抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位的影响

目的通过抗纤益心方干预扩张型心肌病大鼠,探讨该药在扩张型心肌病心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位方面的作用。方法扩张型心肌病大鼠通过饮用呋喃唑酮复制,连续10周后通过心脏彩超确定模型复制成功,随机分为抗纤益心方低剂量组、抗纤益心方中剂量组、抗纤益心方高剂量组、卡托普利组和模型组,另设正常组。药物干预4周后观察各组大鼠心肌细胞超微结构;心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力;心肌细胞CaMKⅡ、PKA、UCP2 mRNA表达。用去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞肥大模型,药物干预24 h后检测心肌细胞线粒体膜电位水平。结果与正常组相比,各模型组大鼠心肌细胞线粒体受损,心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力明显降低,UCP2 mRNA、CaMKⅡmRNA均明显升高,PKA mRNA明显降低,心肌线粒体膜电位水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。各药物干预组对心肌细胞线粒体有不同程度的保护作用,对所测指标有不同程度的改善,尤其以抗纤益心方高剂量组更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤益心方可以减轻DCM模型大鼠心肌细胞线粒体损伤,改善心肌细胞能量代谢及舒缩功能,改善心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位水平是其机制之一。

RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响

目的:观察RIP3/CaMKⅡ信号通路对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响,并探讨CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93对心肌损伤的作用。方法:将60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、CVB3组、CVB3+KN-93组和CVB3+KN-93+Ti(活性氧簇特异性抑制剂)组,以上小鼠腹腔及尾静脉注射药物连续7 d。采用双抗体夹心免疫法检测小鼠心肌细胞坏死标志物,心脏超声技术检测小鼠心脏结构和功能,绘制Kaplan-Meier生存曲线,观察KN-93对小鼠心肌的保护作用。结果:CVB3+KN-93组小鼠心肌细胞坏死较CVB3组显著减轻,心脏功能和生存曲线改善(P<0.01);CVB3+KN-93组小鼠心肌组织H2O2含量较CVB3组显著下降(P<0.01);加入Ti后,CVB3+KN-93+Ti组H2O2含量较CVB3+KN-93组轻度下降(P<0.05),但无论是心脏功能还是生存曲线均无显著差异。结论:RIP3/CaMKⅡ信号通路在CVB3诱导的急性重症病毒性心肌炎小鼠心肌细胞损伤中起到主导作用;KN-93能阻断这种作用并可能产生新的治疗方式,其效果可能是通过对CaMKⅡ的直接抑制和对活性氧簇的间接抑制而实现的。

电针对脑缺血再灌注大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达及CaM/CaMKⅡ信号通路影响

目的选取“百会”“印堂”及双侧“足三里”穴进行电针干预,探讨电针对大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达的影响及对CaM/CaMKⅡ信号通路的影响。方法线栓法制备MCAO模型大鼠,依据神经功能评分标准,造模成功后的30只大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组和电针组,每组10只。造模成功后2 h,选取“百会”“印堂”及双侧“足三里”穴对电针组进行治疗,连续电针7 d。通过Morris水迷宫实验完成对大鼠学习和记忆能力的检测;HE染色法观察各组大鼠脑组织的形态学改变;免疫组化法检测各组大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达水平;ELISA法检测各组大鼠脑缺血组织内CaM、CaMKⅡ表达水平。结果经电针治疗后,电针组大鼠神经功能评分较模型组显著降低(P<0.05);Morris水迷宫实验:与模型组相比,电针组大鼠穿过逃生平台的次数明显增多(P<0.01),其逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);HE染色:模型组和电针组脑组织细胞均有不同程度的坏死或损伤,但电针组的组织形态学有明显改善;免疫组化法:与模型组比较,电针组大鼠脑缺血组织内VGLUT1表达水平明显升高(P<0.05)。ELISA法:与假手术组比较,模型组和电针组大鼠脑缺血组织内CaM、CaMKⅡ表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠脑缺血组织内CaM、CaMKⅡ表达水平明显降低(P<0.05)。结论电针“百会”“印堂”及双侧“足三里”穴能够明显改善脑缺血再灌注大鼠的学习和记忆能力,上调VGLUT1表达水平,增强突触传递效能,且能够抑制CaM/CaMKⅡ信号通路的活化,对脑组织产生一定的保护作用,对脑缺血再灌注损伤在临床上的治疗科学性提供了实验依据。

