氧糖剥夺再灌注对神经元Wnt5a/FZD2/Ca^(2+)通路的影响

目的:探讨氧糖剥夺再灌注(OGD/Rep)后神经元细胞内Wnt5a/FZD2/Ca^(2+)通路的变化。方法:采用OGD/Rep模型构建神经元细胞局部缺血/再灌注损伤,分正常组、再灌注(0、3、6、9、12、24 h)组。免疫荧光鉴定皮层神经元细胞,CCK-8法确定神经元细胞OGD时间,Western blotting检测非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路中Wnt5a、FZD2、IP3-R和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白的变化,免疫荧光和酶标仪检测细胞内Ca^(2+)和活性氧(ROS)的含量。结果:MAP-2免疫荧光鉴定原代皮层神经元细胞纯度较高。与正常组比较,神经元细胞OGD 3 h后细胞存活率为55.46%;与正常组比较,OGD/Rep后非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路相关蛋白Wnt5a(3、6、9、12、24 h)、FZD2(3、6、9 h)、IP3-R(6、9、12、24 h)和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ(6 h)的相对表达量上调(P<0.05~P<0.01);与正常组比较,OGD/Rep后神经细胞内Ca^(2+)和ROS的表达量均升高(P<0.01)。结论:神经元细胞OGD/Rep能激活Wnt5a/FZD2/Ca^(2+)信号通路。

Wnt/Ca^(2+)信号通路的生理及病理生理学研究进展

1982年,美国加利福尼亚大学NUSSE等[1]将分别来自果蝇的Wingless蛋白和小鼠的Int蛋白的具有同源性、富含半胱氨酸残基的2种分泌型糖蛋白合称为Wnt蛋白。Wnt信号通路的启动主要依靠Wnt配体蛋白、Wnt受体及相关配件。目前,Wnt配体蛋白在人类和哺乳动物中已发现有19种,Wnt受体主要由卷曲蛋白(Frizzled)家族和非Frizzled家族类蛋白构成。Wnt信号通路根据是否依赖核心调控因子β-catenin分为依赖β-catenin的经典Wnt信号通路和不依赖β-catenin的非经典Wnt信号通路[2]。经典Wnt信号通路激活可引起细胞内β-catenin表达量增加从而激活细胞核内靶基因发挥调控作用[3]。

CytochalasinH对小鼠脾细胞增殖的抑制作用及其对Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路的影响

【目的】研究红树林植物大红树内生真菌Phomopsis asparagi DHS-48得到的次级代谢产物cytochalasin H对小鼠(Mus musculus)脾细胞的免疫抑制活性及其作用机制。【方法】用不同浓度(3、6、12、25、30μmol/L)cytochalasin H处理小鼠脾细胞,通过CCK-8活力测定法检测其对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导小鼠脾细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测cytochalasin H对小鼠脾细胞凋亡的影响;免疫荧光实验检测cytochalasin H对细胞中NFAT入核及钙离子内流的影响;酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)和免疫蛋白印迹法(Western blotting)测定cytochalasin H对脾细胞中NFAT信号通路的影响。【结果】CCK-8实验表明,cytochalasin H对于正常小鼠脾淋巴细胞的毒性比环孢菌素(Cyclosporin A,Cs A)弱,半抑制浓度IC_(50)=(35.07±1.16)μmol/L;流式细胞术显示,cytochalasin H对ConA刺激的脾淋巴细胞无促凋亡作用;cytochalasin H对ConA诱导增殖的小鼠脾淋巴细胞具有显著的抑制效果,IC_(50)=(14.81±0.81)μmol/L,且呈剂量依赖性;免疫荧光结果表明,cytochalasin H在浓度为15μmol/L时显著地抑制了钙离子内流;Western Blotting结果显示cytochalasin H对脾淋巴细胞中CaN、NFAT蛋白(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)的表达具有显著的抑制作用;免疫荧光结果显示,cytochalasin H抑制细胞浆内的NFAT转移到细胞核;ELISA测试结果证明,cytochalasin H能显著抑制下游细胞因子白介素-2(IL-2)的分泌(α=0.05)。【结论】Cytochalasin H通过抑制Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路转导显著抑制T细胞增殖和活化。

