抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位的影响

目的通过抗纤益心方干预扩张型心肌病大鼠,探讨该药在扩张型心肌病心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位方面的作用。方法扩张型心肌病大鼠通过饮用呋喃唑酮复制,连续10周后通过心脏彩超确定模型复制成功,随机分为抗纤益心方低剂量组、抗纤益心方中剂量组、抗纤益心方高剂量组、卡托普利组和模型组,另设正常组。药物干预4周后观察各组大鼠心肌细胞超微结构;心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力;心肌细胞CaMKⅡ、PKA、UCP2 mRNA表达。用去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞肥大模型,药物干预24 h后检测心肌细胞线粒体膜电位水平。结果与正常组相比,各模型组大鼠心肌细胞线粒体受损,心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力明显降低,UCP2 mRNA、CaMKⅡmRNA均明显升高,PKA mRNA明显降低,心肌线粒体膜电位水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。各药物干预组对心肌细胞线粒体有不同程度的保护作用,对所测指标有不同程度的改善,尤其以抗纤益心方高剂量组更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤益心方可以减轻DCM模型大鼠心肌细胞线粒体损伤,改善心肌细胞能量代谢及舒缩功能,改善心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位水平是其机制之一。

ERK信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导的人气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨ERK信号通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人气道平滑肌细胞(airway smooth musclecell,ASMC)增殖中的作用。方法原代培养人ASMC,传代后给予不同干预剂刺激,分为对照组、AngⅡ组、Losar-tan组、AngⅡ+Losartan组、PD98059组、AngⅡ+PD98059组,用MTT法检测细胞生长情况,流式细胞术PI单染法检测细胞周期,实时荧光定量PCR及Western Blot检测Cyclin D1表达水平,Western Blot检测ERK1/2磷酸化水平。结果比较各组细胞A490值、S+G2/M期细胞百分比、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平、ERK1/2磷酸化水平,AngⅡ组[0.531±0.043、(18.8±3.1)%、1.57±0.26、0.527±0.082、0.641±0.153]显著高于对照组[0.386±0.021、(11.0±3.1)%、1.00±0.17、0.224±0.074、0.306±0.049],差异均有统计学意义(P<0.01);AngⅡ+Losartan组[0.395±0.018、(9.6±1.6)%、0.91±0.21、0.291±0.094、0.212±0.073]显著低于AngⅡ组,差异均有统计学意义(P<0.01);AngⅡ+PD98059组[0.389±0.028、(11.9±2.9)%、0.84±0.04、0.226±0.047、0.211±0.060]显著低于AngⅡ组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 AngⅡ通过激活ERK信号通路促进人ASMC增殖,阻断ERK通路可抑制AngⅡ诱导的人ASMC增殖。

基于MEK/ERK信号通路探究丹参酮ⅡA磺酸钠对缺氧复氧心脏微血管内皮细胞的保护作用

目的探究丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对缺氧/复氧(H/R)心脏微血管内皮细胞(CMECs)保护作用的内在机制。方法H/R细胞模型的建立;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测CMECs细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;Western印迹检测凋亡相关蛋白及促分裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白表达;光学显微镜下观测CMECs细胞血管形成能力。结果与对照组比较,H/R组G0/G1期比例明显升高(P<0.05),S期明显降低(P<0.05)。与H/R组比较,低、中、高剂量STS组细胞G0/G1期比例依次降低,S期依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,H/R组细胞活力、管的形成、p-MEK、p-ERK2水平显著降低(P<0.05);与H/R组比较,低、中、高剂量STS组细胞活力、管的形成、p-MEK、p-ERK2水平均显著增高,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。与对照组相比,H/R组细胞凋亡率、Bax、酶切caspase-3水平显著升高(P<0.05);与H/R组比较,低、中、高剂量STS组细胞凋亡率、Bax、酶切caspase-3水平均显著降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论STS对H/R CMECs损伤的保护作用与其激活MEK/ERK信号通路有关。

miR-4306通过MAPK/ERK信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的主动脉夹层的形成