基于CAV1.2/CaM/CaMKⅡ通路探讨祛痰化瘀中药复治疗心房颤动的作用机制

目的探讨祛痰化瘀中药复方治疗心房颤动的作用机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为空白组和造模组,连续7天尾静脉注射Ach(66μg·mL^(-1))-CaCl_(2)(10 mg·mL^(-1))建立大鼠AF模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药复方高、中、低剂量组和维拉帕米组,中药复方高、中、低剂量组给予12.38 mg·kg^(-1)·d^(-1)、6.18 mg·kg^(-1)·d^(-1)、3.10 mg·kg^(-1)·d^(-1)祛痰化瘀中药复方溶液灌胃、维拉帕米组给予维拉帕米溶液8.31 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,期间仍持续尾静脉注射,连续14天。电生理记录仪测量大鼠Ⅱ导联房颤持续时间,透射电镜观察大鼠心房肌超微结构变化,RT-PCR法检测大鼠心房肌CAV1.2、CaM、CaMKⅡmRNA相对表达量,Western blot法检测大鼠心房肌CAV1.2、CaM、CaMKⅡ及下游蛋白RyR2、P-RyR2蛋白表达情况。结果与空白组相比,模型组大鼠均出现典型房颤心电图(P<0.01),心房肌细胞肌丝排列絮乱、线粒体嵴断裂、呈“空泡样”改变,CAV1.2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01),CaM、CaMKⅡmRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),P-RyR2蛋白表达显著升高(P<0.01),RyR2蛋白表达无差异(P>0.05)。与模型组相比,中药复方组房颤持续时间降低(P<0.05);肌丝排列相对整齐,线粒体结构相对完整;CAV1.2 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),CaM、CaMKⅡmRNA及蛋白表达下降(P<0.01),下游蛋白P-RyR2表达降低(P<0.01),RyR2蛋白表达无差异(P>0.05)。结论祛痰化瘀中药复方可缩短大鼠房颤持续时间,抑制心房肌细胞超微结构损伤,其作用机制可能与调控CAV1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路表达,改善钙调控紊乱有关。

氰戊菊酯过度激活Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成

目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平,化学比色法检测TM3细胞的ATP水平,Flou-4/AM探针测定细胞内Ca^(2+)水平,JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变,蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降,MMP水平降低,睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时,TM3细胞胞内的Ca^(2+)水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升,MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca^(2+)超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。

Ca2+信号通路调控肌纤维类型转化的研究进展

Ca2+信号通路包括钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和钙调蛋白激酶(calmodulin kinase,CaMK)两条Ca2+依赖性信号传导途径,其被激活都会促进快肌纤维向慢肌纤维转化。本文综述了CaN和CaMK的组成结构、作用机理、影响Ca2+信号通路调控的主要因素、Ca2+信号通路在肌纤维类型转化中的作用以及与肉品品质的关系,并对其研究方向作出展望,以期为今后通过遗传、营养等措施改善肉品品质提供理论依据。

