Response Surface Optimized Extraction of Flavonoids from Cacumen platycladi and Antioxidant Activities In vitro

[Objectives]To explore the optimal extraction process and the antioxidant activity of flavonoidsof Cacumen platycladi. [Methods]FCPwas obtained from C. platycladi by a new set extraction process of microwave-assisted extraction,freeze thawing,superfine crushingand freeze drying technology and purification. On the basis of single-factor tests,the quadratic regression parasitism model was established by the extraction amount of total flavonoids with microwave power,alcohol concentration,and liquid-to-solid ratio through the response surface methodology. [Results] The optimal extraction conditions were microwave power of 757 W,alcohol concentration of 69%,liquid-to-solid ratio of21∶ 1,with the optimal extraction yield of 15. 302 9 mg/g. Under the real conditions( microwave power of 800 W,alcohol concentration of69%,liquid-to-solid ratio of 21∶ 1) in our laboratory,the maximum yield of total flavonoids was 15. 9 mg/g,the results fitwell with the prediction of quadratic regression parasitism model. The good antioxidant activity has been determined byscavenging effect of FCP on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl( DPPH) radical and superoxide anion free radical with the scavenging yield of 70. 2% and 68. 8% respectively. [Conclusions]All results established a good foundation for furtherdevelopment of C. platycladi products.

侧柏叶的药效成分和分析方法研究进展

总结了侧柏叶及其炮制品的药效成分和分析方法。侧柏叶中的黄酮类、萜类和挥发油可能是其生发作用的物质基础,黄酮类成分可能是其止血作用的药效成分。侧柏叶的分析方法有液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法和薄层色谱法。后续建议继续深入研究侧柏叶的药效成分,并在此基础上选用合适的分析方法对其质量进行评价。

响应面法优化水蒸气提取侧柏叶精油工艺研究

侧柏叶(Platycladi Cacumen)为中药材,其精油对多种腐败菌和致病菌均具有抗菌活性,有望作为天然抗菌剂应用于食品工业和医药领域。为寻找侧柏叶精油最佳提取工艺,为今后的开发利用提供科学依据,采用水蒸气蒸馏法提取侧柏叶精油,并结合单因素试验和响应面法优化提取工艺。结果表明:各参数对于侧柏叶精油提取率的影响比较为:蒸馏时间>NaCl浓度>液料比。在考虑经济可行性条件下,最佳提取条件为NaCl浓度2.3%、料液比1:8.0 g/mL、蒸馏时间2.0 h,实际提取率为1.22%。

侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以ERG-3为靶点发挥抗真菌作用

红色毛癣菌(Trichophyton rubrum,T.rubrum)是皮肤癣最主要病原;侧柏叶(Cacumen Platycladi)是侧柏[Platycladus orientali s(L.)Franco]的干燥嫩枝梢及叶,被《苗族医学》收录用于治疗皮肤癣。本研究旨在探讨侧柏叶抗T.rubrum的主要活性物质及其抗真菌机制,为抗皮肤癣新药研发提供帮助。本研究通过测定最小抑菌浓度和孢子萌发率分析了侧柏叶活性物质对T.rubrum的抑菌活性,使用电镜观察T.rubrum菌丝形态和孢子超微结构,并检测侧柏叶活性物质对T.rubrum细胞膜通透性、完整性和麦角甾醇含量的影响,从而阐述侧柏叶活性物质对T.rubrum抑菌机理,最后采用GC-MS和qRT-PCR方法找到其抗T.rubrum的作用靶点。结果显示,侧柏叶石油醚部位的α-蒎烯为主要抗菌活性成分,MIC为32μg·mL^(-1),极显著抑制孢子萌发(P<0.01);α-蒎烯可致细胞膜发生明显损伤和内容物流出、通透性极显著增加(P<0.01)以及24 h内细胞膜中麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量显著下降(P<0.05);引起脂质色谱图中ERG3活性抑制相关的“麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇”色谱峰出现;可极显著降低ERG3的相对表达量(P<0.01)。结果表明,α-蒎烯是侧柏叶中发挥抗T.rubrum活性最主要成分且以ERG3为其抗真菌靶点。