目的探讨miR-4306对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的主动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响及作用机制。方法将miR-4306mimic转染至人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC),按照细胞处理方式分为miRNA-NC组、miRNA-NC+AngⅡ组、miRNA-mimics组和miRNA-mimics+AngⅡ组;利用CCK-8细胞增殖法检测AngⅡ对HA-VSMC细胞的最佳作用时间、浓度以及miR-4306对AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测miR-4306对AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞迁移的影响,Western blot检测HA-VSMC细胞MMP-9、MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达。结果 AngⅡ呈剂量和浓度依赖性的方式诱导HA-VSMC细胞增殖,组间和不同时间点之间差异具有统计学意义(均P<0.05)。miR-4306过表达可以抑制AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞增殖,与miRNA-NC+AngⅡ组比较,miRNA-mimics+AngⅡ组细胞增殖数量明显减少,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-4306过表达可以抑制AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞迁移,与miRNA-NC+AngⅡ组比较,miRNA-mimics+AngⅡ组细胞迁移距离增加,组间差异具有统计学意义(P<0.01)。miR-4306过表达明显降低AngⅡ诱导的HA-VSMC细胞MMP-9蛋白和p-ERK1/2蛋白表达,与miRNA-NC+AngⅡ组比较,miRNA-mimics+AngⅡ组MMP-9、p-ERK1/2蛋白表达明显降低,组间差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论 miR-4306可能通过MAPK/ERK信号通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移功能。

RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响

目的:观察RIP3/CaMKⅡ信号通路对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响,并探讨CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93对心肌损伤的作用。方法:将60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、CVB3组、CVB3+KN-93组和CVB3+KN-93+Ti(活性氧簇特异性抑制剂)组,以上小鼠腹腔及尾静脉注射药物连续7 d。采用双抗体夹心免疫法检测小鼠心肌细胞坏死标志物,心脏超声技术检测小鼠心脏结构和功能,绘制Kaplan-Meier生存曲线,观察KN-93对小鼠心肌的保护作用。结果:CVB3+KN-93组小鼠心肌细胞坏死较CVB3组显著减轻,心脏功能和生存曲线改善(P<0.01);CVB3+KN-93组小鼠心肌组织H2O2含量较CVB3组显著下降(P<0.01);加入Ti后,CVB3+KN-93+Ti组H2O2含量较CVB3+KN-93组轻度下降(P<0.05),但无论是心脏功能还是生存曲线均无显著差异。结论:RIP3/CaMKⅡ信号通路在CVB3诱导的急性重症病毒性心肌炎小鼠心肌细胞损伤中起到主导作用;KN-93能阻断这种作用并可能产生新的治疗方式,其效果可能是通过对CaMKⅡ的直接抑制和对活性氧簇的间接抑制而实现的。

电针对脑缺血再灌注大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达及CaM/CaMKⅡ信号通路影响

目的选取“百会”“印堂”及双侧“足三里”穴进行电针干预,探讨电针对大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达的影响及对CaM/CaMKⅡ信号通路的影响。方法线栓法制备MCAO模型大鼠,依据神经功能评分标准,造模成功后的30只大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。造模成功后2 h,选取“百会”“印堂”及双侧“足三里”穴对电针组进行治疗,连续电针7 d。通过Morris水迷宫实验完成对大鼠学习和记忆能力的检测;HE染色法观察各组大鼠脑组织的形态学改变;免疫组化法检测各组大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达水平;ELISA法检测各组大鼠脑缺血组织内CaM、CaMKⅡ表达水平。结果经电针治疗后,电针组大鼠神经功能评分较模型组显著降低(P<0.05);Morris水迷宫实验:与模型组相比,电针组大鼠穿过逃生平台的次数明显增多(P<0.01),其逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);HE染色:模型组和电针组脑组织细胞均有不同程度的坏死或损伤,但电针组的组织形态学有明显改善;免疫组化法:与模型组比较,电针组大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达水平明显升高(P<0.05)。ELISA法:与假手术组比较,模型组和电针组大鼠脑缺血组织内CaM、CaMKⅡ表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠脑缺血组织内CaM、CaMKⅡ表达水平明显降低(P<0.05)。结论电针“百会”“印堂”及双侧“足三里”穴能够明显改善脑缺血再灌注大鼠的学习和记忆能力,上调VGLUT1表达水平,增强突触传递效能,且能够抑制CaM/CaMKⅡ信号通路的活化,对脑组织产生一定的保护作用,对脑缺血再灌注损伤在临床上的治疗科学性提供了实验依据。

