小鼠胚胎心肌细胞的I_f和I_(Ca-L)电流表达的发育依赖性变化

目的 :研究不同时期胚胎心肌细胞超极化激活的电流 (hyperpo larization activatedcurrent,If)和L 型钙电流 (L typecalciumcurrent,ICa L)表达的发育依赖性变化。方法 :运用全细胞膜片钳技术 ,记录不同发育阶段胚胎心肌细胞的If 和ICa L。结果 :If 通道在早期(EDS)、中期 (IDS)、晚期 (LDS)胚胎心室肌细胞上的功能性表达水平分别为 85 .70 %、71.60 %、44 .40 % ;其电流密度分别是 -7.2 4±1.2 8pApF- 1 、-6.48± 0 .99pApF- 1 、-3 .76± 1.0 4pApF- 1 (P均<0 .0 1)。If 通道在中、晚期胚胎心房肌细胞上的功能性表达水平分别为 77%、48.3 0 % (P <0 .0 1) ;其电流密度分别是 -8.86± 2 .3 4pApF- 1 与 -4 .62± 1.0 6pApF- 1 (P <0 .0 1)。早、中、晚期胚胎心肌细胞的ICa L的功能表达变化不明显 (P >0 .0 5 )。结论 :胚胎心肌细胞的If的功能表达呈发育依赖性下降 ,ICa

ANS活性在乳鼠心房肌细胞Ca-L和KAch通道表达中的作用

目的:探讨ANS活性在乳鼠心房肌细胞Ca-L及KAch通道中的表达作用。方法:实验与2014年9年开始截止到2017年7月,选取60只实验乳鼠随机分为低药物浓度组和高药物浓度组,每组各30只;低药物浓度组NE 0.1μmol/L,Ach 0.1μmol/L;高药物浓度组NE 10μmol/L,Ach 10μmol/L进行干预。应用实时荧光定量RT-PCR和免疫组化α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)染色鉴定心肌细胞。进行检测2两组大鼠乳鼠心房肌细胞中的L型钙通道(Ca-L)和乙酰胆碱敏感钾通道(KAch)相关基因和蛋白表达。结果:研究显示,ANS活性与乳鼠心房肌细胞Ca-L及KAhc通道的表达转录水平呈正相关性。结论:ANS活性在乳鼠心房肌细胞Ca-L和KAch通道中影响了诸多因子的水平表达。

黄芪甲苷对糖尿病心肌病大鼠SERCA2a及I_(Ca-L)的影响

目的观察黄芪甲苷改善高脂高糖饲料联合链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病心肌病大鼠SERCA2a及L-钙电流的机制研究。方法成年Wistar大鼠高脂高糖饮食及STZ诱导糖尿病心肌病模型,随机分为3组,模型组(n=5)、黄芪甲苷组(10mg/kg,n=5)、贝那普利组[100mg/(kg·d),n=5],另设正常组(n=5),4周治疗后观察大鼠心肌组织细胞凋亡、心肌纤维化、SERCA2a蛋白水平、基因表达及I_(Ca-L)电流的变化。结果高脂高糖饲料联合STZ-诱导糖尿病心肌病大鼠心脏功能下降、SERCA2a、I_(Ca-L)电流表达降低,黄芪甲苷组较模型组可显著改善细胞凋亡和心肌纤维化,同时提高SERCA2a蛋白和mRNA表达,改善I_(Ca-L)电流的作用,与盐酸贝那普利组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷可通过提高SERCA2a mRNA和蛋白的表达,增加I_(Ca-L)电流,改善心肌的收缩舒张功能。

