基于CRISPR/Cas9技术构建PAX3-FOXO1融合基因敲除腺泡状横纹肌肉瘤细胞模型

目的使用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除PAX3-FOXO1融合基因的人腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS)细胞系(RH30),并验证PAX3-FOXO1功能。方法运用在线网站针对PAX3、FOXO1设计sgRNA,选择切割效率最高的一组构建LV-PAX3-sgRNA、LV-FOXO1-sgRNA及LV-Cas9慢病毒载体;LV-Cas9病毒感染RH30细胞,潮霉素筛选后,通过RT-PCR及qRT-PCR检测RH30-Cas9细胞中Cas9基因表达;LV-PAX3-sgRNA及LV-FOXO1-sgRNA慢病毒载体分别感染RH30-Cas9细胞,流式分选筛选荧光阳性细胞;Sanger测序、PCR等分别验证RH30-PAX3-KO细胞及RH30-FOXO1-KO细胞中PAX3-FOXO1表达;EDU、TUNEL、Transwell实验检测敲除RH30-PAX3-KO细胞及RH30-FOXO1-KO细胞功能改变。结果成功构建靶向PAX3、FOXO1的CRISPR/Cas9慢病毒载体;PCR验证稳定表达Cas9的RH30细胞系(RH30-Cas9)构建成功;PCR、Western Blot验证靶向PAX3或FOXO1均成功敲除RH30中PAX3-FOXO1融合基因;靶向PAX3或FOXO1抑制RH30细胞增殖、侵袭、迁移,促进凋亡。结论使用CRISPR/Cas9成功构建敲除PAX3-FOXO1的RH30细胞系;敲除PAX3-FOXO1抑制了RH30细胞增殖、迁移等恶性生物学行为。

血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA15-3在肺癌患者中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 探讨血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA15-3在肺癌患者中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 将80例肺癌患者作为A组,同期选择80例肺部良性病变患者和健康体检人群作为B组、C组。采集静脉血进行检测,对比血清标志物水平。结果 各组肿瘤标志物水平比较结果为:A组>B组>C组。肺癌患者的血清肿瘤标志物水平在病理特征为低、中分化;有淋巴结转移及Ⅲ-Ⅳ期明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson结果显示,血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA15-3水平与淋巴结转移、TNM分期呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 肺癌患者的血清CEA,CYFRA21-1,CA15-3水平明显不同于健康人群,可作为肺癌跟踪、良恶性鉴别及病情评估等指标,具有重要作用。

Zn对挤压态Mg-3Sn-1Ca合金耐蚀性的影响

目的 提高挤压态Mg-3Sn-1Ca合金的耐腐蚀性能。方法 通过合金熔炼制备了Mg-3Sn-Ca(TX31)和Mg-3Sn-Ca-Zn(TXZ311)两种挤压态合金,利用XRD、金相、SEM、EDS、EBSD、析氢、电化学极化曲线和阻抗谱,分析了TX31和TXZ311两种合金的微观组织及耐腐蚀性能。结果 XRD和EDS结果表明,挤压态TX31和TXZ311两种合金中第二相均为CaMgSn相,TXZ311合金中由于Zn的添加,CaMgSn相增加且分布更加均匀。金相和EBSD结果表明,Zn的添加可以提高TX31合金的动态再结晶程度和{0002}基面织构强度,改善TX31合金中组织的不均匀性。从极化曲线上可得,腐蚀电位和腐蚀电流分别为-1.57V和6.95×10^(-5)A。添加Zn后,腐蚀电位升高(-1.49 V),腐蚀电流减小(1.02×10^(-5)A),表明合金耐蚀性提高。对比两种合金阻抗谱可发现,TXZ311合金具有比TX31合金更大的容抗弧,表明其表面的电荷转移电阻和表面膜的电阻最高,动态腐蚀过程中氧化产物膜具有较好的稳定性,有效阻碍了α-Mg基体的腐蚀。TX31合金析氢量和时间成正比,腐蚀速率为3.7mm/a。而TXZ311合金腐蚀速率仅为1.6mm/a,析氢量在腐蚀12 h后明显降低,表明合金表面形成了可以阻碍腐蚀进行的氧化膜。结论 Zn元素可以极大提高TX31合金的耐蚀性。这是由于添加Zn元素后,TXZ311合金腐蚀膜层间的黏附力增加,动态再结晶程度增高,晶粒组织更加均匀,{0001}基面织构强度增加。因此,TXZ311合金的耐蚀性远高于TX31合金。