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠脑缺血再灌注后ERK信号通路的影响

目的:研究ERK信号通路在大鼠缺血再灌注脑组织的表达情况,并观察丹参酮ⅡA磺酸钠对其的调控作用。方法:建立大鼠脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学染色法检测缺血再灌注脑组织Ras,MEK,ERK阳性细胞数的表达,Tunel法检测神经细胞凋亡数量,观察Ras,MEK,ERK表达水平与神经坏死和凋亡的关系。结果:在缺血再灌注脑组织中Ras,MEK以及ERK表达均发生上调,给予REK抑制剂以及丹参酮ⅡA磺酸钠处理后,Ras,MEK以及ERK的表达均受到抑制,同时减少了细胞坏死和凋亡数量,与模型组相比均具有统计学差异(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注后REK信号通路激活,丹参酮ⅡA磺酸钠可能通过抑制该通路的激活起到脑保护作用。

氯胺酮对疼痛抑郁共病大鼠海马ERK/CREB信号通路的影响

目的研究氯胺酮对疼痛抑郁共病大鼠海马ERK/CREB信号通路的影响。方法将38只大鼠随机分为对照组(n=10)和造模组(n=28),造模组采用牛Ⅱ型胶原-完全弗氏佐剂注射。采用机械缩足反应阈值测定(MWT)、强迫游泳实验(FST)判断造模成功后,将模型组随机平均分为氯胺酮组和生理盐水组。采用MWT、FST检测氯胺酮对疼痛抑郁共病的治疗作用。采用免疫印迹法检测大鼠海马组织中磷酸化的ERK1/2、CREB蛋白表达量。结果与生理盐水组比较,氯胺酮组大鼠的FST不动时间缩短,MWT阈值增加(P均<0.05)。氯胺酮组大鼠海马p ERK1/2、p CREB表达量均明显高于生理盐水组(P<0.05)。结论氯胺酮能够有效改善疼痛抑郁共病大鼠的疼痛及抑郁症状,其作用机制可能与海马ERK/CREB信号通路有关。

复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的抗焦虑作用及对大鼠脑内ERK/CREB信号通路和BDNF表达的影响

目的研究复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的药效及其对大鼠脑皮层及海马ERK/CREB信号通路、脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法采用高架十字迷宫实验,观察了复方抗焦虑胶囊低、中、高剂量(0.75、1.5、3 g·kg^(-1))给药7d对急性应激大鼠行为的影响,采用Western blot免疫印迹法研究复方抗焦虑胶囊对ERK/CREB信号通路的影响,对急性应激大鼠脑皮层及海马BDNF表达的影响。结果高架十字迷宫实验显示,复方抗焦虑胶囊高剂量组可明显增加大鼠进入开臂时间的百分数(OT%)(P<0.05)和进入开臂次数的百分数(OE%)(P<0.05)。Western blot实验显示,复方抗焦虑胶囊中剂量组明显减少了海马中p-ERK1/2的表达(P<0.05);高剂量组明显减少了大鼠皮层和海马中p-ERK1/2和p-CREB的表达(P<0.05)。高剂量组明显增加了大鼠皮层及海马中BDNF的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论复方抗焦虑胶囊在高架十字迷宫模型中具有抗焦虑作用,且其抗焦虑机制可能与影响ERK/CREB信号通路,增加BDNF表达有关系。