FDN-C对高塑性黏土力学特性的影响与机理分析

为考察萘系减水剂(FDN-C)在土体固化中的应用效果,在高塑性黏土中掺加不同用量FDN-C,与木质素磺酸钙(CA-LS)对比,分析其对压实荷载、无侧限抗压强度等力学性能的影响,并对固化处理后试样粒度、微观结构、结合水以及矿物成分和官能团等进行分析,研究FDN-C对土壤颗粒的作用机理。结果表明:与CA-LS类似,FDN-C也可起到降低压实荷载,提高土体无侧限抗压强度的作用,在掺量超过土样质量的0.7%后,掺加FDN-C试样的压实荷载更低,添加两种减水剂试样的无侧限抗压强度相当;FDN-C和CA-LS均可通过分散土中的“假粉粒”,降低土颗粒表面结合水膜厚度及减少颗粒间距,使土颗粒间更密实,从而提高土体的工程性质;不同的是,CA-LS降低弱结合水膜厚度能力较强,FDN-C降低强结合水膜厚度能力较强。CA-LS分子中较多可交联的游离空位使其具有一定的粘合性,可以使土颗粒更好地胶结到一起,而未发现FDN-C有类似作用。

干姜吴茱萸水煎液对大鼠结肠平滑肌细胞L型Ca^(2+)通道的影响

目的:探讨干姜吴茱萸水煎液对大鼠结肠平滑肌收缩及平滑肌细胞L型Ca^(2+)通道的影响机制。方法:采用0、0.01、0.1、1、10 g/L干姜吴茱萸(1∶1)水煎液依次作用于正常结肠平滑肌,10 g/L水煎液及L型Ca^(2+)通道激动剂BAY-K-8644依次作用于氯化乙酰胆碱(Ach)诱导后的正常平滑肌,检测平滑肌收缩张力、频率和振幅;全细胞膜片钳记录L型钙电流;Western blot检测各组细胞中L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(α1c)和钙调蛋白(CaM)蛋白表达情况。结果:1、10 g/L水煎液组能显著降低离体结肠平滑肌的收缩张力(P<0.05),对频率及振幅并无显著影响(P>0.05);与0 g/L水煎液组相比,Ach促进平滑肌收缩张力、频率和振幅显著增加(P<0.05);与Ach组相比,10 g/L水煎液显著降低平滑肌的收缩张力、频率和振幅(P<0.05);与10 g/L水煎液组相比,BAY-K-8644显著增加平滑肌的收缩张力、频率和振幅(P<0.05);与0 g/L水煎液组相比,Ach可显著增加ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与Ach组相比,10 g/L水煎液显著降低ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与10 g/L水煎液组相比,BAY-K-8644可显著增加ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与对照组相比,Ach组结肠平滑肌细胞Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c、CaM表达显著增加(P<0.05);Ach组相比,10 g/L组Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c和CaM表达水平显著降低(P<0.05);与10 g/L组相比,BAYK-8644组Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c、CaM表达显著增加(P<0.05)。结论:干姜吴茱萸水煎液可抑制大鼠结肠平滑肌收缩,并阻滞L型Ca^(2+)通道。

