基于PGE2/COX-2信号通路探究扶正祛瘀解毒方对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的基于前列腺素(PG)E2/环氧合酶(COX)-2信号通路探究扶正祛瘀解毒方对结肠癌(CC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法CCK-8检测不同浓度扶正祛瘀解毒方对CC细胞的毒性。将CC细胞系HCT-116细胞分为对照组(正常培养)、塞来昔布组(30 mg/L塞来昔布)、扶正祛瘀解毒方组(1 g/L扶正祛瘀解毒方)和联合组(2 mg/L PGE2和1 g/L扶正祛瘀解毒方)。集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中PGE2含量;Western印迹检测细胞中COX-2、PGE2受体EP2和EP4蛋白水平。结果扶正祛瘀解毒方和塞来昔布均可通过抑制PGE2/COX-2信号通路抑制HCT-116细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,但扶正祛瘀解毒方对HCT-116细胞的效用略低于塞来昔布。外源添加PGE2可在一定程度上逆转扶正祛瘀解毒方对HCT-116细胞的作用。结论扶正祛瘀解毒方可抑制CC细胞的恶性生物学行为,此过程可能是通过抑制PGE2/COX-2信号通路实现的。

清肠温中方含药血清调控NLRP6途径对Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型MUC2表达的影响

目的:研究清肠温中方含药血清调控NLRP6途径影响Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型MUC2分泌的作用机制。方法:使用SD大鼠制备清肠温中方含药血清;Caco-2/HT29-MTX细胞共培养构建单层肠上皮细胞模型;IL-1β刺激共培养细胞模拟体外肠道炎症模型;si-NLRP6质粒转染干扰NLRP6,研究清肠温中方作用机制。qPCR检测NLRP6、IL-18的mRNA表达水平;Western blot检测NLRP6、IL-18蛋白表达水平;免疫荧光染色观察MUC2表达。结果:正常培养的Caco-2/HT29-MTX细胞中,NLRP6敲除后,MUC2表达明显减少。清肠温中方含药血清增加IL-1β诱导的细胞炎症模型中NLRP6和IL-18 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且一定程度上抵消si-NLRP6的抑制作用。与模型组相比,清肠温中方含药血清干预后,促进MUC2蛋白表达恢复,si-NLRP6后一定程度上削弱了清肠温中方的作用。结论:清肠温中方含药血清通过调控NLRP6信号途径,进一步调节MUC2分泌,修复UC黏液屏障损伤。

不同压强持续性CO_(2)气腹对结肠癌细胞体内侵袭能力的影响

目的探讨不同压强持续性CO_(2)气腹对结肠癌细胞体内侵袭能力的影响。方法选用人结肠癌细胞株SW1116,将细胞放置在含有10%小牛血清的RPMI1640培养液中,置入37℃、5%CO_(2)培养箱中常规培养,建立体外气腹模型,将SW1116细胞置入其中。将SW1116细胞分为5组,分别放置在不同CO_(2)气体压强环境中,即常规培养组(对照组:5%CO_(2)、37℃)、A组(6 mmHgCO_(2)气腹)、B组(9 mmHgCO_(2)气腹)、C组(12 mmHgCO_(2)气腹)、D组(15 mmHgCO_(2)气腹)各20份,维持1 h后取出细胞。在气腹模型试验结束后,继续常规培养24、48、72 h后对细胞进行体外细胞侵袭试验。结果对照组在经过气腹处理后,从气腹结束到72 h后,细胞侵袭荧光强度增强,差异均有统计学意义(P<0.05);A组随着时间的推移,荧光强度略微增加,B、C、D组随着时间的推移,变化并不显著;在经过气腹处理后即刻以及24、48、72 h后,D组结肠癌细胞侵袭荧光强度减弱,明显低于对照组、A组、B组、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论不同压强持续CO_(2)气腹对结肠癌细胞体内侵袭能力产生一定的影响,高压强CO_(2)气腹的建立对结肠癌细胞的侵袭能力产生了一定的抑制效果;CO_(2)气腹72 h内不同作用时间对结肠癌细胞的侵袭能力未见明显影响。