补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞增殖及ERK/CREB信号通路的影响

目的探讨补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖及ERK/CREB信号通路的影响。方法采用双侧卵巢切除术(OVX)结合大脑中动脉阻塞(MCAO)法复制去势雌性大鼠脑缺血复合模型,将造模后的36只大鼠随机分为双假手术组、复合模型组、雌激素组、雌激素+G15组、补阳还五汤组及补阳还五汤+G15组6组,每组6只,术后24 h给予相应药物灌胃连续干预14 d,同时每天腹腔注射Brd U、G15分别标记增殖细胞和阻断GPER-1。采用免疫荧光Brd U/Nestin双标法检测各组大鼠缺血侧海马齿状回NSCs增殖情况,免疫组化SP法检测ERK1/2、CREB1磷酸化蛋白表达水平。结果补阳还五汤组和雌激素组缺血侧海马DG区Brd U/Nestin双标阳性细胞及p ERK1/2、p CREB1阳性细胞表达均增加,与复合模型组比较有显著性差异(P<0.05),但补阳还五汤组要多于雌激素组(P<0.05)。与补阳还五汤组比较,补阳还五汤+G15组缺血侧海马DG区Brd U/Nestin双标阳性细胞及及p ERK1/2、p CREB1阳性细胞表达均减少(P<0.05)。结论补阳还五汤可以促进去势脑缺血雌性大鼠缺血侧海马DG区神经干细胞增殖,激活ERK/CREB信号通路,可能是其发挥类雌激素作用、促进内源性神经再生作用机制之一。

三七总皂苷对慢性肾衰竭大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路的影响,探讨其延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组采用250 mg·kg^(-1)·d^(-1)腺嘌呤混悬液连续灌胃28 d复制CRF大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、贝那普利组(10 mg·kg^(-1))及PNS低、中、高(40、80、160 mg·kg^(-1))剂量组,灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测大鼠24 h尿蛋白(24 h U-pro)及血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量;采用HE染色法观察肾组织病理形态,Masson染色法观察肾间质纤维化程度;采用ELISA法检测血清及肾组织匀浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血清中胱抑素C(Cys-C)的含量;采用Western Blot法分析肾组织中血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型(AT1R)、细胞外调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达情况;Real-time PCR法检测肾组织中AngⅡ、AT1R、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;免疫组化法检测肾组织中AT1R蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠的24 h U-pro、Scr、BUN、Cys-C水平显著升高(P<0.01),血清、肾组织匀浆中的AngⅡ含量明显增加(P<0.01),肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA表达均明显上调(P<0.01),AT1R、p-ERK1/2蛋白表达均明显上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠的Scr、BUN、24 h U-pro及Cys-C水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清、肾组织中的AngⅡ含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA表达均明显下调(P<0.05,P<0.01),AT1R、p-ERK1/2蛋白表达均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷可改善CRF模型大鼠的肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与调控AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路有关。