不同训练方式对大鼠骨骼肌纤维类型转化和CaMK Ⅱ/MEF2传导途径的影响

目的:探讨间歇速度训练和耐力训练对大鼠骨骼肌纤维类型转化及钙调蛋白激酶/肌细胞增强因子2(CaMK Ⅱ/MEF2信号传导通路的影响。方法:成年雄性SD大鼠(8周龄) 18只,随机分成间歇速度训练组(IST),耐力训练组(ET),设空白组(C),每组6只,IST组采用75 m/min×1 min、20 m/min×1 min的交替训练6次,跑台坡度15,持续时间12 min/d;ET组采用速度30m/min、跑台坡度7、持续时间90 min/d的耐力训练。干预8周后,分别取小鼠右侧胫骨前肌、比目鱼肌,酶联免疫吸附法检测骨骼肌琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,ATP酶染色法观察Ⅰ、Ⅱ型肌纤维面密度、数密度变化情况,SDS-PAGE凝胶电泳技术观察骨骼肌MHC亚型百分比含量、骨骼肌mRNA表达谱测序分析及qRT-PCR技术检测CaN、CaMKⅡ、MEF2水平。结果:相比C组,ET组SDH活性显著上升,LDH活性降低(P<0.05);IST组胫骨前肌中LDH活性值升高(P<0.01)。ET组胫骨前肌MHCⅡa%升高,MHCⅡb%降低(P<0.05),比目鱼肌MHCI%和MHCⅡa%升高,MHCⅡb%均降低(P<0.05)。相比IST组,ET组胫骨前肌MHCⅡx%升高(P<0.05)。相比C组,ET组胫骨前肌I、Ⅱ型纤维纤维密度上升,IST组Ⅱ型纤维纤维密度提高,IST组、ET组比目鱼肌I型纤维纤维密度上升(P<0.05)。相比C组,ET组骨骼肌CaN、CaMKⅡ、MEF2 mRNA表达水平增高,IST组CaN、CaMKⅡ、MEF2 mRNA表达水平下降(P<0.01)。Illumina高通量测序筛选骨骼肌纤维转化相关因子及关联分析,运动干预促使骨骼肌纤维转化相关因子表达变化富集于TGF-β/Smad3、CaN/MEF2、AdipoQ等信号通路,而耐力训练显著提高骨骼肌纤维转化、干细胞功能相关信号通路的富集。结论:耐力训练促进向氧化型肌纤维转化(慢肌),而间歇速度训练向酵解型肌纤维转化(快肌),并伴随着CaMK Ⅱ/MEF2传导途径中CaN、CaMKⅡ、MEF2基因的高表达。

加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马CaMK信号转导通路的影响

目的探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马钙调素依赖蛋白激酶(CaMK)信号转导通路的影响。方法 128只SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组32只。采用孤养结合慢性不可预见性应激造模抑郁大鼠,从造模第1天开始中药组给予加味温胆汤12g/(kg.d),西药组予氟西汀1.8mg/(kg.d),模型组、空白组给予生理盐水2ml/(kg.d),各组均灌胃给药,连续28天。实验第7、14、21、28天时采用Western印迹法检测各组大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDA-NR1)、钙调素(CaM)、CaMKⅡ蛋白表达变化。结果第7、14天,各组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。21、28天时,与空白组比较,模型组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达增多(P<0.01);与模型组比较,中、西药组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01);中、西药组同时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论加味温胆汤可通过抑制CaMK信号转导通路的活性发挥其抗抑郁效应。

补肾方药延缓老年大鼠学习记忆减退的分子机制

目的:观察补肾方药左归丸、右归丸对老年大鼠空间学习记忆能力,氨基酸神经递质以及NMDA受体、Ca2+/CaMKⅣ信号通路相关分子的mRNA表达变化的影响,以探讨老年大鼠学习记忆减退的分子机制以及补肾方药的药理作用。方法:以青年大鼠(5月龄)为对照,以自然衰老大鼠(23月龄)为模型;Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力;HPLC-荧光法检测大鼠杏仁核、海马氨基酸类神经递质含量;RT-PCR法检测大鼠海马NR1、CaMKⅣ、CREB、c-fos mRNA的表达变化;观察补肾方药左归丸、右归丸对老年大鼠上述各项指标的影响。结果:与青年对照组比较,老年大鼠上述指标都有不同程度的异常变化,而左归丸、右归丸可改善老年大鼠退化的空间学习记忆能力;降低老年大鼠杏仁核、海马Glu的含量;显著上调老年大鼠NR1、CaMKⅣmRNA的表达,对CREB及c-fos mRNA的表达也有升高。结论:左归丸、右归丸可以通过降低老年大鼠杏仁核、海马Glu含量,纠正NMDA受体介导的CaMKⅣ信号通路的异常变化,改善老年大鼠空间学习记忆能力,延缓衰老。