构建过表达TRPV1基因的Caco-2细胞株

采用慢病毒载体系统构建辣椒素受体基因TRPV1过表达的人结直肠腺癌细胞Caco-2稳定重组株.将双酶切后的慢病毒空载体pCDH和TRPV1全基因PCR产物通过T4 DNA Ligase连接,构建包含TRPV1基因的过表达载体pCDH-TRPV1.将过表达载体pCDH-TRPV1转化DH 5α感受态细菌,大量扩繁后提取过表达载体pCDH-TRPV1的质粒,与psPAX2和pMD两种含有慢病毒包装所必需元件的质粒混合,再与脂质体混合制备脂质体-载体混合液.将脂质体-载体混合液转染至单层的293T细胞中,培养48h进行病毒包装.收集富含慢病毒颗粒的293T细胞上清液,超离心纯化成浓缩病毒,然后再与polybrene一起感染单层Caco-2细胞,通过GFP绿荧光信号来筛选获得TRPV1基因过表达的稳定细胞株.通过Realtime PCR方法和Western-blot检测TRPV1的mRNA表达量及蛋白表达量,结果表明,Caco-2-TRPV1重组细胞株的TRPV1的mRNA表达量及蛋白表达量均显著高于Caco-2-GFP对照细胞(P<0.05).成功构建了TRPV1基因过表达的稳定细胞株,为后续辣椒素降脂机理的研究提供了正向调控细胞模型.

依匹哌唑对结肠癌细胞系HCT116和SW620细胞内胆固醇合成的影响及其机制

目的观察依匹哌唑对结肠癌细胞系HCT116和SW620细胞内胆固醇合成的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HCT116、SW620细胞,分别分为依匹哌唑组和对照组,依匹哌唑组加入含20μmol/L依匹哌唑的培养基,对照组加入等量完全培养基。两组细胞继续培养24 h后,采用微板法检测细胞中总胆固酮(TC),采用实时荧光定量PCR法检测人3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)m RNA、人3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶1(HMGCS1)m RNA,采用Western Blotting法检测HMGCR、HMGCS1、p-PI3K、p-AKT、SREBP2蛋白。结果依匹哌唑组HCT116、SW620细胞中TC含量均低于对照组(P均<0.05)。依匹哌唑组HCT116、SW620细胞中HMGCR m RNA、HMGCS1 m RNA相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。依匹哌唑组HCT116、SW620细胞中HMGCR、HMGCS1、p-PI3K、p-AKT、SREBP2蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。结论依匹哌唑可抑制HCT116和SW620细胞的细胞内胆固醇合成,其机制可能与依匹哌唑抑制PI3K/Akt-SREBP2信号通路蛋白的表达有关。

东亚钳蝎毒素对人结肠癌细胞Caco-2的增殖抑制作用研究

为研究东亚钳蝎毒素对人结肠癌细胞Caco-2增殖的影响,以不同浓度的东亚钳蝎毒素(10、20、40μg/m L)干预体外培养的Caco-2细胞,分别于24、48 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,观察毒素对Caco-2细胞的增殖抑制作用,运用淋巴细胞转化试验和乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测蝎毒素对Caco-2细胞的作用途径。结果表明:东亚钳蝎毒素不仅能抑制Caco-2细胞的增殖而且能促进淋巴细胞转化,且毒素对Caco-2细胞增殖的抑制作用具有浓度和时间的依赖关系,随浓度加大和时间延长,对Caco-2细胞增殖的抑制作用增强。

黄皮疣柄牛肝菌多酚提取及对Caco-2结肠癌细胞抑制作用研究

以黄皮疣柄牛肝菌为原料,乙醇为提取溶剂,采用Folin-Ciocalteu法测定多酚含量,研究了乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间对多酚得率的影响。在单因素实验的基础之上,通过正交实验优化提取工艺参数,并测定了所得多酚组成及其对Caco-2结肠癌细胞的抑制作用。结果表明,最佳提取工艺条件为:温度为80℃,乙醇浓度为50%,料液比为1∶25 g/m L,提取1 h。在此提取工艺条件下,最佳提取次数为2次时,黄皮疣柄牛肝菌多酚的得率为5.46%±0.04%;在18种酚类物质中,在黄皮疣柄牛肝菌中检出5-磺基水杨酸、儿茶素和肉桂酸等8种多酚类物质,其中5-磺基水杨酸含量最高为779.00 mg/100 g;黄皮疣柄牛肝菌多酚对Caco-2结肠癌细胞产生一定程度的抑制作用,当其浓度为175μg/m L时,抑制率达55.07%。

