阳离子卟啉对宫颈癌细胞株Caski的光动力学杀伤效应

目的探讨阳离子卟啉(TMPyP4)对宫颈癌细胞株Caski的光动力学杀伤效果和可能作用机制,为光动力学治疗(PDT)在宫颈癌动物荷瘤模型以及临床应用中提供理论依据。方法以宫颈癌细胞株Caski为研究对象,以TMPyP4为光敏剂,按照不同处理因素分为正常对照组、单纯PDT组、单纯TMPyP4组和TMPyP4-PDT组。采用四甲基偶氮唑蓝法检测TMPyP4-PDT对宫颈癌细胞株Caski体外生长的抑制作用,光镜下观察细胞形态变化。采用Annexin V-PI双标记法检测细胞凋亡率。采用实时荧光定量PCR检测TMPyP4-PDT对Caski细胞Ki-67、MCM2、P16、CA-Ⅸ和NF-κB mRNA表达水平的影响。结果单纯TMPyP4组和TMPyP4-PDT组对细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性;单纯PDT组对细胞增殖的抑制作用不明显(P>0.05)。光镜下可观察到单纯PDT组贴壁细胞多,无核固缩及核碎裂样改变;单纯TMPyP4组及TMPyP4-PDT组细胞出现胞质空泡化、细胞体积缩小、细胞核碎裂及凋亡小体形成等。流式细胞术检测结果显示,TMPyP4-PDT可诱导Caski细胞凋亡,且随着药物浓度的增加,细胞凋亡百分比增加。实时荧光定量PCR检测发现,随着药物浓度的增加,Caski细胞Ki-67、MCM2、CA-Ⅸ和NF-κB mRNA表达水平明显降低,P16 mRNA表达水平升高,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 TMPyP4-PDT对宫颈癌细胞株Caski有明显的杀伤作用,其机制可能与正性调节P16以及负性调节Ki-67、MCM2、CA-Ⅸ和NF-κB mRNA表达量有关。

植酸酮对宫颈癌细胞株中HPV16/18 E6/E7 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察植酸酮对宫颈癌细胞株中HPV16/18 E6/E7 mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养Caski细胞株(含HPV16)与Hela细胞株(含HPV18),将所有细胞分成实验1、2、3、4组和对照组,每组均包含Caski细胞和Hela细胞。实验1、2、3、4组分别加入含58.6、117、586、5 860 mg/L植酸酮的培养液,对照组加入不含植酸酮的培养液。各组培养72 h后,采用real-time PCR法分别检测HPV16/18 E6/E7 mRNA,采用Western blotting法检测E6/E7蛋白。结果实验1、2、3、4组同一型别细胞中E6/E7 mRNA及蛋白相对表达量低于对照组,且实验1、2、3、4组E6/E7 mRNA及蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。各实验组内,Caski细胞中E6/E7 mRNA相对表达量低于Hela细胞(P均<0.05)。各实验组内同一型别细胞中,E6 mRNA相对表达量低于E7 mRNA(P均<0.05)。结论植酸酮可下调人宫颈癌细胞株中HPV16/18 E6/E7 mRNA及蛋白表达,且作用呈剂量依赖性;植酸酮对HPV16 E6/E7 mRNA的抑制作用强于HPV18 E6/E7 mRNA,并可能以抑制E6 mRNA表达为主导。

掌叶半夏提取物的有效部位对体外培养宫颈癌细胞的促凋亡作用

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的两种宫颈癌细胞株的作用,力求寻找一种能有效防治女性宫颈病变的纯中药制剂。方法:将4种不同浓度PE分别作用于Hela和Caski细胞1-5天,用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,溴化噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:PE对两种宫颈癌细胞株的生长均表现出明显的抑制作用,流式细胞术检测结果显示PE作用后两种细胞株均呈现出凋亡,且随着作用时间延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论:PE对两种宫颈癌细胞株有明显的抑制生长和促凋亡作用;为进一步研究PE的药物作用机制和新药的研制开发奠定了初步的基础。

掌叶半夏提取物的有效部位对宫颈癌细胞株HPVE6和P53基因表达的影响

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(PE)对CaSki和HeLa细胞人乳头瘤病毒(HPV)E6基因和P53基因表达的影响,进一步阐明PE的抑癌机制。方法:0.15mg/mL的PE作用于CaSki和HeLa细胞24h后,采用RT-PCR方法检测两种细胞HPVE6和P53 mRNA表达的变化,采用Western Blot检测CaSki和HeLa细胞HPVE6、P53蛋白表达的变化。结果:0.15mg/mL的PE作用24h后CaSki和HeLa细胞HPVE6 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而P53mRNA和蛋白的表达均明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:PE可以明显抑制CaSki和HeLa宫颈癌细胞株HPVE6基因的表达、促进其P53基因的表达,这可能是PE抗宫颈癌作用的关键环节。

掌叶半夏提取物的有效部位对CaSki的促凋亡作用机制研究

目的:前期的研究已证实中药掌叶半夏提取物的有效部位(pinellia extract fraction,PE)对体外培养的宫颈癌细胞株CaSki和HeLa有促凋亡作用,通过本次研究进一步明确PE对CaSki的促凋亡作用机制。方法:采用RT-PCR方法检测0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2和Bax mRNA表达的变化,采用Western Blot检测0.15g/LPE作用24h后CaSki细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果:0.15g/L的PE作用24h后CaSki细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而Bax mRNA和蛋白的表达均明显上升。结论:PE对CaSki宫颈癌细胞株促凋亡作用之一是抑制Bcl-2基因的表达、促进Bax基因的表达。这为进一步研究PE的抗宫颈癌作用机制以及新药的研制开发奠定了一定的实验基础。