白念珠菌CaPSY2基因的敲除和功能研究

目的:研究人体病原真菌白念珠菌CaPsy2蛋白的功能,探讨它在DNA损伤检查点修复过程中所起的作用。方法:采用同源重组的方法构建CaPSY2双等位基因缺失株,并利用倍比稀释法探讨CaPSY2缺失株在含有遗传毒性试剂平板上的表型。结果:PCR检测结果显示CaPSY2双等位基因缺失株构建成功,而表型结果显示CaPsy2缺失会导致缺失株对遗传毒性试剂敏感,且这种敏感性表型可以被外源的CaPSY2基因互补。结论:CaPsy2蛋白参与DNA损伤修复过程,并且可能作为CaPph3的调节亚基而发挥作用。

白念珠菌蛋白磷酸酯酶CaPph3和调节亚基CaPsy2在调节菌丝发育中的作用

目的:研究白念珠菌蛋白磷酸酯酶CaPph3及调节亚基CaPsy2在调控白念珠菌菌丝发育过程中的作用。方法:利用遗传毒性试剂HU和MMS分别处理CaPPH3和CaPSY2缺失株,观察移除毒性试剂后缺失株的菌丝发育情况。结果:(1)缺失株的表型鉴定:在含有遗传毒性试剂MMS、HU以及CP平板上,与野生型菌株RM1000相比,CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双缺失株均表现出明显生长缺陷,且各缺失株间差异不大。(2)缺失株对遗传毒性试剂敏感度测定:用MMS和HU处理各菌株后,野生型菌株的存活率约95%,而CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株存活率明显下降,且相互之间差异不大。(3)缺失株菌丝发育实验:用0.020%MMS处理各菌株4小时后,野生型菌株RM1000还维持酵母态,而CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株已出芽形成菌丝;而移除MMS后野生型菌株形成菌丝,6小时后不再延长,在菌丝顶端形成酵母态细胞,而CaPPH3、CaPSY2和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株仍维持菌丝态。用40 mmol/L HU处理各菌株4小时后,各菌株都维持酵母态;而移除HU后野生型菌株仍维持酵母态,而CaPPH3缺失株、CaPSY2缺失株和CaPPH3 CaPSY2双基因缺失株则会逐渐形成菌丝。结论:CaPph3和CaPsy2参与调节遗传毒性试剂诱导的白念珠菌的菌丝发育。