钙/钙调蛋白通过铁过载介导心肌梗死中心肌细胞铁死亡

心肌梗死(myocardial infarction,MI)作为一种严重危害人类健康的急性冠脉综合征,包括钙超载等多种病理生理过程参与其中。现有的治疗方法及预防措施存在局限性,不能对再生潜力较差的心肌细胞进行有效修复。探究心肌细胞多种程序性死亡方式都是心肌梗死治疗潜在重要靶点,而铁死亡(ferroptosis)作为一种新型细胞死亡方式在心肌梗死中的潜在作用引起人们的极大关注。本研究旨在探讨钙及钙调蛋白(calmodulin,CaM)是否参与心肌梗死中心肌细胞铁死亡,并对其作用机制进行深入研究。我们使用CCK-8和碘化丙啶(propidium Iodide,PI)染色检测细胞活性;通过分光光度法测量心肌丙二醛(malondialdehyde,MDA)及还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;通过Western印迹检测蛋白质的表达,结果显示,大鼠心肌细胞(H9c2)在遭受缺氧(hypoxia)损伤时,细胞的活性、GSH含量以及SLC7A11和GPX4的表达均显著降低,细胞的死亡率、MDA含量显著增加,但给予铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)和铁螯合剂Deferoxamine(DFO)处理后发现,缺氧损伤被明显抑制;同时,缺氧导致H9c2细胞内Ca^(2+)浓度增加、钙调蛋白及其Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)家族包括CaMKII和CaMKIV表达水平增加;使用CaM拮抗剂Calmidazolium chloride(CCL)或CaM-siRNA均能明显抑制缺氧诱导的心肌细胞铁死亡。此外,L型电压型依赖钙通道(L-type voltage-dependent calcium channel,LVDCC)阻滞剂维拉帕米(verapamil)的加入可以明显抑制缺氧导致的H9c2细胞中铁过载。最后,心肌梗死动物模型证明,心肌梗死损伤中CaM蛋白表达上调,CaM拮抗剂CCL在铁死亡介导的心肌梗死损伤中发挥作用。本研究揭示了Ca^(2+)/CaM通过调控LVDCC可能作为抑制铁死亡的新靶点,对铁死亡及其抑制剂机制的深入探索,有望将铁死亡确定为心肌梗死损伤的新型诊断和治疗靶点。

细胞外液成分对耐钙心肌细胞急性分离及电生理记录的影响

目的探讨细胞外液成分对获取适于电生理研究的耐钙心室肌细胞及对L-型钙通道电流(ICa-L)、延迟整流钾电流(IK)记录的影响。方法家兔心室肌细胞急性分离采用Langendorff灌流装置及酶解分离技术,心脏灌流前实验组细胞外液为正常台氏液,对照组细胞外液为无钙台氏液,观察细胞外液中的钙离子对获取适于电生理记录的单个耐钙心肌细胞的影响;应用全细胞膜片钳技术,实验组分别以含BaCl2的台氏液及N-甲基-D-葡萄糖胺(NMDG)溶液作为细胞外液记录ICa-L及IK,对照组为正常台氏液。结果与对照组相比较,实验组心室肌细胞存活率和耐钙心肌细胞存活率均明显升高(71%±9.7%vs55%±10%;52%±7.9%vs39%±11%,n=10,P<0.05);实验组引出的ICa-L峰值电流大于对照组,且幅值稳定;实验组IK时间依赖性外向电流及尾电流随去极化时间延长增大作用更明显(1.39±0.05pA/pFvs0.53±0.14pA/pF;0.74±0.09pA/pFvs0.39±0.13pA/pF,n=10,P<0.05)。结论细胞外液中的钙离子有助于获取耐钙心肌细胞,以含BaCl2的台氏液及NMDG溶液作为细胞外液易于获得典型而稳定的ICa-L及IK。

MCI-154对大鼠心肌细胞的变力作用(英文)

钙增敏剂具有正性肌力作用,同时不增加细胞内钙浓度,因此可避免导致心律失常和最终心肌细胞死亡的钙超载。然而大部分钙增敏剂对心肌舒张功能有损害作用。MCI-154是一种钙增敏剂,但不损害舒张功能。为阐明其变力作用机制,我们应用离子成像技术研究了MCL-154对分离的单个大鼠心室肌细胞钙瞬变和收缩的影响,利用膜片钳技术观察了MCL-154对大鼠心室肌细胞L-型钙电流和Na^+/Ca^(2+)交换电流的影响。结果表明:(1)MCI-154在1μmol/L至100μmol/L的浓度范围内对L-型钙电流(I_(Ca-L))无直接影响;(2)MCI-154在轻微增加钙瞬变幅度和缩短心肌钙瞬变TR_(50)和TR_(90)的情况下,呈剂量依赖性地增加大鼠心室肌细胞的缩短;(3)MCI-154剂量依赖性地增加正常大鼠心室肌细胞的Na^+/Ca^(2+)交换电流。这些结果提示:MCI-154不仅剂量依赖性地发挥了正性变力作用,对舒张功能也没有损害作用,明显不同于其它钙增敏剂,而且还轻微改善了大鼠心室肌细胞的舒张。其对内向Na^+/Ca^(2+)交换电流的激动作用会加快钙内流,导致TR_(50)和TR_(90)的缩短,提示MCI-154是通过正向Na ^+/Ca^(2+)交换改善舒张功能的。