miR-431调控CaMK Ⅳ信号通路参与坏死性小肠结肠炎症的机制

[目的]探讨miR-431调控CaMKⅣ信号通路对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的影响。[方法]将新生SD雄性大鼠32只随机分为对照组、模型组、阴性对照组、miR-431 antagomir组,每组8只。通过苏木素-伊红(HE)染色对各组大鼠进行肠组织病理评分;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组IL-6、TNF-α表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组miR-431、CaMKⅣmRNA的表达水平;蛋白印迹(Western blot)检测各组CaMKⅣ蛋白及pCaMKⅣ蛋白的表达水平。[结果]对照组肠组织结构清晰,上皮完整,腺体规则排列,无黏膜层及黏膜下层充血水肿及炎症细胞浸润;模型组及阴性对照组肠组织坏死严重,腺体排列紊乱,黏膜下层或固有层有重度分离,黏膜下层和肌层有严重水肿,绒毛崩解分离和缺血坏死,存在大量炎症细胞浸润,IL-6、TNF-α、miR-431、CaMKⅣmRNA及蛋白、pCaMKⅣ蛋白表达水平显著升高(P<0.05);miR-431 antagomir组肠道组织充血水肿情况较模型组减轻,腺体排列稍显紊乱,肠黏膜及黏膜下层可见轻度水肿,有少量炎症细胞浸润,IL-6、TNF-α、miR-431、CaMKⅣmRNA及蛋白、pCaMKⅣ蛋白表达水平较模型组和阴性对照组显著降低(P<0.05)。[结论]敲低miR-431的表达可减轻NEC新生大鼠的炎症水平,改善其肠组织的损伤情况,其机制可能与miR-431低表达抑制CaMKⅣ信号通路活化有关。

黄芩苷对扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β1-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路的影响

目的：探讨黄芩苷对阿霉素（ADR）诱导扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β_1肾上腺素受体（β_1-AR）/蛋白激酶A（PKA）/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）信号通路的影响。方法：雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常组、模型组、黄芩苷低、中、高剂量组及卡维地洛组;模型组给予ADR 2 mg·kg^（-1）腹腔注射,黄芩苷组及卡维地洛组在模型组基础上分别给予黄芩苷（25,50,100 mg·kg^（-1）·d^（-1））,卡维地洛10 mg·kg^（-1）·d^（-1）灌胃,正常组给予等体积0.9%NaCl腹腔注射,1次/周,共3次;7周末各组大鼠行心脏超声检测心室变化及心功能指标;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清氨基末端脑钠肽前体（N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP）,人基裂解素（human stromelysin-2,ST2）含量;采用原位末端转移酶标记法（TUNEL）染色观察各组大鼠心室肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠出现心室重构明显及心功能减弱（P〈0.05）,血清NT-proBNP,ST2含量增多（P〈0.05）,心室肌细胞凋亡数量增加（P〈0.05）,心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达增多;与模型组比较,黄芩苷及卡维地洛组大鼠心室重构及心功能改善（P〈0.05）,血清NT-pro BNP,ST2含量降低（P〈0.05）,心室肌凋亡数量减少（P〈0.05）,心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达减少（P〈0.05）。结论：黄芩苷可有效改善ADR诱导的扩张型心肌病大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制心室肌细胞β-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路表达有关。

银杏二萜内酯葡胺对阿尔茨海默病大鼠学习记忆障碍的改善作用

目的探讨银杏二萜内酯葡胺对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆障碍的改善作用及对突触相关蛋白表达的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组和银杏二萜内酯葡胺低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg)。通过侧脑室定位注射Aβ_(1-42)建立AD大鼠模型,尾静脉注射给药4周后,通过Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织海马中突触蛋白NR2B、PSD95、BDNF表达,以及下游信号通路蛋白ERK1/2、CaMKⅡ、CREB、TrkB表达。结果与模型组比较,银杏二萜内酯葡胺中、高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短(P<001),穿越平台次数、目标象限停留时间和游程增加(P<001),海马p-NR2B、p-CaMKⅡ、p-ERK、p-CREB、PSD95、BDNF、p-TrkB蛋白表达升高(P<001)。结论银杏二萜内酯葡胺能改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与激活NR2B相关的CaMKⅡ/ERK/CREB信号通路,增强PSD95、BDNF表达,激活TrkB信号通路相关。

