目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋...目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM+PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Mor-ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i变化,Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与PTZ组比较,NIM+PTZ组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]i下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM可以降低细胞内[Ca2+]i,提高CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力。展开更多
目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca^2＋／calmodnlin．dependent protein kinaseⅡ，CaMKⅡ）与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1（nuclear factor of activation of cells-1，NFATc1）、抗酒石...目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca^2＋／calmodnlin．dependent protein kinaseⅡ，CaMKⅡ）与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1（nuclear factor of activation of cells-1，NFATc1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acidphos phatase，TRAP）基因表达的影响，探索其抑制破骨细胞分化的分子机制。方法将小鼠RAW264．7细胞分为A、B两组，每组均以5×10^3个／孔接种于直径为30mm的培养皿中培养。A组（对照组）在NF-κB受体激活蛋白配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）诱导下向破骨细胞形成，B组（唑来膦酸组）在RANKL诱导培养1d后加用1×10^-6mol／L唑来膦酸处理2d。应用免疫共沉淀co．immunoprecipitation，Co-IP）及反向Co-IP对CaMKⅡ与钙调蛋白的结合进行分析；应用蛋白质印迹法及免疫荧光细胞化学检测两组NFATc1、TRAP蛋白表达，并对破骨细胞生成进行评价。结果B组新生多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数和面积分别为（11．3±1．5）个、（8．7±2．1）个和（5034．4＋775．4）μm^2，均显著低于A组[分别为（37．7±5．7）个、（23．0±4．0）个和（15042．7±1906．0）μm^2]（P〈0．01）。Co—IP及反向Co—IP检测显示，B组CaMKII与钙调蛋白的结合较A组分别显著下降了59．8％和50．9％（P〈0.01）；在总蛋白中，B组钙调蛋白与CaMKll蛋白较A组，分别显著降低了52．1％和51．5％（P〈0．01）。NFATc1、TRAP蛋白水平B组较A组显著下降了52．4％和38．9％（P〈0．01）；免疫荧光化学检测也显示B组蛋白表达强度较A组弱。结论唑来膦酸可以显著抑制破骨细胞分化中CaMKⅡ与钙调蛋白的结合，并下调下游NFATc1、TRAP的蛋白表达。展开更多
文摘目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM+PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Mor-ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i变化,Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与PTZ组比较,NIM+PTZ组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]i下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM可以降低细胞内[Ca2+]i,提高CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力。
文摘目的分析钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ体内外的表达情况并探讨其机制,为临床诊断治疗提供新的靶点。方法采用半定量RT-PCR技术检测3种人结直肠癌细胞系、20对结直肠癌组织及其配对癌旁组织中CAMKⅡδmRNA的表达水平;利用Western Blot技术及免疫组化SP技术检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中CAMKⅡδ蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理参数进行分析。结果CAMKⅡδmRNA水平在3种结直肠癌细胞系中均有较高的表达,其中SW620表达最高,依次为HT-29、RKO。20对结直肠癌组织,有16对癌组织中CAMKⅡδmRNNA表达高于癌旁组织,其值分别是0.48±0.31和0.25±0.16,两者之间有统计学差异(P=0.002)。1 Western Blot的检测结果与RT-PCR的检测结果相一致,同样可以观察到CAMKⅡδ在配对的癌组织中的表达强于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化提示CAMKⅡδ在结直肠癌组织中免疫反应强阳性,而癌旁正常组织中表达明显减弱。20例结直肠癌组织标本中,CAMKⅡδ的阳性表达率为55%(11/20),明显高于癌旁正常组织的表达率20%(4/20)。(P=0.022)结论 CAMKⅡδ在结直肠癌细胞系及结直肠癌组织中高表达,提示可能促进肿瘤细胞的不断增殖,与直肠癌的发生发展密切相关。
基金supported by High School Science and Technology Fund Planning Project of Tianjin Municipality,China(No.20060206)the Scientific Research Fund of Tianjin Medical University,China(No.2011ky33)
文摘目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca^2＋／calmodnlin．dependent protein kinaseⅡ，CaMKⅡ）与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1（nuclear factor of activation of cells-1，NFATc1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acidphos phatase，TRAP）基因表达的影响，探索其抑制破骨细胞分化的分子机制。方法将小鼠RAW264．7细胞分为A、B两组，每组均以5×10^3个／孔接种于直径为30mm的培养皿中培养。A组（对照组）在NF-κB受体激活蛋白配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）诱导下向破骨细胞形成，B组（唑来膦酸组）在RANKL诱导培养1d后加用1×10^-6mol／L唑来膦酸处理2d。应用免疫共沉淀co．immunoprecipitation，Co-IP）及反向Co-IP对CaMKⅡ与钙调蛋白的结合进行分析；应用蛋白质印迹法及免疫荧光细胞化学检测两组NFATc1、TRAP蛋白表达，并对破骨细胞生成进行评价。结果B组新生多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数和面积分别为（11．3±1．5）个、（8．7±2．1）个和（5034．4＋775．4）μm^2，均显著低于A组[分别为（37．7±5．7）个、（23．0±4．0）个和（15042．7±1906．0）μm^2]（P〈0．01）。Co—IP及反向Co—IP检测显示，B组CaMKII与钙调蛋白的结合较A组分别显著下降了59．8％和50．9％（P〈0.01）；在总蛋白中，B组钙调蛋白与CaMKll蛋白较A组，分别显著降低了52．1％和51．5％（P〈0．01）。NFATc1、TRAP蛋白水平B组较A组显著下降了52．4％和38．9％（P〈0．01）；免疫荧光化学检测也显示B组蛋白表达强度较A组弱。结论唑来膦酸可以显著抑制破骨细胞分化中CaMKⅡ与钙调蛋白的结合，并下调下游NFATc1、TRAP的蛋白表达。