兔心肌梗死后心室肌细胞钙电流变化及比索洛尔的影响

目的 本研究观察心肌梗死(myocardialinfarction ,MI)后3周,兔心室肌细胞L型钙电流(ICa L)的改变及比索洛尔的影响。方法 采用Langendoff灌流法获得单个心室肌细胞,利用膜片钳技术全细胞记录模式,记录心室肌细胞L型钙电流(ICa L)。结果 本实验记录了3组心室肌细胞的ICa L的电流的变化。MI组ICa L电流峰值显著高于伪手术组(Sham组) (2 19±0 84)nAvs (1 5 7±0 5 6)nA ,(P <0 0 5 ) ,比索洛尔组(βB组) (1 78±0 5 3 )nA与Sham组间无显著差异。但经膜电容标化后,ICa L电流密度3组间无显著差异[MI组(12 60±3 74)pA pF、βB组(12 5 7±2 69)pA pF、Sham组(12 49±4 2 1)pA pF] ,Ⅰ～Ⅴ曲线呈典型“铃型”曲线。结论 比索洛尔可减轻MI非梗塞区心室肌细胞ICa L的变化。

尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞离子通道的影响

目的:基于膜片钳技术探讨尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞I Ca-L离子通道的影响。方法:通过对各组I Ca-L电流密度的峰值的变化、不同去极化水平电流密度的改变,I-V曲线、激活曲线以及失活曲线的变化等证明心肌缺血再灌注损伤发生后心肌细胞离子通道发生变化,尖叶假龙胆含药血清干预后能够改变离子通道的变化。制备尖叶假龙胆含药血清。选取大鼠H9c2心肌细胞株,建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,实验分为空白组、模型组、尖叶假龙胆含药血清高、中、低剂量组,应用膜片钳技术观察尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞I Ca-L离子通道的影响。结果:与模型组比较,尖叶假龙胆含药血清各剂量组能够升高损伤后不同去极化水平电流密度(P<0.05),下移I-V曲线,降低激活与失活半电压值,使激活曲线发生左移,失活曲线发生右移。结论:尖叶假龙胆可能通过影响L型钙离子通道稳定心肌细胞的电生理活动,对心肌缺血再灌注损伤心肌产生保护作用。

冬虫夏草对豚鼠心室肌细胞胞浆钙离子浓度及L-型钙电流的影响

目的 研究冬虫夏草 (Codycepssinensis,CS)水提液对豚鼠单个心室肌细胞胞浆内钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)及L 型钙电流 (ICa L)的影响。方法 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用激光扫描共聚焦显微镜联合全细胞膜片钳技术测定豚鼠心室肌细胞 [Ca2 + ]i以及ICa L的变化。结果 应用 0 1mg/mL (生药浓度 )冬虫夏草水提液 ,在静息状态下对 [Ca2 + ]i 无影响 ;对 6 0mmol/LKCl诱导的胞浆 [Ca2 + ]i升高有促进作用 ,峰值荧光强度在 12 0s时由12 0 4 3± 2 38 4增加至 185 5 2± 32 1 0 (n =6 ,P <0 0 5 )。膜片钳研究结果表明 ,冬虫夏草水提液可明显促进ICa L,使ICa L从 (- 15 1± 2 3)pA/ pF增加到 (- 19 7± 3 2 ) pA/pF (刺激电压为 10mV ,n =8,P <0 0 1)。 结论 冬虫夏草水提液促进心肌细胞钙内流 ,是该药治疗缓慢型心律失常的机制之一。

