Oleosin与GUS融合蛋白基因的植物表达载体的构建及融合蛋白性质的预测

将油菜油脂蛋白Oleosin基因与报告基因GUS通过6个氨基酸编码的凝血酶识别位点(Gly-Val-Arg-Gly-Pro-Arg)连接起来,形成一个融合蛋白。其中编码区基因长2415bp,共编码804个氨基酸和一个终止密码子。使用蛋白质分析软件Antheprot.5.0和DNAstar对融合蛋白的理化特性,二级结构,潜在信号肽断裂位点,跨膜区进行分析表明:融合蛋白较好的保持了原来两个蛋白的理化特性和二级结构。将该融合基因克隆到中间载体pUC-121上,并用棉花LEA蛋白D-113基因启动子替换CaMV35S启动子,构建成植物表达载体pBI-LEA-O::G121。

籼稻蜡质基因5＇上游区与GUS基因编码区融合基因的构建和在水稻中的瞬间表达

为了鉴定水稻蜡质基因５＇上游区的顺式作用因子与研究它们在组织专一性表达中的作用，我们对籼稻品种２３２的蜡质基因５＇上游－１１５至－２１２０的区域进行了顺序测定，并将此基因的５＇上游区同报告基因ＧＵＳ构建成融合基因，用基因枪粒子轰击的方法将此融合基因导入水稻未成熟种子的幼胚和糊粉层细胞中，瞬间表达检测的结果表明，我们构建的融合基因中蜡质基因５＇上游区的长度已足以使ＧＵＳ基因在上述组织中表达。

采用GUS标记技术研究钙调素在转基因烟草中的分布

为了监测钙调素 (Ca M)在植物细胞内的分布并探索其生物学功能 ,将水稻 Ca M和 GU S融合基因 (cam.gus)分别置于 35 S启动子和花粉特异启动子 L AT5 2 - 7控制下 ,构建出载体 p MD/ Ca M.GU S和 p BI/ L AT.Ca M.GU S,转化烟草 (N icotiana tobacum cv.SR ) ,GU S染色结果显示 ,Ca M.GU S融合蛋白广泛分布于植物根、茎、叶等组织 ,根尖生长点细胞、根毛细胞、表皮毛细胞、气孔保卫细胞、维管束细胞的细胞质中融合蛋白含量较多。花粉粒中也分布着 Ca M,并在萌发沟处表现出较高的浓度。保卫细胞和表皮毛细胞中 Ca M分布在相邻细胞连接处细胞模内侧 ,呈现出极性分布。研究结果表明 ,细胞内 Ca M的不均匀分布可能与细胞功能相关。

GUS基因分泌型植物表达载体的构建及对烟草的转化

为了验证PR1B分泌肽对谜底蛋白的分泌和增强功能,以GUS基因为靶基因,成功构建了PR1B 和GUS融合基因的植物表达载体,通过三亲融合法转入LBA4404农杆菌,并对烟草进行了转化,在216株卡那抗 性植株中共获得2株GUS染色阳性植株。

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化水稻的研究

将口蹄疫O型抗原决定簇和A型抗原决定簇构成的融合基因O21O14A21经农杆菌介导转入粳稻品种日本晴中,经潮霉素筛选,获得再生植株207株.提取它们的总DNA进行PCR检测,其中193株扩增出和阳性对照相同的900bp和450bp两条带,转基因阳性率达93.2%,抽取部分阳性植株进行PCRSouthern杂交检测及报告基因GUS检测,同样证明融合基因已经整合到日本晴基因组中.

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点.本实验通过农杆菌介导的遗传转化,以O型和A型口蹄疫抗原决定簇基因O21O14A21转化胡萝卜.通过筛选,获得潮霉素抗性愈伤组织,经胚状体再生得到156棵抗性苗.通过GUS染色检测,GUS报告基因在部分转化的愈伤组织中瞬时表达,并在部分抗性苗中稳定表达.对部分抗性植株进行PCR和PCRSouthern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到胡萝卜基因组中.

RELA融合基因阳性室管膜瘤11例临床病理分析

目的探讨RELA融合基因阳性室管膜瘤的临床病理学特征。方法回顾性分析11例RELA融合基因阳性室管膜瘤的临床资料、影像学特点、病理学特征和免疫表型,并复习相关文献。结果 11例RELA融合基因阳性室管膜瘤均位于幕上,男性6例、女性5例,发病年龄3～56岁,平均27岁。影像学示幕上占位性病变。镜下见分支状毛细血管网和真/假菊形团结构。免疫表型:瘤细胞GFAP、L1CAM、Cyclin D1均呈弥漫阳性,EMA呈核旁点状阳性,多数病例表达nestin,Olig-2均阴性。结论RELA融合基因阳性室管膜瘤好发于年轻人的幕上,具有独特的免疫表型和基因表型,预后较差,需进行诊断与鉴别诊断。