基于HPLC指纹图谱结合化学模式识别评价侧柏叶的质量

目的 建立不同产地侧柏叶的HPLC指纹图谱,并采用化学模式识别评价侧柏叶质量。方法 采用HPLC法。以ZORBAX Eclipse plus-C18为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:254 nm。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)建立24批侧柏叶HPLC指纹图谱并进行相似度评价,结合混合对照品图谱确定共有峰。采用SPSS 25.0软件进行聚类分析。采用Simca-P软件进行主成分分析和偏最小二乘法-判别分析,并筛选影响侧柏叶质量的差异性成分。结果 侧柏叶指纹图谱中共有13个共有峰,与对照指纹图谱相比,除S2一批外,其余23批药材的相似度均高于0.92。并指认了杨梅苷、槲皮苷、异槲皮苷、穗花双黄酮4个共有峰。聚类分析结果显示24批药材聚为两类,S1、S3-S24聚为一类,同一产地的药材有较大差异,不同产地药材也有相似性;S2聚为一类为圆柏叶。主成分分析结果表明6类主成分的累计方差贡献率为88.412%,可以反映原始色谱峰大部分信息。偏最小二乘法判别分析筛选出5种成分,是24批药材产生质量差异的标志性成分。结论 所建HPLC指纹图谱方法操作简便、准确,结合化学模式识别可用于侧柏叶的质量控制。峰8等5个成分为影响侧柏叶质量的差异性成分。

侧柏叶标准汤剂制备及质量标准研究

目的:参照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》,对15批侧柏叶饮片进行标准汤剂制备,建立特征图谱,并测定其槲皮苷含量,提供一种可靠的评价侧柏叶标准汤剂质量的方法。方法:以槲皮苷为含量指标成分,分别对15批不同产地的侧柏叶饮片标准汤剂进行测定,计算转移率和出膏率,建立高效液相特征图谱方法,同时采用液质联用技术对共有峰进行指认。结果:15批侧柏叶标准汤剂出膏范围为10.51%~20.35%,平均值为16.08%;槲皮苷含量范围为0.69%~1.12%,平均值为0.91%;槲皮苷转移率的分布范围为51.11%~67.16%,平均值为57.67%。特征图谱呈现13个特征峰,其中10个共有峰被指认,与对照特征图谱相比,侧柏叶标准汤剂的相似度均大于0.90。结论:侧柏叶饮片标准汤剂制备规范,槲皮苷含量测定与特征图谱方法可靠、准确性和重现性好,可评价侧柏叶标准汤剂的质量,也可以评价侧柏叶配方颗粒的质量。

侧柏叶红外指纹图谱共有峰率和变异峰率双指标序列分析法

利用共有峰率和变异峰率两个指标,以不同侧柏叶样品的红外指纹图谱为标准,计算出所测样品相对于标准品的共有峰率和变异峰率。按照共有峰率的大小,建立了不同的共有峰率和变异峰率双指标序列方法。分析结果显示,产地相同或相近的G1与G8之间、G4与G2G6之间有很高的共有峰率(均≥90.0%)和很低的变异峰率(均≤11.1%);相近产地不同年份的G10与G3G4、G5之间共有峰率均<50%、变异峰率均>50%;产地相距较远的G2与G7的共有峰率<50%、变异峰率>50%。该方法可以准确地区分不同产地、批次的侧柏叶。利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法可以对两个或多个中药样品进行方便可靠的鉴别,克服了多种中药鉴别方法只能进行真伪鉴别、产地鉴别的局限性,为中药质量的准确评价提供了一种新方法。

侧柏叶不同炮制品中槲皮苷与槲皮素的含量测定

目的以槲皮苷、槲皮素含量为指标,考察不同炮制方法对侧柏叶止血成分含量的影响。方法采用RP-HPLC法测定不同炮制品中槲皮苷、槲皮素的含量,色谱柱为Lichrospher C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(38∶10∶52);流速1.0 ml.min-1;检测波长254 nm;柱温25℃。结果不同炮制品中槲皮苷、槲皮素的含量有显著差异,槲皮苷的含量以生品最高,炭品最低;槲皮素的含量变化为:炒炭品(炒焦品,其它炮制品未检出槲皮素。结论随着炮制温度的升高,槲皮苷的含量逐渐减少;炒炭后止血作用增强,推测与炭品中槲皮苷部分分解生成槲皮素有关。