木豆叶水提物对兔破骨细胞样细胞的形成及其骨吸收功能的影响

通过对骨髓单核细胞诱导分化形成的抗酒石酸酸性磷酸酯酶（TRAP）阳性多核巨细胞计数，研究了木豆叶水提物对1，25-二羟基维生素D3诱导兔骨髓单核细胞分化形成破骨细胞样细胞的影响．通过破骨细胞样细胞与骨片共培养的方法，用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝数目及表面积，研究了其对破骨细胞样细胞骨吸收功能的影响．结果表明，在0．01～100mg／L质量浓度内，木豆叶水提物能够剂量依赖性地抑制破骨细胞样细胞的形成（P〈0．05），同时也明显抑制破骨细胞样细胞的骨吸收活性（P〈0.05），具体袁现在，与对照组比较，其骨吸收陷窝数目和表面积明显减少，但没有呈现出质量浓度依赖性，木豆叶水提物对破骨细胞样细胞骨吸收指数的影响的结果给予了进一步的证实．这提示木豆叶水提物对骨质疏松症患者可能有一定的疗效．

用固定化L-赖氨酸脱羧酶细胞制备1,5-戊二胺

研究了4种固定化蜂房哈夫尼菌(H.alveiAS1.1009)菌体细胞的材料和方法,包括海藻酸钙包埋法、半透膜透析袋法、海藻酸钙-明胶交联包埋法和明胶包埋法。其中海藻酸钙包埋法稳定性最好,该方法最优转化条件为:在ρ(海藻酸钠)=30g/L的水溶液中,最适菌体质量浓度为ρ(菌体)=30.8g/L,100mL转化液中海藻酸钙球体体积为30mL,转化最适温度为37℃,最适pH=5.0。用该方法转化测得比酶活可达1028.9U。重复性佳:第一批固定化细胞酶活可达游离菌体的98.62%,第四批可达第一批酶活的38.68%。

苯磺隆在成都地区诱导甘蓝型油菜雄性不育效果研究

通过苯磺隆、唑嘧磺草胺、精喹禾灵和烟嘧磺隆4种化学药物对甘蓝型油菜骨干自交系99-35和09QB48-54在成都地区的杀雄效果研究表明：当油菜主花序最大花蕾长度约1.50~2.00 mm,用苯磺隆第1次叶面喷施,隔10 d左右再第2次喷施,每次单株受药量15~20 m L,浓度为0.05~0.10μg/m L的苯磺隆时,可诱导群体全不育株率100%,且不产生药害,并能保持整个花期雄性不育;每次单株受药量8~10 m L浓度为0.30μg/m L苯磺隆时,可诱导群体不育株率90%以上,但结实率受到一定影响;0.30μg/m L浓度的苯磺隆涂茎二次,可诱导群体全不育株率91.16%;唑嘧磺草胺、精喹禾灵和烟嘧磺隆在本试验中没有杀雄效果。

重庆主推油蔬两用油菜品种适宜性分析

【目的】对比分析重庆主推油菜品种的油蔬两用适宜性,为其大面积推广应用提供参考依据。【方法】以17个油菜品种为材料,采用田间小区控制试验,分品种分阶段采摘菜薹,调查各品种农艺性状及菜薹、菜籽产量,并分析菜薹营养品质、适口性及综合经济效益等。【结果】不同油菜品种的菜薹产量、菜籽产量、总产值及营养品质和适口性存在一定差异。其中以中油杂11鲜菜薹产量最高,达2498.75 kg/ha,比对照增产1.3%;德新油59菜籽产量及总产值最高,达2516.26 kg/ha和20950.47元/ha,分别高出对照43.1%和16.7%;先油188、德新油49、天油97和中油杂11营养品质较好;17个油菜品种菜薹口感清脆、无苦味,均可作为可口的时令蔬菜食用。【结论】中油杂11、德新油49、先油188、鼎油杂3号、德新油59、南油12和新宇油7号综合表现较好,油蔬两用适宜性高于对照品种油研10号,可作为油蔬两用品种在重庆地区推广应用。