七氟醚预处理对老年大鼠认知功能及海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响

目的探讨常用吸入麻醉药物七氟醚对老年大鼠相关认知功能影响及其对海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响。方法30只20月龄的老年雄性wister大鼠,随机分为3组:对照组(C组n=10),七氟醚1组(S1组n=10),和七氟醚2组(S2组n=10),老年雄性wister大鼠放置一密闭麻醉箱中,该麻醉箱放置于预设温度为35℃度的水浴箱中。麻醉箱进气口与装有七氟醚气体挥发罐的麻醉机连接,出气口接延长管置于通风厨,S1组大鼠用1.5%七氟醚麻醉2h,S2组大鼠用3.0%七氟醚麻醉2h,C组大鼠暴露于纯氧中2h。麻醉气体由纯氧通过麻醉机输送通过该麻醉箱,实验中使用麻醉气体监测仪监测麻醉箱出气口的麻醉气体浓度。在麻醉过程中每隔30 min监测大鼠肤色,并记录呼吸频率。对照组在手术后第一天处死,七氟醚组分别于处理后第2天各断头处死10只,冰盘上快速取海马,Western Blot法测定海马区BDNF、CREB及Erk1/2相关表达,并分别在处死前2小时进行水迷宫实验,并判断其记忆认知相关行为是否产生了改变。结果试验组吸入低浓度1.5%七氟醚老年雄性wister大鼠试验后认知记忆功能不如对照组,试验组Western Blot法测定海马BDNF、CREB及Erk1/2相关表达均低于对照组,实验组组间比较浓度越高该信号通路表达活性越低。七氟醚预处理后吸入低浓度1.5%七氟醚后老年雄性wister大鼠认知功能减退,其机制可能与Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达有关,高浓度组(吸入低浓度3%七氟醚)影响情况较低浓度组显著。S1组、S2组麻醉后潜伏期均较麻醉前及C组麻醉后明显延长(P<0.05),S2组麻醉后潜伏期较S1组延长更为显著(P<0.05);S1及S2组大鼠120S内穿越原平台区域进入次数麻醉后显著低于麻醉前及C组,组间比较S2组<S1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚可通过调节Erk1/2/CREB/BDNF信号通路的分子机制上对大鼠行为记忆认知功能产生影响从而加重老年大鼠认知功能障碍。

氰戊菊酯过度激活Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成

目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平,化学比色法检测TM3细胞的ATP水平,Flou-4/AM探针测定细胞内Ca^(2+)水平,JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变,蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降,MMP水平降低,睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时,TM3细胞胞内的Ca^(2+)水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升,MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca^(2+)超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。

下调IGF-1通过CREB信号通路失活间接加重大鼠脑缺血损伤

目的探讨MEK/ERK/CREB信号通路是否介导IGF-1在大鼠脑缺血中的调控作用。方法成年雄性SD大鼠使用MACO线栓法建立永久性局灶性脑缺血模型,进行m NSS神经功能缺损评分,脑缺血48 h时进行TTC染色观察脑梗死情况、末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,并利用实时荧光定量PCR和Western blot检测缺血同侧大脑皮质内IGF-1及下游信号分子MEK、ERK1/2和CREB的mRNA和蛋白表达变化,及其磷酸化水平的变化情况。结果脑缺血组大鼠m NSS评分、细胞凋亡百分比均明显高于假手术组,缺血大脑皮质内IGF-1表达下调,MEK、ERK1/2和CREB的基因水平下降,MEK、ERK1/2的蛋白水平及其磷酸化蛋白水平均明显降低。结论本实验结果表明永久性局灶性脑缺血早期大鼠皮质内下调的IGF-1,可以通过负调控MEK/ERK/CREB促存活信号通路,间接加重大鼠脑缺血性损伤。

ERK／c-Fos通路在Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导大鼠肾系膜细胞株增殖中的作用

目的:研究ERK1/2/c-Fos通路在血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]抑制血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的大鼠肾系膜细胞株(GMCS)增殖中的作用。方法:在培养的大鼠肾系膜细胞(GMC)中,加入不同浓度的Ang-(1-7)与Ang-Ⅱ共同培养,用结晶紫计数法检测GMC数目;Western blotting检测GMC中p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结果:Ang-(1-7)呈剂量依赖性地抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC数目的增加和GMC内p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结论:ERK/c-Fos通路参与Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC的增殖。