粤油7号花生AhNCED1基因启动子克隆及其活性分析

AhNCED1是干旱胁迫下花生中调控脱落酸(abscisic acid,ABA)生物合成的关键基因。本文采用基于PCR的基因组DNA步移法,从抗旱性强的粤油7号花生中克隆AhNCED1基因起始密码子ATG上游2392bp启动子序列,构建该启动子驱动报告基因GUS的植物双元表达载体pAhNCED1p∷GUS,转化野生型拟南芥获得AhNCED1p∷GUS转基因植株。通过GUS染色及其酶活性测定分析AhNCED1p∷GUS转基因拟南芥中AhNCED1p启动子的活性。结果表明,AhNCED1p∷GUS转基因拟南芥叶片中AhNCED1p启动子活性最强,脱水胁迫显著增强7 d龄转基因拟南芥幼苗叶片中AhNCED1p启动子活性。300mmol·L-1山梨醇胁迫或100μmol L-1外源ABA处理3 h明显增强25d龄AhNCED1p∷GUS转基因拟南芥中AhNCED1p启动子活性。结果说明,粤油7号花生AhNCED1基因启动子受渗透胁迫和ABA诱导,与生物信息学预测AhNCED1基因启动子序列中存在逆境胁迫和ABA响应元件的结果相一致。

转抗蚜GNA基因苜蓿的研究

将雪花莲凝集素基因GNA插入双元载体pBI121中的GUS基因的上游,得到植物表达载体pLG66m。GNA与GUS基因构成融合基因,共用一个CaMV35S启动子。将该表达载体导入农杆菌LBA4404,得到LBA4404／pLG66m菌株。利用LBA4404／pLG66m菌株培养液直接浸泡萌动的苜蓿种子,组织学检测表明GUS在种苗上3 d的瞬时表达效率超过90％。待苜蓿长出第3片真叶后检测,GUS表达效率明显下降。GNA基因在种苗期间的短期表达也积累GNA毒蛋白在苜蓿体内的含量,为苜蓿在苗期抗蚜起到一定作用。

成串抗冻肽基因的诱导表达载体的构建

目的 :构建可将目的基因转化入烟草的重组载体。方法 :在大豆热休克启动区下游把带有甘薯信号肽的冬鲽抗冻肽成串基因与GUS报道基因融合并亚克隆到双源载体pBIN19中。结果 :构建了带有GUS报道基因的诱导型重组载体。结论 :经验证该重组载体构建成功。

马铃薯P_(GBSS)-GUS融合基因在块茎中专一性表达的初步研究

从GBSS（Granule－boundstarchsynthase）基因克隆上，酶切得到5’上游区1．2kb的序列，与GUS报告基因融合，构建了PGBSS1．2表达载体．通过农杆菌介导的方式，将pGBSS1．2转入马铃薯品种Desiree．卡那霉素筛选获得抗性再生植株和微薯．利用PCR特异性扩增和SouthernBlotting的方法证明了融合基因在马铃薯基因组中的整合．X－Gluc活体染色表明，微薯切片具有高GUS酶活性．而茎段中GUS活性相对较低．初步证明GBSS启动子是高效和块茎专一性的启动子，从而为马铃薯生物反应器的研究打下良好的基础．

烟草rbcS启动子的克隆与活性鉴定

为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,采用PCR技术从烟草栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及十几种光应答元件,与已报道序列的相应区域同源性达99%。将其与GUS融合蛋白基因串连,构建了植物表达载体prbcS-121,通过根癌农杆菌介导的烟草叶盘转化法,将pBI121及prbcS-121转化烟草。对转基因烟草植株中GUS活性测定结果表明,烟草rbcS启动子具有叶部组织特异性,且在叶部启动基因表达能力较CaMV35S启动能力强,从而为外源基因在转基因烟草叶片中的高效表达提供了新的工具,为后续目的基因能在烟草叶部发生组织特异性和光诱导性表达奠定了基础。

水稻花药特异启动子Osg6B的序列及功能分析

对水稻花药特异表达基因 Osg6B启动子简称 Osg6B的全序列进行了测定 ,结果表明 ,Osg6B含有 1 .73kb个核苷酸 ,与文献报道的该启动子相差仅 8个核苷酸 ,两者核苷酸同源性为 99.5%。将 Osg6B同 GUS基因编码区相连 ,将构建成的融合基因用基因枪轰击烟草的花药和幼叶 ,荧光分析结果为含 Osg6B的 GUS融合基因在大于 2 mm烟草花药中的表达量比对照和幼叶均高出 8倍 ,在小于或等于 2 mm的花药中 ,则高达到 1 2倍 ,表明 Osg6B启动子具有启动外源基因在植物花药中特异表达的功能。

转录因子CBF4诱导型启动子的克隆及功能分析

根据已有文献及公开的拟南芥基因组序列,利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsisthaliana)基因组DNA中扩增得到了转录因子CBF4上游的DNA片断,对其进行序列分析表明与GenBank序列高度同源,同时对其进行初步的功能分析。采用生物信息学方法对这一序列分析的结果显示这一片段具有启动子的特殊结构域;与GUS基因融合构建双元表达载体,转化烟草的组织特异性表达检测可见明显的GUS活性,初步表明所获片断为CBF4基因的诱导型启动子。