补肾中药对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴CaMPKⅡ的影响

目的 :研究CaMPKⅡ在肾阳虚发病中的作用及补肾中药的调整作用。方法 :通过液体闪烁仪测定γ 3 2 P ATP参入反应底物的摩尔数 ,用来表示蛋白激酶的活性。结果 :肾阳虚大鼠下丘脑和肾上腺组织中CaMPKⅡ显著升高 ,补肾中药对肾阳虚大鼠下丘脑和肾上腺组织升高的CaMPKⅡ活性具有下调作用。结论 :下丘脑 垂体 肾上腺轴CaMPKⅡ活性的改变 ,与肾阳虚的发病密切相关 ,补肾中药可通过调整下丘脑 垂体

双参通冠方药物血清对缺氧/复氧心肌细胞Ca^(2+)-CaM-CaMPKⅡ信号系统的影响

目的考察双参通冠方(SSTG)药物血清对缺氧/复氧心肌细胞Ca2+-CaM-CaMPKⅡ信号系统的影响。方法培养心肌细胞,建立缺糖缺氧/复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究SSTG药物血清对缺糖缺氧/复氧损伤心肌的作用。荧光分光光度法测定心肌细胞胞质[Ca2+]i,RT-PCR法测定CaM、CaMPKⅡδmRNA表达。结果正常心肌细胞[Ca2+]i、CaM、CaMPKⅡδmRNA表达很低。缺氧/复氧后[Ca2+]i较正常组增高,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达增高(P<0.05),SSTG提取物大鼠灌胃剂量为22.5、45、90 mg.kg-1所取得的药物血清(体积分数为0.1)处理组[Ca2+]i降低,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达降低,与空白血清处理组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧/复氧损伤可导致心肌细胞Ca2+超载,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达增高;SSTG药物血清可对抗心肌细胞Ca2+超载,抑制其胞内受体CaM及Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶CaMPKⅡδ的活性。

高原缺氧复合梭曼中毒脑Ca^(2+)/CaMPKⅡ活性抑制机理

目的 探讨缺氧复合梭曼中毒脑组织Ca2 + /CaMPKⅡ活性抑制机理。方法 本实验采用放射免疫技术 ,观察模拟 4 0 0 0m高原缺氧复合梭曼中毒后 12 ,2 4 ,4 8h脑组织CaM含量以及钙 /钙调蛋白激酶Ⅱ (Ca2 + /CaM -PKⅡ )活性的变化影响。结果 高原缺氧复合梭曼中毒后脑组织CaM含量在中毒后 2 4h明显高于单纯中毒组、缺氧对照组和正常对照组 ;缺氧中毒组脑组织Ca2 + /CaM -PKⅡ活性在中毒后 4 8h明显低于单纯中毒组、缺氧对照组和正常对照组 ;而钙通道拮抗剂尼莫地平 (Nimodipine)可对抗这种改变。结论 CaM、Ca2 + /CaM -PKⅡ在高原缺氧复合梭曼中毒大鼠脑组织损伤机理中起了重要的作用。

血管性痴呆小鼠海马CaMPKⅡ表达变化及哈伯因治疗效果

目的:观察血管性痴呆小鼠海马组织CaMPKⅡ基因的表达水平及哈伯因治疗效果,进而探讨血管性痴呆发病的分子生物学机制。方法:用双侧颈总动脉线结、反复缺血再灌注的方法制备血管性痴呆模型,并进行学习、记忆成绩测试,应用RT-PCR技术检测海马细胞内CaMPKⅡ基因的表达。结果:模型组CaMPKⅡmRNA含量显著低于假手术组、哈伯团组(P<0.05);假手术组和哈伯因组间无明显差别。结论:海马CaMPKⅡ的基因表达减少可能参与了血管性痴呆分子生物学发病机制,而哈伯因提高了海马CaMPKⅡ基因表达的同时,也改善临床症状。

血管性痴呆小鼠海马神经细胞静息态[Ca^(2+)]_i及CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA表达的变化