头穴丛刺结合康复训练对脑缺血再灌注大鼠肠道菌群及CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

目的观察头穴丛刺结合康复训练对脑缺血再灌注大鼠肠道菌群及CaM/CaMKⅡ信号通路的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham组)、脑缺血再灌注损伤模型组(CIRI组)、头穴丛刺组(SCA组)(头穴丛刺干预,1次/日,连续14 d)、康复训练组(RT组)(跑台训练,30 min/次/日,连续14 d)和头穴丛刺联合康复训练组(SCA+RT组)(头穴丛刺干预,同时进行跑台训练),每组12只。分别于造模成功后3、7、14 d对大鼠进行神经功能评分;干预14 d后采用TTC染色检测脑梗死面积,ELISA检测脑组织中COX2、NOS2水平,16S-rDNA测序检测结肠内容物肠道菌群变化,Western blot检测脑组织中CaM、CaMKⅡ蛋白表达情况。结果CIRI组大鼠神经功能评分,脑梗死面积,脑组织中COX2、NOS2含量,CaM、CaMKⅡ蛋白水平及OUT水平的Simpson指数均显著高于sham组,OUT水平的Shannon指数、Ace指数、Chao指数均显著低于sham组(均P<0.05);与CIRI组相比,SCA组、RT组和SCA+RT组大鼠神经功能评分,脑梗死面积,脑组织中COX2、NOS2含量,CaM、CaMKⅡ蛋白相对表达量,以及OUT水平的Simpson指数均显著降低,OUT水平的Shannon指数、Ace指数、Chao指数均显著升高(均P<0.05),且以SCA+RT组变化更显著。与sham组相比,CIRI组拟杆菌门、放线杆菌门、脱硫弧菌门、厚壁菌门、双歧杆菌属、norank-f-Muribaculaceae、杜氏杆菌属、拟普雷沃菌属、红蝽菌属_UCG-002、普雷沃菌属菌落相对丰度显著降低,变形菌门菌落、贺菌群属菌落对丰度显著升高(均P<0.05);与CIRI组相比,SCA组、RT组和SCA+RT组拟杆菌门、放线杆菌门、脱硫弧菌门、厚壁菌门、双歧杆菌属、norank-f-Muribaculaceae、杜氏杆菌属、拟普雷沃菌属、红蝽菌属_UCG-002、普雷沃菌属菌落相对丰度显著升高,变形菌门菌落、贺菌群属相对丰度显著降低(均P<0.05),且以SCA+RT组变化更显著。结论头穴丛刺结合康复训练可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能,调节肠道菌群失调,抑制CaM/CaMKⅡ信号通路的活化,从而对脑组织发挥保护作用。

肾元颗粒通过调控FGF23/CaMKⅡ信号通路对糖尿病肾病db/db小鼠心肌肥大与凋亡的影响

目的:通过观察db/db糖尿病肾病(DN)小鼠的心肌肥大和心肌损伤,进而探讨肾元颗粒改善DN小鼠心肌肥大和凋亡的可能作用机制。方法:db/db小鼠45只随机分为模型组、厄贝沙坦组和肾元颗粒组,15只同背景野生型(WT)小鼠为空白组。ELISA检测血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)和尿微量白蛋白含量;全自动生化仪检测肾功能;小鼠肾脏和心脏病理采用HE和Masson染色;Real-time PCR肾脏Kl和心脏ANP、Bax、Bcl-2 mRNA;Western blot检测肾脏Kl和心脏Bax、Bcl-2蛋白;免疫组化检测心脏ANP、p-CaMKⅡ蛋白含量。结果:与空白组比较,模型组小鼠肾单位出现受损,小球系膜基质增多,基底膜增厚,肾小管上皮细胞肥大,心脏心肌细胞排列紊乱,体积增大,伴有明显的胶原纤维沉积,血清FGF23、BUN、Scr和24h尿微量白蛋白含量增加(P<0.01),肾脏Kl mRNA和蛋白显著减少(P<0.01),心脏ANP mRNA、Bax mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达量减少(P<0.01),心脏p-CaMKⅡ蛋白含量增加;灌胃12周后,肾元颗粒组和厄贝沙坦组肾脏和心脏病理表现均显著减轻,血清FGF23含量减少(P<0.05,P<0.01),肾脏Kl和心脏Bcl-2mRNA和蛋白含量增加(P<0.01),心脏ANP mRNA和Bax mRNA及蛋白含量减少(P<0.01),心脏p-CaMKⅡ蛋白表达减少。结论:肾元颗粒可通过上调肾脏Kl蛋白表达,降低CaMKⅡ活性,抑制FGF23/CaMKⅡ信号通路来抑制肥大细胞表达,降低凋亡的发生,达到心肌细胞的保护作用。