Ca_(1-x)Sr_xZrO_3陶瓷固溶体的制备、表征及介电性能

采用草酸盐共沉淀法,以氯化钙、氯化锶、氧氯化锆和草酸为原料成功地制备了Ca1-xSrxZrO3系列陶瓷固溶体.利用TGDTA和XRD等手段分析了Ca1-xSrxZrO3前驱体的热分解过程并确定了形成结晶相的温度.结果表明:在1000℃以上煅烧前驱体可获得立方相的Ca1-xSrxZrO3完全固溶体,晶体的晶格常数变化规律符合Vegard定律;将经过1100℃煅烧的Ca0.8Sr0.2ZrO3粉体干压成型并在1450℃烧结后,所得瓷体的相对密度和平均晶粒尺寸分别达到93.0%和0.7μm;当Sr2+在固溶体中的比例(x)为0.2时,Ca1-xSrxZrO3陶瓷在10MHz高频下室温介电常数达到最大27.6.

Exendin-4及内源性GLP-1对大鼠海马CA3区神经元自发放电的调控

目的探究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂Exendin-4及内源性GLP-1对海马CA3区神经元自发放电的调控作用。方法利用在体细胞外单细胞电生理记录方法,观察三管微电极微压力注射10μmol/L Exendin-4和10μmol/L Exendin-9-39(GLP-1受体阻断剂)对大鼠海马CA3区神经元自发放电频率的影响。结果在记录到的22个海马CA3区神经元中,Exendin-4使17个神经元放电频率显著增高(t=6.286,P<0.01),平均升高(149.67±18.94)%,与生理盐水组相比差异有显著性(Z=3.571,P<0.01)。在记录到的14个海马CA3区神经元中,Exendin-9-39使10个神经元放电频率显著降低(t=7.968,P<0.01),平均降低(61.90±6.10)%,与生理盐水组相比差异有显著性(Z=3.145,P<0.01)。结论Exendin-4兴奋海马CA3区神经元,内源性GLP-1参与调节海马CA3区神经元自发放电。

Ca_(1-x)Zn_xTiO_3∶Pr^(3+),R^+(R^+=Li^+,Na^+,K^+,Rb^+,Cs^+,Ag^+)的合成和发光性质

采用X射线衍射、荧光光谱和热释发光研究了Ca1 -xZnxTiO3∶Pr3+ ,R+ 的物相组成和发光性质。Pr3+ 取代Ca2 + 形成PrCa·正电性缺陷发光中心。激发光谱是峰值位于 3 3 0nm附近的宽带谱 ,发射光谱是峰值在 613nm半宽度为 2 0nm的带谱 ,对应Pr3+ 的1 D2 -3H4 跃迁发射。发光强度和余辉随基质组分Zn/Ca摩尔比和合成温度而变化。Zn2 + 的最佳含量在 10 %～ 2 0 %。X射线衍射研究表明掺入适量的Zn2 + 物相组成为CaTiO3,Ca2 Zn4 Ti1 5O36 和Zn2 TiO4 。热释发光曲线表明掺入Zn2 + 离子后体系中形成了新的缺陷ZnTi″ ,且ZnTi″的缺陷陷阱深度大于RCa′。

Wistar大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回区的解剖分割

目的:在体视显微镜下分割Wistar大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回(DG)区。方法:24只健康Wistar大鼠,分组如下:①6只大鼠取脑后硫堇染色,观察海马各区细胞形态;②6只大鼠分离出海马,体视显微镜下观察海马形态并分割CA1区、CA3区和DG区,各区分别切片后硫堇染色;③12只大鼠检测海马各区HSP 70的表达。结果:①大脑冠状切片硫堇染色清晰显示出海马CA1区、CA3区和DG区;②体视显微镜下,在海马腹侧面,沿着CA1区和DG区之间的海马沟可分割开CA1区和DG区,沿着CA3区和DG区之间的裂隙可分割开CA3区和DG区;分割后的海马各区细胞形态结构与整体大脑冠状切片上相对应区域的细胞形态结构一致;③Western blot结果显示:与对照组相比,脑缺血组HSP 70的表达在海马CA3+DG区明显上调、而在CA1无明显变化,这一结果与免疫组织化学结果一致。结论:上述方法可比较明确地分割Wistar大鼠海马CA1区、CA3区和DG区,分割得到的各区组织可用于蛋白质表达的检测。