目的 :观察血管性痴呆小鼠海马神经细胞内静息态游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)和钙调素 (CaM)、CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达水平的变化 ,探讨上述因素在血管性痴呆发病中的作用。方法 :采用双侧颈总动脉线结、缺血 /再灌注的方法 ,制备小鼠血管性痴呆模型 ,并设假手术组作为对照。分别于术后第 2 9d、第 30d进行学习、记忆成绩测试 ,然后快速取海马制备海马活细胞 ,以Fluo 3/AM为荧光探针 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察两组海马神经细胞静息态 [Ca2 + ]i 变化 ,并应用RT PCR技术检测海马神经细胞内CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA的表达水平。结果 :①模型组的学习和记忆成绩均低于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;②模型组神经细胞静息态 [Ca2 + ]i 显著高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;而CaMmRNA、CaMPKⅡmRNA表达水平低于假手术组 ,具有极其显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :海马神经细胞静息态 [Ca2 + ]i增高、CaMmRNA和CaMPKⅡmRNA表达减少是导致小鼠血管性痴呆发生的机制之一。

左旋千金藤啶碱对缺氧纹状体和海马脑片Ca^(2+)/CaMPKⅡ和PKA活性的影响

目的研究左旋千金藤啶碱（ＳＰＤ）对Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性的影响。方法采用大鼠海马及纹状体脑片体外缺血模型，用放射性３２Ｐ－ＡＴＰ掺入法测定Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩ活性。结果体外培养的纹状体和海马脑片在缺血３０ｍｉｎ后，Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性均明显下降，纹状体ＰＫＡ活性增加，于缺血前１０ｍｉｎ加入不同浓度ＳＰＤ后，二酶活性较单纯缺血均有明显改变。

丹参-川芎药对干预大鼠血管性痴呆作用机制

目的:研究丹参-川芎药对干预血管性痴呆大鼠学习记忆能力的机制,及对海马神经元内的[Ca^(2+)]i、CaM、CaMPKⅡ活性的影响。方法:采用反复夹闭颈动脉、注射硝普钠降压、单侧永久性结扎颈动脉技术建立模型,采用水迷宫定位航行试验和空间探索试验测试大鼠在造模前、造模后、干预后的学习记忆能力,观察VD大鼠海马神经细胞[Ca^(2+)]i变化特征,检测海马组织中CaM、CaMPKⅡ的mRNA水平。结果:丹参-川芎高剂量组与尼莫地平组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。丹参-川芎高剂量组穿越原平台区次数与尼莫地平组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但优于丹参-川芎低剂量组(P<0.01)。模型组[Ca^(2+)]i荧光强度高于其他各组(均P<0.01),而尼莫地平组、丹参-川芎高剂量组的[Ca^(2+)]i荧光强度比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。模型组的CaM mRNA、CaMPKⅡmRNA含量低于其他各组(均P<0.01),丹参-川芎高剂量组与尼莫地平组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:丹参-川芎药对能够阻止VD大鼠海马神经细胞[Ca^(2+)]i过度升高,且减少CaM、CaMPKⅡmRNA表达,能有效改善VD大鼠临床症状。

血管性痴呆病因病机与发病机制研究概况

血管性痴呆(vascular dementia,VD)属中医学"呆病"、"痴证"等范畴,为肾精亏虚-髓海不足、痰、浊(水湿)-瘀血等蒙蔽(阻)脑窍、玄府郁阻、浊毒内侵、本虚标实、气血亏虚、三焦气化失司、伏邪内生-损害元神、脏腑功能失调、络脉学说;病理机制包括中枢胆碱能、兴奋性氨基酸、氧自由基、神经细胞凋亡、细胞和分子(海马Ca2+、钙调素CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ-CaMPKⅡ,内皮素-1-ET-1降钙素)、炎性反应、遗传机制、危险等。中医虽然对血管性痴呆发病原因论述较多,但机理尚未明确,未能达成共识,亦有待于临床与实验进一步检验,对呆病诊断也需扩展其内涵。认为现代医学虽在科研上取得一些研究成果,但也存在一定问题,未来应统一实验标准、设计严谨科研方案等,指导临床VD治疗,判断治法方药优劣性及稳定性。