共轭亚油酸混合物对人结肠癌细胞(Caco-2)的抑制作用

研究不同浓度、不同作用时间的共轭亚油酸混合物对人结肠癌细胞Caco-2增殖的影响。采用体外细胞培养方法,通过MTT试验,观察不同浓度、不同作用时间的共轭亚油酸混合物对Caco-2细胞的增殖抑制作用。结果表明:共轭亚油酸混合物抑制了Caco-2细胞的增殖,且对Caco-2细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间密切相关。共轭亚油酸混合物对人结肠癌细胞Caco-2的增殖有抑制作用。

共轭亚油酸诱导人结肠癌细胞Caco-2凋亡的作用

共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)有着多种异构体以及多种生理活性,如抗癌、减肥、抗动脉粥样硬化等。本研究主要对c9,t11-CLA和t9,t11-CLA两种异构体的混合物诱导人结肠癌细胞Caco-2凋亡的作用及可能机制进行了探讨。采用MTT方法、透射电镜观察、流式细胞术检测和RT-PCR方法,研究了CLA混合物抑制Caco-2细胞增殖,诱导Caco-2细胞凋亡的作用及可能机制。实验结果证明,c9,t11-CLA和t9,t11-CLA混合物能抑制Caco-2细胞的增殖,并可诱导Caco-2的凋亡。随着所用的CLA混合物浓度的增加以及作用时间的延长,细胞凋亡率增加。通过RT-PCR分析,Caco-2细胞中的caspase 3的mRNA的表达随着CLA混合物浓度的增加而上调。这两种CLA的混合物可抑制Caco-2细胞的增殖,诱导Caco-2的凋亡,而caspase 3的表达上调可能与细胞凋亡密切相关。

JAK2-STAT3通路介导牙龈卟啉单胞菌促结肠癌Caco-2细胞增殖的研究

目的研究牙周致病菌—牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)对人结肠癌Caco-2细胞增殖和炎症因子表达的影响,及JAK2-STAT3通路是否参与P.g对Caco-2细胞增殖的调控,为进一步探讨P.g与结肠癌之间的关系提供实验依据。方法体外培养Caco-2细胞,选择不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的P.g(0、1、10、25)刺激12、24、48 h,CCK8检测P.g对Caco-2细胞增殖的影响。设置刺激时间分别为12、24、48 h,MOI=0为对照组,MOI=1、10、25为实验组。qRT-PCR、Western blot检测各组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、信号转导与转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、蛋白酪氨酸激酶2(janus kinase 2,JAK2)基因和蛋白/磷酸化蛋白表达情况。结果P.g感染Caco-2细胞后,与对照组(MOI=0)相比,MOI=1和MOI=10时,P.g在12、24、48 h时对Caco-2细胞有持续刺激作用。与对照组相比,P.g感染Caco-2细胞中促炎因子IL-6及相关增殖通路因子STAT3、JAK2 mRNA表达及IL-6、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达增加,且具有浓度和时间依赖性(P<0.05)。同时,P.g感染Caco-2细胞中抑炎因子IL-10的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。添加JAK2抑制剂AZ960后,P.g感染Caco-2细胞的增殖减弱,STAT3、JAK2 mRNA表达及p-STAT3、p-JAK2蛋白表达降低(P<0.05)。结论P.g可促进结肠癌细胞系Caco-2的增殖,并且P.g作用于Caco-2细胞后可能通过JAK2-STAT3通路促进细胞增殖,同时促进促炎因子IL-6、抑制抑炎因子IL-10的表达,为细胞营造利于增殖的炎性环境,这可能是P.g影响Caco-2细胞增殖的机制之一。

苦荞麸皮多酚抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖活性研究

研究了产自重庆酉阳的苦荞(Fagopyrum tartaricum L.Gaerth,FG1)麸皮和四川西昌的苦荞(Fagopyyrum tartaricum L.Gaerth,FG2)麸皮中酚类化合物的含量、抗氧化和抗增殖活性。结果表明:FG1和FG2 2种苦荞麸皮总酚含量分别为(26.40±0.41)和(27.00±0.72)mg GAE/g DW,且游离态是其酚类化合物的主要存在形式(约占其总酚含量的93%);2种苦荞麸皮酚提取物均表现出一定的抗氧化性,并且FG2的抗氧化能力强于FG1(P<0.05),FG1和FG2的DPPH自由基清除能力总IC50值分别为(39.56±2.76)和(24.69±0.33)μg·mL^(-1);还原力总EC_(50)值分别为(97.92±1.4)和(73.18±4.32)μg·mL^(-1);在抗增殖试验中,与对照组相比,FG1和FG2游离酚提取物均能明显抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖(P<0.05)。然而,在不产生细胞毒性的浓度范围内,其结合酚提取物却表现出极弱的抗增殖作用。