滋水清肝饮对慢性束缚应激抑郁小鼠海马ERK、GSK3β、CREB、BDNF蛋白表达的影响

目的基于ERK/GSK-3β/CREB/BDNF信号通路探究滋水清肝饮对慢性束缚应激(CRS)抑郁小鼠的作用。方法除空白组外,其余小鼠建立CRS抑郁模型,造模成功后分为模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)和滋水清肝饮低、中、高剂量组(8.835、17.670、35.340 g/kg),给予相应剂量药物干预,同时继续进行CRS处理。给药7、14 d进行糖水偏好实验及行为学实验。给药14 d后,HE染色观察小鼠海马组织形态学改变,采用试剂盒检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,ELISA法检测血清5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平,RT-qPCR法检测海马组织BDNF、TNF-α、IL-1βmRNA表达,Western blot法检测海马组织ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、CREB、BDNF蛋白表达。结果与模型组比较,给药14 d后,盐酸氟西汀组和滋水清肝饮中剂量组小鼠糖水偏好率升高(P<0.01),悬尾不动时间和强迫游泳不动时间缩短(P<0.01),海马组织神经细胞损伤有所改善,血清MDA、TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性和5-HT水平升高(P<0.05,P<0.01),海马组织TNF-α、IL-1βmRNA表达降低(P<0.01),BDNF mRNA和p-ERK1/2、p-GSK3β、CREB、BDNF蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论滋水清肝饮可改善慢性束缚应激小鼠抑郁样行为,其机制可能与调节小鼠海马ERK/GSK3β/CREB/BDNF信号通路有关。

药物成瘾中的CaMK Ⅱ信号转导机制

钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋／calmodulin—dependentproteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）是一种多功能丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，分布全身，在脑内分布尤其丰富，与神经递质合成和分泌、受体调节、细胞骨架结构调节、轴突传递、长时程增强（long—termpotentiation，LTP）以及基因表达密切相关。近年来研究表明，CaMKⅡ信号转导通路在镇痛及药物成瘾中发挥了重要作用。

奥美沙坦酯对AMI大鼠血管内皮功能和ERK／CREBmRNA表达的干预

目的研究奥美沙坦酯对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠的内皮功能和细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)信号通路的干预。方法将40只大鼠随机分为AMI组、奥美沙坦酯低剂量(olmesartan medoxomil low dose,OML)组、奥美沙坦酯高剂量(olmesartan medoxomil high dose,OMH)组和假手术(Sham)组,干预2周后处死,检测血压,血NO、AngⅡ含量,NOS活性,离体胸主动脉条片舒缩功能,MI面积及梗死区心肌中ERK、CREB mRNA表达水平。结果与Sham组比较,AMI组血清NO含量、NOS活性降低,胸主动脉内皮依赖性舒张(endothelium-dependent diastole,EDD)功能减退,血浆AngⅡ含量升高,伴心肌组织ERK、CREB mRNA表达增加,差异有显著性。经奥美沙坦酯干预后,血清NO含量、NOS活性升高达Sham组水平,胸主动脉EDD显著改善,同时呈剂量依赖性升高血浆AngⅡ含量,缩小MI面积,降低ERK、CREB mRNA表达,而各组血压并无明显差异。结论奥美沙坦酯在不影响血压的前提下显著改善AMI后内皮功能紊乱(Endothelial dysfunction,ED),缩小MI面积,并可呈剂量依赖性降低AMI大鼠心肌ERK、CREB mRNA表达。

细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用

基于细胞Raf/MEK/ERK信号通路与病毒复制的关系,应用Western印迹检测p-ERK1/2蛋白的表达、用终点滴定法测定病毒增殖量(TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(CPE)等,揭示单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制与ERK通路的关系.结果表明,HSV-2的复制可引起细胞ERK通路的活化;用U0126预先抑制ERK通路的活化,或用特异性siRNA敲减MEK1/2基因的表达可显著地抑制病毒复制.提示ERK信号通路以及MEK1/2蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.该研究对进一步阐明细胞ERK通路各激酶蛋白在病毒复制中的作用机制、寻找抗病毒作用靶标等奠定了良好的基础.