氰戊菊酯过度激活Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成

目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平,化学比色法检测TM3细胞的ATP水平,Flou-4/AM探针测定细胞内Ca^(2+)水平,JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变,蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降,MMP水平降低,睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时,TM3细胞胞内的Ca^(2+)水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升,MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca^(2+)超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。

Ca^(2+)信号通道与胰腺炎

胰腺炎至今尚缺乏有效的治疗药物。近年来发现胞内Ca2+超负荷能导致胰腺炎的发生。该文综述了胰腺炎早期胰腺腺泡细胞内Ca2+转运的变化和胆盐、乙醇、高脂对其影响,以及咖啡因抑制异常Ca2+信号的作用,并据此提出研究防治药物的新靶点。

植物中解密Ca^(2+)信号转导特异性的机制

Ca^(2+)信号介导植物对外界信号的刺激反应,并调节多种生理过程。CBL是一种在植物中发现的Ca2+结合蛋白,其靶蛋白为CIPK,现对CBL-CIPK信号转导系统及其如何解密Ca2+信号转导特异性进行综述。

脾虚证Ca^(2+)-CaM信号系统的实验研究

脾司运化,生气血,为后天之本.为从胃肠动力学角度,予脾虚失运的本质以分子水平的诠释,我们在国内首次探讨了脾虚证与空肠平滑肌细胞内Ca2+-CaM信号系统的相关性,结果如下.

植物抗病的Ca^(2+)信号转导研究进展

综述了近年来植物抗病Ca2+信号系统方面的研究进展,包括Ca2+信号的产生及特点、Ca2+的转移系统、钙结合蛋白(CaM)的生理功能、Ca2+信号系统在植物抗病中的可能作用,并对今后的研究方向提出了建议。

Ca^(2+)信号调控细胞死亡的亚细胞和分子机制

Ca2+在细胞死亡过程中起至关重要的作用。胞浆和/或线粒体(MT)内Ca2+超载不但是多种原因、多种方式细胞死亡的起始因素,也可通过激活蛋白酶、核酸酶、磷脂酶等酶,直接或间接通过与Bcl-2家族蛋白等重要调节因素的相互作用,全程参与死亡生化反应。内质网(ER)释放Ca2+与MT、溶酶体(LS)、细胞核相互作用,激活多种细胞死亡信号转导通路,导致细胞凋亡、坏死和自噬性细胞死亡。本文重点介绍Ca2+信号在亚细胞和分子水平调控细胞死亡的机制研究方面的最新进展。

植物Ca^(2+)信号的研究进展

在植物的生长发育过程中,为了适应环境,调节自身代谢和生长,需要对各种外界环境刺激以及植物内部生理信息做出反应,因此,植物产生了自己的信号系统。Ca2+作为一种信号分子在植物细胞信号系统中起着举足轻重的作用。针对国内外对植物Ca2+信号的研究情况,综述了Ca2+信号的产生、Ca2+信号参与的各种植物生理过程、Ca2+信号的检测以及其研究的最新进展。

细胞Ca^(2+)信号对基因转录的调节

细胞Ｃａ２ ＋ 信号系统是介导胞外刺激引起核内反应的几个主要信号转导途径之一，对细胞的存活及凋亡起到至关重要的作用。本文对细胞Ｃａ２ ＋ 信号的形成和调控、细胞Ｃａ２＋

胰淀素对大鼠胰岛素分泌的影响及胰岛细胞内Ca^(2+)信号调节机制

目的:探讨胰淀素对大鼠胰岛素分泌的影响及胰岛β细胞内Ca2+信号调节机制。方法:应用单层培养的新生SD大鼠胰岛β细胞,以放射免疫双抗体法检测不同浓度胰淀素对胰岛素分泌的影响,同时采用黏附细胞仪(ACAS570细胞仪)和钙特异荧光探针Fluo-3-AM检测胰岛β细胞内Ca2+变化。并进一步在不同的钙阻断剂条件下。

