黄芪多糖通过影响Ca^(2+)调节蛋白及其复合体促进大鼠小肠隐窝上皮细胞迁移

目的观察黄芪多糖对大鼠小肠隐窝上皮IEC-6细胞迁移过程中多胺信号通路Ca^(2+)调节指标的影响,并探讨黄芪促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法采用划痕法建造细胞迁移模型并观察黄芪多糖在无钙培养时对细胞迁移的影响;采用qPCR法检测经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)、基质交感分子(STIM)1、STIM2 mRNA表达;采用免疫荧光法检测STIM1蛋白的分布及表达;采用蛋白质印迹法检测TRPC1、STIM1和STIM2蛋白表达;采用免疫沉淀法检测STIM1/TRPC1、STIM1/STIM2蛋白复合体的表达。结果无钙培养(去除胞外Ca^(2+)内流来源)减弱了黄芪多糖促进细胞迁移的作用(P<0.01)。黄芪多糖能提高TRPC1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)、逆转二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的TRPC1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01);黄芪多糖能促进STIM1向胞膜移位并提高其表达水平,改善DFMO所致的STIM1向胞膜移位延迟及表达抑制;黄芪多糖能提高STIM1 mRNA和蛋白表达、逆转DFMO对STIM1 mRNA和蛋白表达的抑制(P<0.05或P<0.01);黄芪多糖能降低STIM2 mRNA和蛋白表达,逆转DFMO对STIM2 mRNA和蛋白表达的提高(P<0.05或P<0.01)。黄芪多糖能提高STIM1/TRPC1的表达水平,逆转DFMO对STIM1/TRPC1表达的抑制,还可通过提高复合体中STIM1表达水平、降低STIM2表达水平调节STIM1/STIM2表达,并能拮抗DFMO对STIM1/STIM2表达的影响。结论黄芪多糖促进IEC-6细胞迁移的作用与其影响Ca^(2+)调节蛋白及蛋白复合体表达有关。

瞬时受体电位香草酸亚型1通过调节Ca^(2+)依赖性转录调节因子参与促大鼠血管平滑肌细胞增殖

[目的]探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对Ca^(2+)依赖性转录调节因子表达的影响以及大鼠血管平滑肌细胞(RVSMC)增殖的作用。[方法]体外培养RVSMC,利用TRPV1特异性激动剂辣椒素(CAP)或抑制剂辣椒卓平(CPZ)促进或抑制TRPV1的表达。免疫细胞化学染色技术检测TRPV1的表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;Western blot和实时荧光定量PCR检测Ca^(2+)依赖性转录调节因子活化T细胞核因子c1(NFATc1)、钙衰蛋白(CSEN)和肌细胞增强因子2C(MEF2C)的蛋白表达和mRNA水平。[结果]免疫细胞化学染色显示TRPV1主要表达在RVSMC的胞膜和胞质,CAP或CPZ能激活或抑制TRPV1的表达。与对照组相比,CAP可明显刺激RVSMC增殖活性和上调PCNA蛋白的表达(P<0.01),同时,NFATc1、MEF2C的蛋白和mRNA水平显著上调(P<0.01);CSEN蛋白表达显著增高(P<0.01),CSEN mRNA水平无明显变化(P>0.05)。CPZ作用后,与对照组比较,RVSMC增殖活性、PCNA蛋白表达降低(P<0.01),NFATc1、MEF2C的蛋白和mRNA水平显著下调(P<0.01);CSEN蛋白表达显著降低(P<0.01),CSEN mRNA水平无明显变化(P>0.05)。[结论]TRPV1可能通过上调Ca^(2+)依赖性转录调节因子的表达参与促RVSMC增殖。

双龙丸对过氧化氢所致内皮细胞胞浆钙离子浓度变化的调节作用

本文建立了应用荧光指示剂Fura-2/AM测定培养的牛主动脉内皮细胞胞浆钙离子浓度([Ca2+]i)的方法,分别测定在正常状态下、单独加入过氧化氢(H2O2)时及同时加入H2O2和双龙丸药物血清(阳性与阴性对照组分别为心痛定及生理盐水的药物血清)时培养的牛主动脉内皮细胞胞浆钙离子浓度([Ca2+]i),探讨H2O2作用下[Ca2+]i的变化及双龙丸对这一变化的调节作用。结果:测得正常对照组内皮细胞的[Ca2+]i为96.58±14.20nmol/L,加入H2O2(0.05mmol/L)可使其[Ca2+]i增加到294.41±42.73nmol/L;双龙丸能部分拮抗H2O2升高[Ca2+]i,其高剂量组作用强于低剂量组,但均不及心痛定。实验结果证实了双龙丸能调节Ca2+代谢,具有一定的钙拮抗作用。

植物抗冻机理研究新进展:抗冻基因表达及其功能

综述了迄今业已分离和鉴定的低温诱导表达的抗冻基因 ,以及通过染色体基因制图方法揭示和证实的抗冻性基因。并着重地介绍了这些抗冻基因在提高植物抗冻能力上的功能。这些抗冻基因表达合成的新多肽具有高度的亲水性 ,起着保护和稳定细胞膜结构的作用 ,从而防止冰冻伤害、提高植物的抗冻能力。同时还介绍了抗冻基因表达中的某些调节因子 ,其中尤其值得注意的是 ,CBF基因似乎有可能作为抗冻基因表达的“主开关” ,以及Ca2 +作为植物细胞的第二信使在传递低温信号、启动和调节抗冻基因表达中可能的重要作用。这些研究结果 ,不仅为阐明植物的抗冻机理提供了新的证据 。

EF手图像超家族成员——肌钙蛋白C的研究进展

EF手图像超家族蛋白泛指一类含有由螺旋区-泡区-螺旋区构成的EF手图像模体的蛋白。这类蛋白通常都具有金属离子结合能力或者形成二聚体的能力。肌钙蛋白C是一种EF手图像蛋白,它具有钙离子结合能力,可以与肌钙蛋白I、肌钙蛋白T形成复合物调节肌肉收缩。目前,国内外对肌钙蛋白C的研究多数集中在脊椎动物上,而对无脊椎动物的研究较少。主要从EF手图像超家族的特性及其家族成员——肌钙蛋白C的分类、结构及功能等方面进行了阐述,并结合笔者自身的研究方向,简要介绍了家蚕肌钙蛋白C的研究情况及前景。

线粒体相关内质网膜(MAM)钙转运及调节蛋白介导线粒体钙稳态

内质网和线粒体作为细胞内重要的钙池,维持细胞内钙离子稳态。近年来发现,线粒体与内质网之间存在物理偶联,称为线粒体相关内质网膜(mitchondria associated endoplasmic reticulum membrane,MAM)。最近发现,MAM中存在许多钙转运与调节蛋白,它们对内质网与线粒体之间的钙离子交流进行精密调节,维持细胞功能与生存。该文综述了国内外近年来MAM介导的钙离子信号转导的研究进展,重点阐述MAM中钙离子相关蛋白质在维持线粒体钙稳态中的作用与机制。

基于心肌细胞钙稳态调节的防治心力衰竭中药作用探讨

近些年来,中药对心力衰竭相关研究及治疗规避了西药治疗所带来的毒副作用,在心力衰竭临床与实验中,中药单独用药或联合用药均成效显著。文章主要围绕心肌细胞内钙稳态的相关因子和相关中药对心力衰竭的影响等方面进行综述。