慢性铅暴露对小鼠CaMKII蛋白表达的影响

目的观察和探讨铅对小鼠海马钙/钙调素依赖性蛋白激酶II(CaMKII)蛋白表达的影响。方法小鼠出生第1 d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6 mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,28,42,56 d处死小鼠,用蛋白免疫印记法观察各组小鼠海马区CaMKII蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑海马CaMK II蛋白表达总体上呈现下降趋势,2.4 mmol/L染铅组中,14 d CaMKII蛋白表达呈现上升趋势,与相应天数对照组相比差异无统计学意义;4.8,9.6 mmol/L染铅组中,CaMKII蛋白表达与相应期对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论铅扰乱CaMKII蛋白正常表达。

鞘内注射KN93对小鼠神经病理性疼痛的镇痛效应

目的探讨钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在神经病理性疼痛发病机制中的作用。方法雄性ICR小鼠32只,随机均分为四组:神经病理性疼痛(SNL)组,制作L5/6脊神经结扎(SNL)模型;SNL/KN92组,制作SNL模型,鞘内注射无药理活性的KN93的结构类似物KN9245nmol;SNL/KN93组,制作SNL模型,鞘内注射KN9345nmol;假手术(Sham)组,仅显露脊神经而不结扎。分别于SNL术前及术后2～5d每天测定小鼠的机械痛阈和热痛阈,SNL/KN92组与SNL/KN93组于术后5d痛阈测定前30min行鞘内给药。于最后一次痛阈测定毕处死小鼠,取腰段脊髓组织用Western blot检测pCaMKⅡα的表达水平。结果SNL可导致机械痛阈和热痛阈降低(P<0.05),脊髓组织pCaMKⅡα的表达增加(P<0.05);鞘内注射KN93可翻转SNL所致的上述改变(P<0.05),但KN92无此效应。结论CaMKⅡ参与了SNL诱导的神经病理性疼痛的维持,靶向于CaMKⅡ信号途径的治疗可为慢性疼痛治疗提供新的策略。

1,25二羟维生素D_3通过ERK5通路调节破骨细胞分化

[目的]探讨体外1,25二羟维生素D_3(1,25-(OH)_2-VitD_3)通过细胞外信号调节激酶5(extracellularregulated kinase 5,ERK5)信号通路在诱导破骨细胞分化中的作用。[方法]对骨髓来源巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)进行不同浓度(0,10^(-9),10^(-8),10^(-7)mol/L)1,25-(OH)_2-VitD_3孵育,明确1,25-(OH)_2-VitD_3能否激活ERK5信号通路,并筛选出合适浓度的1,25-(OH)_2-VitD_3激活ERK5。调配不同工作液,分为正常细胞对照组、XMD8-92组、1,25-(OH)_2-VitD_3组及1,25-(OH)_2-VitD_3+XMD8-92组,分别孵育BMMs细胞6 d。采用TRAP染色检测4组破骨细胞的分化水平;Western Blot分别检测p-ERK5、ERK5等蛋白水平变化;RT-PCR检测NFATc1、CAMKⅡmRNA相对表达量。[结果]10^(-8)mol/L的1,25-(OH)_2-VitD_3可显著激活ERK5磷酸化(P<0.05)并通过ERK5通路促进破骨细胞分化(P<0.01),但此效应可被ERK5高选择性抑制剂XMD8-92抑制(P<0.05)。ERK5激活可显著上调破骨细胞CAMKⅡ、NFATc1 mRNA的表达(P<0.01);而XMD8-92可显著抑制CAMKⅡm RNA的表达(P<0.01),但对NFATc1 mRNA无显著影响(P>0.05)。[结论]体外低浓度(10^(-8)mol/L)的1,25-(OH)_2-VitD_3通过激活ERK5信号通路促进破骨细胞分化,CAMKⅡ是破骨细胞中ERK5信号下游通路的重要靶点。