细胞内Ca^(2+)信号

细胞Ｃａ２＋信号包含了四个过程：刺激作用于细胞表面，产生Ｃａ２＋动员信号；动员信号与胞内受体结合或作用细胞膜的Ｃａ２＋泵及Ｃａ２＋通首；Ｃａ２＋进入细胞内，形成Ｃａ２＋信号，Ｃａ２＋信号通过其时空特性触发、控制多种生物反应过程；Ｃａ２＋的回收，Ｃａ２＋信号结束。Ｃａ２＋信号因为与其它信号途径的相互作用而使其变化更加复杂，其作用更加广泛。

草酸对植物体内Ca^(2+)浓度及信号传导途径的影响

从影响植物体内Ca2+浓度及其信号通路的角度分析了草酸的致病作用分子机制.采用Fluo-4染色和荧光检测方法,在激光共聚焦显微镜下观察分析了草酸对拟南芥植株体内Ca2+浓度的影响.结果表明:1mmol/L草酸处理后拟南芥体内Ca2+浓度变化不大;但10mmol/L草酸处理迅速、强烈地降低了拟南芥体内Ca2+浓度,处理10min后几乎完全检测不到Ca2+荧光信号.同时,利用实时定量反转录聚合酶链反应技术分析了草酸对3个与Ca2+浓度稳定和信号传导相关的CRT基因以及3个Ca2+信号途径重要基因CDPK1、CDPK2和CAMTA3的表达动态的影响.结果显示:除了处理6h后CRT3的基因表达外,0.1和1mmol/L草酸处理对上述基因表达的影响总体趋势一致,但1mmol/L草酸处理的影响程度更显著;草酸处理对不同基因的表达影响也有显著区别:1mmol/L草酸处理后CRT基因家族与CDPK1基因表达持续上调,CDPK1基因表达上调倍数显著大于CRT基因;CAMTA3基因表达持续下调,到处理后24h,表达几乎被完全抑制;而CDPK2基因表达则在处理后6h显著上调,到处理后24h略微下降.这些结果说明草酸可通过改变Ca2+浓度及Ca2+信号通路对植物与核盘菌互作起重要的调控作用.

Ca^2+信号通路对大鼠舌黏膜鳞癌形成影响的实验研究

目的:探讨Ca^2+信号通路对大鼠舌黏膜鳞癌形成的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为空白对照组(A)和实验组。随机数字法抽取8只SD大鼠纳入对照组,不做任何处理。其余为总实验组,分别在第4周、8周、12周、16周、20周、24周、28周,在总实验组中随机抽取8只SD大鼠分别记录为B组(4周)、C组(8周)、D组(12周)、E组(16周)、F组(20周)、G组(24周)、H组(28周)。抽取的SD大鼠处死后,切取舌组织并提取总RNA,Genechip Rat Genome 230 2.0芯片测定舌组织mRNA表达,分析Ca^2+信号通路基因表达变化情况。结果:Ca^2+信号通路中GPCR、ROC、CD38、ADCY、SERCA、RYR、PKC等关键基因均上调;下调的有NCX、PLCβ、PLN、IP3R、CAMK等基因。结论:Ca^2+信号通路可能是调控舌黏膜鳞癌形成的重要信号通路之一。

Wnt/Ca^(2+)信号通路在肢体缺血/再灌注损伤机制中的研究进展

Wnt/Ca^(2+)信号通路属于Wnt非经典通路,该通路的失调与细胞调亡、炎症反应等病理改变,以及许多疾病的发生、发展、转归有着密切联系。肢体缺血/再灌注损伤(LIRI)是临床工作中常遇到的一类难题,而Wnt/Ca^(2+)通路可诱使细胞内Ca^(2+)浓度升高并可活化Ca^(2+)敏感信号成分,其介导的细胞凋亡、Ca^(2+)超载和机体炎症等反应在LIRI中扮演重要角色。该文就Wnt/Ca^(2+)信号通路在LIRI病机中所起的作用进行综述。