复合氧化物Ca_(1-x)Pb_xMnO_(3-σ)的合成及其电化学性能研究

采用共沉淀法制得Ca1 -xPbxMnO3 -σ的XRD测试结果表明该样品具有钙钛矿结构 ,利用X射线光电子能谱(XPS)对Ca0 9Pb0 1 MnO3 -σ样品中各元素的价态进行了鉴定 ,结果表明各元素分别以Ca2 +,Pb4+,Mn4+以及少量的Mn3 +的形式存在 .四探针电导率测试结果发现Ca0 9Pb0 1 MnO3 -σ的电导率比无取代CaMnO3 -σ样品的电导率提高了将近两个数量级 .并且半导体的类型发生了变化 .在碱性溶液中Ca0 9Pb0 1 MnO3 -σ表现出良好的电化学性能 ,在 9mol LKOH电解质溶液中 ,5 0mg样品采用 2mA放电至 - 0 8V时放电容量为 384mA·h g左右 .

5-羟色胺在大鼠海马CA1、CA2、CA3脑区的分布与表达

目的通过观察5-羟色胺(5-HT)在海马神经环路的分布和表达,为研究5-HT参与学习记忆的作用机制提供形态学依据。方法采用免疫组织化学技术观测抗5-HT的抗体阳性神经元在海马CA1、CA2和CA3区的分布特征。结果①抗5-HT的抗体在海马CA1、CA2和CA3的细胞中广泛分布。②海马中分子层阳性细胞数较少,排列不规则。锥体层细胞从内到外排列整齐,密集成带,染色强烈。多形层细胞染色细胞散在分布。③空白对照切片未见抗5-HT抗体的阳性神经元胞体。结论 5-HT在大鼠海马分布广泛,可能参与了海马学习记忆有关的过程。

La_(2/3)Ca_(1/3)MnO_3薄膜结构与输运性质

用磁控溅射方法在不同单晶衬底材料上制备了一系列含La2/3Ca1/3MnO3(LCMO)薄膜。当薄膜厚度大于200?,在我们实验条件下可观测到金属-绝缘体转变,且转变温度随厚度和衬底材料而变化。渗流电阻模型被用来解释薄膜材料的电输运特性,结合薄膜外延特性(晶格失配)和薄膜与衬底的相互作用,及薄膜表面、界面粗糙度的测量可知薄膜的剩余电阻、极化子的激活能、金属-绝缘体转变温度等密切与薄膜质量相关。

NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达

目的探讨NMDA受体NR1、NR2A/B在丘脑前核-海马CA1、CA3脑区和齿状回的分布与表达,以及丘脑前核-海马神经元的学习记忆功能及作用机制。方法运用原位杂交检测技术观测丘脑前核及海马CA1、CA3和齿状回内NMDA受体NR1、NR2A及NR2B mRNA的分布特点。结果①原位杂交阳性产物呈棕黄色,主要分布在神经元的胞浆中,胞核基本不着色。②在丘脑前核,阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致。③在海马锥体层阳性神经元分布较多,呈带状。在分子层、多形层分布少。④NR1、NR2A/B在丘脑前核和海马CA1、CA3脑区及齿状回均有表达,其中NR1在齿状回表达水平最强,NR2B在丘脑前核、海马CA1、CA3和齿状回表达水平基本相同。结论在丘脑前核-海马的局部神经元环路中NMDA受体NR1、NR2A及NR2B mRNA分布广泛。其中NR2B mRNA在丘脑前核和海马CA1、CA3脑区及齿状回表达水平基本相同,可能与此环路学习记忆有关。

La_(0.67)Ca_(0.33)Mn_(1-x)Al_xO_3体系的结构和输运特性研究

研究了Al离子的Mn位替代对巨磁阻材料La0.67Ca0.33MnO3体系的结构和输运特性的影响。结果表明,随Al3+替代量的增加,在整个替代范围内,晶胞体积表现出单调减小的规律。体系的电阻率急剧增加,绝缘体 金属转变温度TIM向低温方向移动,且与Al3+替代量存在线性关联。对少量Al3+替代量,在T>TIM的高温区域体系的输运特性满足热激活模型,在T<TIM的低温区域满足金属输运行为。这种输运行为随Al3+替代的变化特征,可从Al3+对Mn3+-O2--Mn4+双交换通道的破坏和所导致的晶格畸变方面给予解释。Al3+替代改变了电子的局域环境,进而影响到体系的输运行为。