熊去氧胆酸对结肠癌细胞株Caco-2增殖及凋亡的影响

目的通过观察熊去氧胆酸(UDCA)对结肠癌细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响,以探讨其对结直肠癌化学预防的机制。方法体外培养人结肠癌细胞株Caco-2,用不同浓度UDCA进行UDCA干预,检测其对细胞增殖、凋亡的作用。结果随着UDCA浓度增高和作用时间延长,细胞增殖抑制率升高,凋亡比率增大。结论UDCA能抑制人结肠癌细胞株Caco-2增殖,促进其凋亡。

东亚钳蝎毒素对Caco-2人结肠癌细胞的体外药理学研究

研究东亚钳蝎毒素对人结肠癌细胞Caco-2增殖的影响。以不同浓度的东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）毒素（10、20、40滋g/mL）干预体外培养的Caco-2细胞，分别于24 h、48 h后，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法，观察毒素对Caco-2细胞的增殖抑制作用。运用淋巴细胞转化实验和乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测蝎毒素对Caco-2细胞的作用途径。结果表明：东亚钳蝎毒不仅能抑制Caco-2细胞的增殖而且能促进淋巴细胞转化，毒素对Caco-2细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间密切相关。

c9,t11-CLA对人结肠癌细胞(Caco-2)的抑制作用

采用体外细胞培养方法,通过MTT实验,研究了c9,t11-CLA(Conjugated Linoleic acid,CLA)在不同浓度,(0,25,50,100,200μmol/L)、不同作用时间(1,2,3,4 d)下,对人结肠癌细胞Caco-2增殖的影响。结果表明,c9,t11-CLA抑制了Caco-2细胞的增殖,且对Caco-2细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间密切相关。

熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究

为了探究熊猫豆的抑制肿瘤活性及其诱导Caco-2凋亡的机制，采用80％丙酮浸提法制备熊猫豆粗提物，通过MrIYr法测定其对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制效果，琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、酶联免疫分析等技术与方法检测细胞周期、DNA及凋亡相关蛋白相对表达量的变化。结果发现，与空白对照组相比，0．1～1．0mg／mL熊猫豆丙酮提取物对Caco-2细胞增殖有明显的抑制作用，且呈现剂量效应关系，IC50为0．72mg／mL。0．4、0．6、0．8mg／mL熊猫豆丙酮提取物处理72h后的Caco-2细胞，可以观察到典型的凋亡细胞的梯状DNA条带，细胞周期G1期延长，CytC、caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均有显著上升。熊猫豆丙酮能够抑制结肠癌细胞Caco-2增殖，这种抑制作用是通过阻滞细胞周期和诱导线粒体通路介导的细胞凋亡实现的。

小檗碱抑制结肠癌细胞中COX-2表达作用的研究

目的：研究小檗碱(Ber)抑制肿瘤细胞中环氧合酶-2(COX-2)表达与时间及浓度的关系，探讨Ber作为抗肿瘤药物的可能。方法：以结肠癌细胞系．HT-29为研究对象，培养后加入不同浓度的Ber，用荧光定量PCR法观察其对COX-2的抑制作用，MTT法检测Ber对癌细胞的杀伤作用。结果：在浓度大于0．25μmol·L-1时Ber对COX-2有抑制作用，与时间、浓度正相关。在浓度大子3．0μmol·L-1时对癌细胞有杀伤作用。结论：Ber可抑制COX-2及癌细胞生长，推测Ber有一定的抑癌作用，可望成为一种新型的抗癌药。

