大鼠结肠cajal细胞库容性Ca^(2+)内流检测的临床价值

目的:通过检测大鼠结肠cajal细胞中库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),探讨导致大鼠结肠cajal细胞内Ca2+稳态失衡的信号途径,为治疗相关疾病提供新的思路。方法:荧光探针Fu-ra-2/AM标记细胞内游离Ca2+后,用荧光分光光度计检测乙二醇-双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)耗竭胞内钙库后对分离的大鼠结肠cajal细胞Ca2+浓度([Ca2+])的影响。结果:在无Ca2+缓冲液中加入EGTA(10mmol/L),细胞内[Ca2+]由静息时的(69.37±3.02)nmol/L升高至(272.52±5.21)nmol/L;继之,向细胞外液中引入1.5mmol/L和3.0mmol/L的氯化钙溶液,导致细胞内Ca2+进一步升高为(466.43±4.63)nmol/L和(977.43±3.27)nmol/L;且此升高效应对维拉帕米(5μmol/L)不敏感,但可被2APB(20～100μmol/L)抑制。结论:酶解法并结合密度离心法分离的大鼠结肠cajal细胞上存在胞内钙库耗竭激活的Ca2+内流。这对于研究钙通道活性改变、预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化系统疾病具有重要意义。

PF-4促进脑胶质瘤细胞Ca^(2+)内流的实验观察

目的探讨血小板因子-4(platelet factor-4,PF-4)对脑胶质瘤细胞Ca2+内流的影响。方法脑胶质瘤细胞U251传代培养,分别加入浓度为0(对照组)、900 ng/ml、1200 ng/ml、1500 ng/ml的PF-4,继续培养24 h。利用LSCM测定经Fluo-3标记的脑胶质瘤细胞内Ca2+荧光强度。结果对照组脑胶质瘤细胞内Ca2+荧光强度为24.21±2.36;实验组脑胶质瘤细胞内Ca2+荧光强度分别为39.35±3.31,52.39±3.26,65.56±2.81。经单因素方差分析,各组间差异P<0.05。结论PF-4对脑胶质瘤细胞Ca2+内流有明显的促进作用。

STIM1和Orai1在骨肉瘤细胞HOS增殖和凋亡中的作用

目的探讨钙库操纵的钙内流(SOCE)组成蛋白STIM1和Orai1蛋白在骨肉瘤细胞系HOS增殖和凋亡中的作用。方法用shRNA干扰技术抑制STIM1和Orai1蛋白的表达。Western blot测定STIM1和Orai1的蛋白表达;激光共聚焦检测细胞Ca2+内流变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测HOS细胞的增殖能力;流式细胞技术检测HOS细胞的凋亡变化。结果与空白对照组和转染negative-shRNA的对照组相比,转染48 h后STIM1-shRNA组STIM1蛋白的表达均明显降低(P<0.01),Orai1-shRNA组Orai1蛋白的表达也明显降低。抑制STIM1和Orai1蛋白后,细胞Ca2+内流减少。转染24、48和72 h后,STIM1-shRNA组及Orai1-shRNA组HOS细胞的增殖能力明显下降(P<0.01)。流式细胞检测显示,与control组和negative-shRNA组相比,转染48 h后细胞的周期受到明显抑制,而凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论 STIM1和Orai1在骨肉瘤细胞HOS增殖中有重要作用,抑制STIM1和Orai1蛋白表达可以抑制HOS细胞增殖、促进凋亡。