柱前PITC衍生与反相高效液相色谱分析兔阑尾CaBP_(21)的氨基酸含量

应用Super Pac C18柱(125mm×4.0mm,3μm),建立了PTG-氨基酸的HPLC分析方法。衍生步骤快速、灵敏、简便。能有效地分析蛋白水解物中的各种一级、二级氨基酸。色谱系统检测灵敏(灵敏度可达40pmole以下),分析快速(18min)。方法线性响应、重复性均佳。应用此法首次确定了新发现的钙结合蛋白兔阑尾GaBP_(21)的氨基酸组份,证明它是一种与CaM相比组成不同、特征相似的钙结合蛋白。

反相高效液相色谱对CaBP_(21)的肽谱分析

对CaBP_(21),一种新发现的兔阑尾B淋巴细胞的钙结合蛋白,作手工Edman化学降解,结果表明其N末端封闭。取15nmole CaBP_(21)用溴化氰裂解,产物不经衍生,直接以RP-HPLC作肽谱分析。肽谱时间2h。得到两个BrCN肽解片段,其中C端片段可用作Edman顺序测定。同时证明了CaBP_(21)为相同亚基2聚体。