从HNRNPC基因角度探讨胰岛素抵抗发生机制

目的以HNRNPC基因为研究对象,在细胞水平上,探讨HNRNPC基因、CaSR、PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法建立人肝癌HepG2细胞IR模型,采用基因沉默/过表达技术干扰IR细胞及正常HepG2细胞中HNRNPC的表达。利用qRTPCR、Western blot技术检测HNRNPC表达水平,以检测沉默及过表达效率;通过Western blot技术检测各组细胞内CaSR蛋白表达量,同时检测IR相关信号通路PI3K/Akt的磷酸化水平;通过GOD-POD实验检测各组细胞葡萄糖消耗量。结果IR-HepG2组HNRNPC基因及蛋白表达升高,CaSR蛋白表达降低,PI3K/Akt信号通路被抑制,细胞葡萄糖消耗量降低;成功沉默及过表达HNRNPC后,IR-HNRNPC-siRNA组CaSR蛋白表达升高,PI3K/Akt信号通路抑制状态有所改善,细胞葡萄糖消耗量提高;HepG2-HNRNPC-OE组CaSR蛋白表达降低,PI3K/Akt信号通路被抑制,细胞葡萄糖消耗量降低。结论HNRNPC基因的高表达可下调CaSR表达,从而降低PI3K/Akt信号通路活性,这可能是IR的发生机制之一。

日粮不同蛋白水平对猪小肠CaSR基因表达及胃肠激素分泌的影响

本试验旨在研究日粮蛋白水平对不同生理阶段猪胃肠道钙敏感受体(Calcium-sensing receptor,Ca SR)基因表达、血液胃肠激素分泌的影响,探讨蛋白水平与Ca SR基因表达和胃肠激素分泌的关系。选择健康、体重相近约10 kg(9.57±0.64)kg杜×长×大三元杂交断奶仔猪、35kg(36.47±0.20)kg生长猪和60 kg(62.30±0.07)kg肥育猪各18头,分阶段饲养,每阶段18头猪随机分为3组,每组6头,单栏饲养,以玉米-豆粕型日粮为基础,断奶仔猪日粮粗蛋白水平为20%、17%、14%,生长猪日粮粗蛋白水平为18%、15%、12%,肥育猪日粮粗蛋白水平为16%、13%、10%,饲养期分别为45、30、50 d,试验结束后屠宰,采集前腔静脉血液、小肠各部位组织,测定血液中胃肠激素水平、小肠各部位组织中Ca SR的表达。结果表明:当日粮蛋白水平降低后,不同阶段猪小肠Ca SR基因表达下调(P<0.05),断奶仔猪血清胆囊收缩素(CCK)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和酪酪肽(PYY)浓度显著降低,生长猪血清CCK、葡萄糖促胰岛素肽(GIP)浓度也明显下降,而肥育猪只有血清GIP浓度显著降低(P<0.05);相关性分析表明,断奶仔猪空、回肠Ca SR表达与血中GLP-1和GIP显著正相关(P<0.05),回肠Ca SR表达与血中PYY存在显著正相关(P<0.05);生长猪十二指肠Ca SR表达与CCK显著正相关(P<0.05),而空、回肠Ca SR表达则与GIP显著正相关(P<0.05);肥育猪小肠各段Ca SR表达与胃肠激素无明显相关。我们的结果说明,降低猪日粮蛋白水平可下调小肠Ca SR基因表达和血液中CCK等胃肠激素的分泌,日粮蛋白水平对胃肠激素分泌的影响可能通过Ca SR介导。