肠胶质细胞系TRPV4依赖性Ca^(2+)内流、ATP释放与炎症因子表达

目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在调节肠胶质细胞外Ca^(2+)内流中的作用及其意义。方法收集大鼠肠胶质细胞系CRL-2690、大鼠肠上皮细胞系IEC6和人胚肾细胞系HEK293T样本,采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法检测TRPV4的mRNA、蛋白表达与定位;将CRL-2690细胞依次分为GSK组与GSK+HC组,低渗组与低渗+HC组,GdCl_(3)组与GdCl_(3)+HC组以及CaCl_(2)组与CaCl^(2+)HC组,采用Fura-2荧光探针和单细胞荧光Ca^(2+)检测仪评估CRL-2690细胞中TRPV4通道活性。将CRL-2690细胞分为对照组、GSK组与GSK+HC组,通过荧光素-荧光素酶实验测量细胞ATP的释放水平;采用RT-qPCR检测炎症相关基因GFAP、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA表达。结果在大鼠肠胶质细胞系CRL-2690中检测到TRPV4 mRNA和蛋白表达;TRPV4特异性激动剂GSK1016790A和低渗透压刺激明显增强了CRL-2690细胞内钙荧光强度,而TRPV4特异性抑制剂HC067047可抑制此作用(0.43038±0.06365 vs 0.00423±0.00578,P<0.0001);钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)激活诱导的外Ca^(2+)内流也可被HC067047所抑制(P<0.05);功能上,激活TRPV4可促ATP释放、EGC反应性增生标志物GFAP和炎症因子IL-1β、IL-6的表达,并抑制抗炎因子IL-10的表达,该作用可被HC067047所抑制(P<0.05)。结论激活TRPV4可引起肠胶质细胞外Ca^(2+)内流,并促进ATP释放与炎症因子表达,可能参与肠道炎症的发生。

TRPC3通道介导的Ca^2＋信号通过EGFR反式激活而促高血压脑血管重构

离子信号失衡是脑血管重构的关键发病因素,但瞬时受体电位通道（Transient Receptor Potential chan-nel,TRP）在高血压状态下脑血管重构中的作用不清楚.通过定量PCR,蛋白印记,离子成像及膜片钳等技术,实验发现基底动脉上TRPC3表达及功能在高血压时均明显上调.在体使用TRPC3通道阻断药Pyrazole3后明显改善脑血管重构,揭示TRPC3是促高血压脑血管重构的关键通道.此外,高血压时EGFR反式激活明显增强,表现为EGFR磷酸化增强,由EGFR配体前体（即pro-HB-EGF）酶切增加所;pro-HB-EGF脱落酶（sheddase）ADAM17酶活性明显增加,在体使用Pyr3后抑制酶活性,且降低EGFR反式激活.结果因此提示,TRPC3通过Ca2＋/ADAM17信号通路而促进EGFR反式激活而促脑血管重构.因此,TRPC3/Ca2＋/AD-AM17/EGFR信号通路是促高血压脑血管重构的关键信号,阻断此通路有望成为防治高血压脑血管重构的新手段.

微藻对低温响应的Ca^2＋信号传导途径研究进展

微藻与高等植物一样,可以感受外界低温刺激,并将其作为胞外环境信号,通过信号跨膜传递,级联放大等过程,最终改变机体自身的结构组成或分泌代谢产物来抵御低温环境所带来的危害。本文主要阐述了低温诱导Ca2+信号通路的活化,活性氧(active oxygen species;ROS)以及引起的一些反应,如:抗氧化系统的防御、MAPKs的通路以及微藻细胞代谢物质积累的改变,为利用微藻生产代谢产物提供思路和方法。

雌激素微环境下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究

目的:探讨雌激素作用下非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells hPDLSCs)成骨分化的调控。方法:将第3代hPDLSCs分为空白组、对照组、雌激素组、抑制剂组,成骨诱导7d检测ALP活性,Real-time PCR检测各组Wnt信号通路基因及成骨基因表达水平。结果:ALP检测结果示对照组较空白组ALP活性增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组ALP活性增加(P<0.05),但雌激素组和抑制剂组ALP活性差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR检测结果显示对照组较空白组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05);抑制剂组较雌激素组β-catenin表达下降(P<0.05),而CaMKⅡ、NLK表达增加(P<0.05),但两组成骨基因RUNX2、OCN表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:雌激素可能通过增强非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路的活化促进hPDLSCs的成骨分化。