miR-145过表达对缺氧诱导心肌细胞焦亡的抑制作用及其机制

目的观察miR-145过表达对缺氧诱导心肌细胞焦亡的抑制作用并探讨其机制。方法将大鼠心肌细胞H9C2分为正常组、缺氧组、缺氧+miR-145组、缺氧+阴性对照组,缺氧+miR-145组、缺氧+阴性对照组分别使用腺病毒包装的miR-145及腺病毒包装的阴性对照序列进行腺病毒感染,正常组、缺氧组不做腺病毒感染处理;24 h后将缺氧组、缺氧+miR-145组、缺氧+阴性对照组细胞转移至缺氧培养箱中培养24 h,正常组不做缺氧诱导。采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-145水平,超氧化物阴离子探针检测细胞内活性氧水平,TUNEL染色及流式细胞术观察细胞焦亡情况,免疫组织化学及实时荧光定量PCR法检测细胞焦亡相关因子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、(IL-1β)、白细胞介素1β(IL-18)水平,Western blotting法检测钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白磷酸化CaMKⅡ、磷酸化NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达。结果心肌细胞miR-145 mRNA相对表达量缺氧+miR-145组>正常组>缺氧组、缺氧+阴性对照组,心肌细胞ROS水平缺氧组、缺氧+阴性对照组>缺氧+miR-145组>正常组,心肌细胞TUNEL阳性率及焦亡率缺氧组、缺氧+阴性对照组>缺氧+miR-145组>正常组,心肌细胞NLRP3蛋白及NLRP3、IL-1β、IL-18 mRNA表达缺氧组、缺氧+阴性对照组>缺氧+miR-145组>正常组,心肌细胞CaMKⅡ、磷酸化CaMKⅡ、NF-κB、磷酸化NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达缺氧组、缺氧+阴性对照组>缺氧+miR-145组>正常组(P均<0.05)。结论miR-145过表达可减轻缺氧诱导的心肌细胞焦亡,其机制可能与抑制CaMKⅡ/NF-κB信号通路有关。

化合物DXL-A-22抗神经病理性疼痛作用及机制研究

目的研究螺环哌嗪季铵盐化合物DXL-A-22抗神经病理性疼痛作用及机制。方法以坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型评价DXL-A-22的抗神经病理性疼痛作用;Westernblot和qPCR技术研究DXL-A-22的作用机制;极限实验评价DXL-A-22的急性毒性。结果与溶媒组比较,DXL-A-22(2、1、0.5mg·kg^-1,i.g.)剂量依赖性提高CCI大鼠机械刺激缩足反应阈值和热刺激缩足潜伏期(P<0.05,P<0.01),术后d7痛阈提高率分别为108%、86%和71%,最大镇痛百分率分别为77%、56%和43%;DXL-A-22(2mg·kg^-1)明显降低背根神经节(DRG)p-CaMKⅡα、p-CREB,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,以及TNF-α、c-FosmRNA表达(P<0.05,P<0.01),抑制率分别为37%、48%、35%、58%、39%和32%;明显降低脊髓TNF-α、c-FosmRNA表达(P<0.01),抑制率分别为47%和72%;无明显毒性反应。结论螺环哌嗪季铵盐化合物DXL-A-22能明显抑制大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤引起的神经病理性疼痛,无明显毒性,其机制可能与抑制DRGCaMKⅡα/CREB和JAK2/STAT3信号通路,降低DRG及脊髓TNF-α、c-FosmRNA表达相关。