p38MAPK在结肠癌细胞凋亡中的作用及与COX-2的关系

目的探讨结肠癌细胞p38MAPK介导celecoxib(COX-2选择性抑制剂)抗肿瘤的作用及与COX-2的关系。方法用MTT法检测celecoxib对人结肠癌HT-29细胞生长的作用,用Western blot法测定各组细胞COX-2和Phosph-p38MAPK蛋白表达量,采用流式细胞术检测celecoxib和SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)作用后HT-29细胞凋亡和细胞周期分布。结果p38MAPK和COX-2蛋白表达量与对照组(0.23±0.12)(0.95±0.14)相比,celecoxib可使p38MAPK蛋白表达水平明显升高(0.62±0.11),而使COX-2蛋白表达水平降低(0.44±0.11);SB203580使p38MAPK(0.12±0.05)及COX-2蛋白(0.23±0.13)表达水平均降低;SB203580和celecoxib共同作用后,p38MAPK表达量介于celecoxib和SB203580作用之间(0.43±0.12),COX-2表达量下降最为显著(0.15±0.10)。celecoxib和celecoxib+SB203580均可显著诱导HT-29细胞凋亡(P<0.01和P<0.05),与对照组(4.31%)相比,其凋亡率分别为40.95%、26.24%。结论在HT-29细胞中,celecoxib可通过活化p38MAPK而诱导结肠癌细胞凋亡,p38MAPK是COX-2的上游激酶,COX-2的表达水平受p38MAPK调控,并且COX-2可能对p38MAPK有负反馈调节作用。celecoxib是通过COX-2及其以外的p38MAPK通路诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用的。

Genistein对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察金雀异黄素(Genistein)对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分别加入6.25、12.5、25、50、100μg/mL的Genistein进行培养,观察其生长、增殖、凋亡情况并检测其中的Bcl-2、Bax蛋白。结果 25、50μg/mL的Genistein作用48 h后,HT-29细胞的生长受抑制,凋亡率上升(P均<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.01),Bax蛋白表达上升(P均<0.01),呈剂量依赖性(P<0.05)。各浓度的Genistein作用48 h后对HT-29细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P均<0.05)。结论 Genistein既可以抑制HT-29细胞的生长及增殖,又可以诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调HT-29细胞Bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关。

三氧化二砷联合顺铂对人结肠癌细胞株colon26抑制作用机理的研究

目的:探讨三氧化二砷(ArsenicTrioxide,As2O3)联合顺铂(Cisplatin,CDP)对人结肠癌细胞株colon26的抑制作用及其机制。方法:用MTT法检测CDP和As2O3对colon26细胞的半数抑制浓度(IC50)及其抑制率。用荧光染色法琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡形态学变化。用流式细胞术分析细胞周期、细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:IC50浓度的As2O3、CDP和1/2IC50(CDP)+1/2IC50(As2O3)对colon26细胞的抑制率分别为50.13±0.29%、55.26±0.63%和75.82±0.24%。AO/PI双荧光染色观察,正常对照组、As2O3组、CDP组、联合组细胞凋亡比率依次增加。As2O3处理组G2/M期细胞明显增多,而CDP处理组G0/G1期细胞明显增多,联合用药组则主要表现为S期细胞增多,组间差异有显著性(P<0.01)。CDP处理组与对照组相比Bcl-2/Bax的表达无变化,As2O3与CDP联合作用时和As2O3单独作用时相比,Bcl-2/Bax无变化。结论:低浓度As2O3和CDP联合应用与两药高浓度单独应用相比,对colon26细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强。As2O3联合CDP抗colon26细胞的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

36种蔬菜抑制肝癌HepG2和结肠腺癌Caco-2细胞增殖活性评价

为明确36种中国主要消费蔬菜多酚提取物的总酚含量和抑制人肝癌细胞Hep G2和人结肠腺癌细胞Caco-2增殖活性,分别采用Folin-Ciocalteu法确定了蔬菜提取物的总酚含量,采用亚甲基蓝法确定了其抗Hep G2和Caco-2细胞增殖的活性,分析了总酚含量与抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性之间的相关性。结果表明,36种蔬菜每百克中没食子酸当量:芥蓝(973.09±31.29)μmol/hg,莲藕(920.55±29.00)μmol/hg,它们的总酚含量最高;丝瓜(44.94±4.16)μmol/hg,其总酚含量最低。在可测出抗增殖EC50值的蔬菜中,韭菜(15.96±0.88)mg/m L和蒜苔(17.54±0.03)mg/m L,它们的抗Hep G2细胞增殖的活性最强;上海青(390.52±17.63)mg/m L和空心菜(394.25±11.89)mg/m L,它们的活性最弱。韭菜抗Caco-2细胞增殖的活性最强,为(21.08±1.67)mg/m L;青尖椒的活性最弱,为(390.17±4.78)mg/m L。这些蔬菜的抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性与其总酚含量相关性均不显著(R2=0.027 1,p>0.05;R2=0.151 3,p>0.05),表明蔬菜的抗肿瘤活性不能单从其多酚含量的高低来推测。