Ca掺杂的LiNi_(1/3)Co_(1/3)Mn_(1/3)O_2正极材料及其电化学性能研究

为探讨Ca的掺杂对LiNi_(1/3)Co_(1/3)Mn_(1/3)O_2材料结构和电性能的影响,以草酸为沉淀剂,以不同含量Ca对LiNi_(1/3)Co_(1/3)Mn_(1/3)O_2进行掺杂改性,并通过X射线衍射(XRD)对产品进行表征,探讨了不同Ca含量样品的电化学性能.结果表明:大量Ca掺杂生成明显Ca O杂相,而少量Ca掺杂则能顺利进入材料晶格之中.随着Ca掺入,晶体类型不变,但c轴略收缩,形成更紧密的结构.充放电显示Ca在低倍率(2.5~4.3 V,0.5 C)时,能一定程度提高材料的循环性能;但在高倍率(2.5~4.3 V,5 C)时,能明显提高容量和循环性能.充放电曲线同时显示未掺杂的材料高倍率下极化严重,放电平台严重降低;而Ca掺杂的材料极化状况则不明显,说明Ca掺杂能抑制极化并提高电化学性能.

大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区Caspase-3的表达及细胞凋亡的动态变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元Caspase-3的表达及细胞凋亡指数的动态变化。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组。模型组又分为脑缺血再灌注后0,0.5,2,6,24,72,120 h 7个亚组。采用4-VO阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学染色法及原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)分别观察大脑海马CA1区神经元Caspase-3的表达及细胞凋亡指数。结果假手术组海马CA1区神经元Caspase-3蛋白有少量表达。和假手术组相比,模型组大鼠在脑缺血再灌注后0 h、0.5 h海马CA1区神经元Caspase-3表达无明显变化(P>0.05),再灌注后2 h开始升高(P<0.05)、24 h达高峰(P<0.05),之后逐渐下降,再灌注后120 h仍高于假手术组(P<0.05)。细胞凋亡指数的变化趋势与Caspase-3的表达变化相一致。结论脑缺血再灌注可诱导凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,进而导致细胞凋亡。细胞凋亡在脑缺血再灌流损伤中呈动态过程,是神经细胞死亡的重要形式。

蓝光激发白光LED用深红色荧光粉Ca_(1-x-y)WO_4∶xPr^(3+),yLi^+的制备与表征

用高温固相法合成了用于白光LED的Ca1-x-yWO4∶xPr3+,yLi+红色荧光粉。用XRD、SEM和荧光分光光度计,对试样的晶体结构、表面形貌和发光性能进行表征。所合成的样品为四方晶系。经预先球磨的样品颗粒比较均匀,粒径较小。荧光粉的激发峰位于440～500 nm的宽带内,主要发射峰位于602,620,651 nm,对应于Pr3+的1D2→3H4、3P0→3H6和3P0→3F2特征跃迁发射,651 nm处的强度最大。同时还研究了Pr3+、Li+的掺杂浓度以及助熔剂的加入对样品性能的影响。实验结果表明,所合成的Ca1-x-yWO4∶xPr3+,yLi+是可用于蓝光芯片激发的白光LED用红色荧光粉。

Sr^(2+)置换改性Ca_(0.25)(Li_(1/2)Sm_(1/2))_(0.75)TiO_3陶瓷的微波介电性能研究

采用固相法制备了(Ca1-xSrx)0.25(Li1/2Sm1/2)0.75TiO3(CSLST-x)(x=0～1/10)系列微波介质陶瓷材料,研究不同含量的Sr2+含量对该体系的相组成、烧结性能和微波介电性能影响。在x=1/22～1/10范围内,Sr2+的掺杂不会改变晶体的结构;在1175～1200℃烧结时,相同烧结温度下随着Sr2+含量的增加,介电常数εr增大,无载品质因数与谐振频率乘积Qf值降低;置换离子Sr2+的添加使该体系的烧结温度降低了近200℃,并保持良好的微波介电性能。其中,x=1/16的CSLST陶瓷在1200℃烧结,保温5h时具有较好的微波介电性能:εr=97.2,Qf=2490GHz,τf=14.74ppm/℃。