氯沙坦对静态牵张刺激导致肥大心室肌细胞中L型钙离子通道表达的影响

目的探讨氯沙坦对静态牵张刺激导致的肥大心室肌细胞中L-型钙离子通道Cav1.2亚基及其蛋白表达的影响。方法 1d龄SD乳鼠,采用胰酶消化法分离获得心室肌细胞分为对照组、静态牵张组、氯沙坦组、静态牵张+氯沙坦组。定量分析细胞蛋白/DNA比值、BNP及细胞面积以鉴定牵张有效性。实时荧光定量PCR检测Cav1.2的mRNA水平;蛋白质印迹法检测Cav1.2蛋白表达水平。结果静态牵张刺激导致心室肌细胞蛋白/DNA比值,BNP基因表达,心室肌细胞面积增大。静态牵张刺激导致心室肌细胞Cav1.2mRNA及蛋白表达水平下调,氯沙坦干预该效应。结论氯沙坦可以抑制静态牵张刺激导致的心室肌细胞Cav1.2基因及蛋白水平的低表达。

采后钙处理对小油菜贮藏品质与抗氧化能力的影响

以白菜型油菜(Brassica campestris L.,品种"五月慢",俗称小油菜)为材料,以CaCl2溶液为钙源,研究Ca2+处理对小油菜贮藏品质与抗氧化能力的影响。结果表明,浓度为0.3%的Ca2+能够有效地抑制小油菜的黄变和腐烂,提高其总抗氧化能力并延长了贮藏期。

番木瓜丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类抗病基因同源序列的克隆与特征分析

根据丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类抗病基因产物催化结构域Ⅰ和Ⅸ的氨基酸保守序列设计简并引物,PCR扩增番木瓜叶片基因组DNA和cDNA。在NCBI中用BlastX比对发现,5个来自基因组DNA的克隆和4个来自叶片cDNA的克隆可能编码的氨基酸残基序列属于STK蛋白激酶类抗病基因同源序列片段和受体样蛋白激酶基因的同源片段,命名为gPK1-gPK5和cPK1-cPK4,在GenBank注册得到序列号分别为AY693385-AY693389,AY738762-AY738765。除克隆gPK5含有内含子之外,其它都发现了连续阅读框ORF。通过分析除Gpk5之外的8个克隆可能编码氨基酸序列中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶类蛋白激酶的9个催化保守结构域Ⅰ-Ⅸ,并利用ClustalW软件对8个克隆和已报道的抗病蛋白水稻Xa21和西红柿Pto氨基酸残基序列进行分子系统进化树分析发现,8个克隆不仅是受体样蛋白激酶基因的同源片段而且是抗病候选基因片段。

华南种植冬性半冬性甘蓝型油菜的可行性研究

本文通过对101个冬性、半冬性的甘蓝型油菜材料在湛江引种试验，以及2个年度的品种比较试验材料进行生态适应性分析研究，结果表明：冬性、半冬性甘蓝型油菜，在湛江也有正常的物候期和生长发育期，农艺性状表现良好，参试品种均能正常开花结籽，2006—2007年度的产量为1238—1944kg／hm^2，2007-2008年度的产量为1350—1951kg,／hm^2然而，湛江冬季气温帮达不到阶段发育学说认为冬性、半冬性甘蓝型油菜所需要通过春化阶段的低温，这表明了冬性、半冬性的甘蓝型油莱品种通过春化阶段也可以不需要严格的低温，因此，华南的生态气候条件可以种植甘蓝型油菜。

中国会计准则、制度与国际财务报告准则下利润报告的差异研究——对B股上市公司2002年年报的分析

本文以沪、深两市B股上市公司2002年度报告披露的会计数据为依据,对根据我国会计准则、制度计算的净利润与根据国际财务报告准则计算的净利润之间的差异进行实证研究。目的是探讨我国会计准则、制度和国际财务报告准则之间目前存在哪些差异,这些差异是否会导致利润的高估或低估以及影响程度。