淫羊藿苷激活CaMKⅡ-JNK通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞存活和转移特性

目的探讨淫羊藿苷激活Ca2+/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)-c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞存活和转移特性的作用及其机制。方法采用不同浓度(0、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、20、50、100、200、300和400μmol)淫羊藿苷作用于人非小细胞肺癌A549细胞24 h后,应用CCK8法检测细胞存活率,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光法检测vimentin表达情况,Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、E-cadherin和N-cadherin的表达情况以及不同浓度(10、20、50μmol)淫羊藿苷处理后Ca2+/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化情况和单独或联合作用以10μmol JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的影响。结果与0μmol淫羊藿苷组比较,100、200、300和400μmol淫羊藿苷组A549细胞存活率[分别为(72±8)%、(57±7)%、(48±6)%、(38±5)%]均降低(均P<0.01);与对照组比较,10、20、50μmol淫羊藿组侵袭细胞数量[分别为(84±12)、(30±8)、(10±5)个]均减少(均P<0.01),划痕愈合率[分别为(84±7)%、(70±6)%、(45±6)%]均降低(均P<0.01),VEGF[分别为(0.40±0.07)、(0.16±0.04)、(0.05±0.03)]、N-cadherin[分别为(0.70±0.08)、(0.26±0.05)、(0.08±0.04)]和vimentin[分别为(25.5±2.9)、(12.1±2.6)、(5.3±2.0)]表达均降低(均P<0.05),E-cadherin[分别为(0.13±0.05)、(0.44±0.06)、(0.95±0.08)]、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ[分别为(0.16±0.05)、(0.29±0.07)、(0.42±0.07)]和p-JNK/JNK[分别为(0.30±0.06)、(0.46±0.08)、(0.84±0.09)]表达均增加(均P<0.05);且10μmol淫羊藿苷能减弱10μmol SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。结论淫羊藿苷能上调CaMKⅡ、JNK磷酸化水平激活该通路来抑制人非小细胞肺癌A549细胞的存活和转移。

加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马钙调蛋白激酶与丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响

目的探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马钙调蛋白激酶（CaMK）通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的整体调节作用。方法以孤养结合慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠为研究对象，在CaMK、MAPK信号转导通路上关键因子mRNA/蛋白表达及信号通路交汇点CREB1mRNA表达检测的基础上，采用相关分析方法，探讨CaMK、MAPK级联信号转导通路上关键因子CaMK II、RSK蛋白与信号通路交汇点CREB1mRNA的相关性。结果①双向相关分析：模型组、中药组、西药组大鼠海马CaMKⅡ蛋白与CREB1mRNA表达的相关系数分别为r=-0．502（P〈0．01），r=-0．643，（P〈0．01），r=-0．408（P〈0．05）；模型组、中药组、西药组人鼠海马RSK蛋白与CREB1mRNA表达的相关系数分别为r=0．550（P〈0．01），r=0．687（P〈0．01），r=0．407（p〈0．01）。②回归分析（强行投入法）：模型组、中药组、西药组大鼠海马CaMK II蛋白（负向）和RSK（正向）与CREB1 mRNA表达的回归系数分别为：R2=0．472，F=12．983（P〈0．01），R2=0．666，F=28．961（P〈0．01），R2=0．356，F=8．004（P〈0．01）。结论加味温胆汤可通过整体调节CaMK、MAPK信号转导通路，进而上调CREB1mRNA表达发挥抗抑郁效应。

Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ在心力衰竭中的作用机制及中医药治疗应用进展

心力衰竭是一种常见的多发病,是各种心脏疾病发展的终末阶段,发病机制十分复杂,严重危害着人类健康。大量研究表明Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/Calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)在心力衰竭的发生发展中起着重要的作用。中医药在防治心力衰竭方面具有独特优势和良好前景,其中有不少可靶向调节CaMKⅡ的复方和中药有效成分。本文就CaMKⅡ信号通路在衰竭心脏中的作用机制以及近年来中医药通过靶向调节CaMKⅡ信号防治心力衰竭研究进展作主要阐述,以期为临床中医药防治心力衰竭方面提供参考意见并拓展思路。