六味地黄丸对老年大鼠行为学的影响及对海马CA1区、CA3区和S1Tr神经元的保护作用

目的观察六味地黄丸对老年大鼠行为学的影响及对海马CA1区、CA3区和S1Tr神经元的保护作用。方法将清洁级雄性SD大鼠分为青年对照组(3月龄)、老年对照组(24月龄)和老年用药组(24月龄),通过Morris水迷宫实验,观察其行为学变化,并通过尼氏染色光镜检测,观察大鼠海马CA1区、CA3区及大脑皮质初级躯体感觉皮质区(S1Tr)脑组织细胞数量变化。结果老年用药组平均逃避潜伏期自第三天起较老年对照组明显缩短,有极显著性差异(P<0.01)。老年用药组锥体细胞轮廓清晰,形态完整,细胞排列紧密,可见少许突起,其细胞数量明显增多,与老年对照组相比,有极显著性差异(P<0.01)。结论六味地黄丸可以改善自然衰老大鼠空间学习记忆能力,机制可能与其保护海马CA1区、CA3区及S1Tr神经元有关。

(Ca(1-x-y)Lu_y)MoO4：xEu^3＋红色荧光粉的化学共沉淀合成与光致发光

使用NH4HCO3-NH3.H2O混合沉淀剂,采用化学共沉淀法合成(Ca1-x-yLuy)MoO4:xEu3+红色荧光粉,通过XRD、EDS、荧光光谱和CIE色度图研究该荧光粉的晶体结构、成分组成及发光性能。结果表明,实验按照理论化学计量比成功合成了(Ca1-x-yLuy)MoO4:xEu3+红色荧光粉,该荧光粉为CaMoO4白钨矿结构;(Ca1-x-yLuy)MoO4:xEu3+具有7F0→5L6(394 nm)和7F0→5D2(465 nm)的强电子吸收,且在613 nm处可发射高强度红光,其色坐标为(0.666 5,0.332 9),明显优于传统的Y2O2S:Eu3+红色荧光粉;此外,当Lu含量为30mol%时,荧光粉发光强度最佳。

稀土空位锰氧化物(La_(1-x-y)Y_y)_(2/3)Ca_(1/3)MnO_3的结构和输运性质

用固相反应法制备了La（1-x）2/3Ca1／3MnO3（V-LCMO）和（La（0.7-x）Y0.3）2／3Ca1／3MnO3）（V—LYCMO）（x=0，0．02，0．04，0．08，0．10）系列La空位锰氧化物样品。X射线衍射（XRD）分析表明：所有的样品均为单相，具有正交对称性（Pnma）。La（1-x）2/3Ca1／3MnO3系统和（La（0.7-x）Y0.3）2／3Ca1/3MnO3系统的晶格参数以及Mn-O键长和Mn-O-Mn键角随La空位浓度不同而改变，说明在室温系统中存在Jahn-Teller效应。对于V-LYCM0系统，其晶格参数、Mn-O键长和Mn-O-Mn键角都比V-LCMO相应的值更小，这可能与离子半径小的Y^3＋部分替代La^3＋导致更大的晶格畸变有关。V—LCMO系统随着空位浓度的增大，绝缘体一金属的转变温度TMI几乎不变。在x=0．04时MR值在温度TMI处达到最大值，约为220％（8T）。而对V—LYCMO系统，其转变温度TMI约为50K，在温度40～50K左右最大的磁电阻值超过10^6％。认为很大的磁电阻效应与用离子半径小的Y部分替代离子半径大的La有关，它会破坏双交换作用，从而导致Jahn-Teller效应。

纳米钙钛矿型Ca_(1-x)Bi_xMnO_(3-δ)的合成及其作为可充碱性电池阴极材料的可行性研究

采用共沉淀合成法制备了Bi不同取代量的纳米Ca1-xBixMnO3 -δ,其中烧结温度由TG DTA测试确定 .用原子吸收对其进行了分组分析 ,采用XRD ,TEM对其结构和晶粒的大小及形貌进行了分析 ,并与高温固相法和硬脂酸法制备样品进行比较 .结果表明 ,Bi取代量的不同 ,所得样品的物相也随之发生变化 .但不同制备方法所得样品的物相相同 ,晶粒的平均粒径不同 ,但均属纳米级 .当在碱性溶液 ( 9mol/LKOH)中进行充放电性能测试时发现 ,取代量x =0 .l时Ca1-xBixMnO3 -δ的放电容量为 3 80mAh/g ,与同等条件下国际一号样 (MnO2 )的放电容量 2 48mAh/g相比 ,提高了 5 3 % .在充放电实验中 ,电极的可充性能比国际一号样及无取代的CaMnO3 -δ有很大的提高 .因此有希望作为可充电池阴极的活性材料 .