试验。实验后 ,动物进行 3d的Morris水迷宫和Y迷宫测试 ,记录其学习和记忆成绩 ,同时观察CaMKII在海马CA1和CA3区的分布和表达。 结果 应激组动物的学习与记忆成绩均超过或优于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;与对照组比较 ,CaMKII在应激组海马CA3区辐射层灰度明显降低(P <0 0 1) ,而始层灰度无明显变化 (P >0 0 5 ) ,在应激组CA1区海马辐射层和始层的灰度均较对照组降低 (P <0 0 5 ) ;大鼠的学习记忆成绩与CaMKII的表达呈正相关。 结论 慢性复合性应激致大鼠的学习与记忆能力加强 ,CaMKII在海马CA1区和CA3区的表达增加 ,说明CaMKII参与了慢性复合性应激对学习记忆的影响。 展开更多
关键词 慢性复合性应激 学习和记忆 海马 突触后致密物质 Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 迷宫 免疫组织化学 大鼠
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