侧柏叶及其水煎液HPLC特征图谱的相关性研究

目的比较侧柏叶药材及其水煎液高效液相色谱(HPLC)特征图谱的差异,探讨其特征图谱的相关性。方法采用Zorbax SB-Aq C18色谱柱;流动相为乙腈-磷酸溶液(体积分数为0.1%),梯度洗脱;检测波长为254 nm;柱温为40℃;流速为1.0 mL·min-1。结果侧柏叶药材标示出22个共有特征峰,水煎液标示出药材的16个特征峰,鉴别了5个黄酮类特征峰(杨梅苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、穗花杉双黄酮)。分别以10批药材及其水煎液特征图谱生成的共有模式为对照,各批次药材及其水煎液的相似度分别大于0.99和0.90。同批次药材及其水煎液特征图谱之间的相似度,有7批大于0.95,3批低于0.90。结论水煎煮方式能大部分提取侧柏叶的主要特征成分。本研究为侧柏叶粉末及含侧柏叶复方粉末水煎液外用的物质基础研究提供了一定的依据。

大孔吸附树脂纯化侧柏叶总黄酮的工艺研究

目的研究AB-8型大孔树脂精制侧柏叶总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮、槲皮苷含量结合指纹图谱主要特征峰面积保留率为考察指标;采用可见分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定槲皮苷含量,HPLC法分析指纹图谱主要特征峰面积。结果AB-8型大孔吸附树脂纯化效果较好,最佳工艺条件为:上样液浓度为含生药量0.20g·mL-1,上样量为每1mL湿树脂上样0.375g生药,吸附速率为1mL·min-1,洗脱液为4倍柱体积的70%乙醇,洗脱速率为2mL·min-1;树脂经95%乙醇和1moL·L-1氢氧化钠溶液再生后,可重复使用3次。总黄酮与槲皮苷的保留率达70%、95%以上,峰1～3的保留率达90%以上,纯化后总黄酮及槲皮苷的含量分别提高了2.48倍和3.29倍。结论AB-8型大孔吸附树脂能较好地纯化富集侧柏叶总黄酮。

侧柏叶HPLC指纹图谱的方法学研究

目的:建立侧柏叶的指纹图谱分析方法,评价侧柏叶药材质量,同时为双柏制剂质量控制提供参考。方法:采用HPLC法测定,色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸(梯度洗脱);检测波长为254nm;流速为1mL/min;柱温为40℃。结果:14批侧柏叶共标示出11个共有峰与对照品比较,共有峰中检出槲皮苷和槲皮素。结论:方法准确可靠,重复性好,为侧柏叶药材及其制剂质量控制提供了依据。

基于侧柏叶水提液还原法的纳米金颗粒粒径的调控

以侧柏叶（Cacumen platycladi）水提液还原氯金酸（HAuCl4）制备了纳米金颗粒,应用紫外可见吸收光谱、透射电镜、X射线粉末衍射等手段对所得纳米金颗粒进行了表征,通过简单地改变侧柏叶水提液加入量对纳米金颗粒的粒径进行调控研究.结果发现：在90 ℃下,固定HAuCl4的浓度（0.5 mmol/L）,随着侧柏叶水提液加入量（0.5～20 mL）的增加,所得纳米金颗粒的平均粒径（84.9～15.6 nm）明显减小,且粒径分布逐渐变窄,形貌也更加均一,说明通过改变侧柏叶水提液用量,可有效地调控纳米金颗粒的粒径.通过测定侧柏叶水提液还原HAuCl4前后总糖、还原糖、蛋白质、黄酮等主要成分的浓度和抗氧化能力,证明了侧柏叶水提液中对HAuCl4溶液起还原作用的主要活性成分是还原糖类和黄酮类物质,对纳米金颗粒起保护作用的主要成分是主要糖类、黄酮类、蛋白质等.

侧柏叶炮制前后成分的对比

目的建立HPLC法测定侧柏叶及其炮制品中杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮的含量,对比侧柏叶炮制前后7种成分的含量变化。方法采用药典法进行炮制。色谱柱为Welch Ultimate LP-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长为330 nm,流速1 m L/min。结果杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮的标准曲线呈良好的线性关系（r≥0.999 5）,各组分平均回收率在97.6%~101.1%之间,RSD≤1.14%（n=6）。炮制后,杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮含量降低,而杨梅素、槲皮素及山柰酚含量相对升高。结论所建立的HPLC法简便易行,可用于侧柏叶、侧柏炭的含量测定。侧柏叶炮制前后成分种类和量的改变,表明其炮制过程存在着成分转化过程。

HPLC法同时测定侧柏叶中杨梅苷等4种黄酮的含量

目的建立同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法，为侧柏叶的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法。色谱柱为WatersODSC18柱（150mm×4．6mm,5μm），流动相为甲醇-体积分数为0．5％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．8mL·min-1，检测波长为340nm，柱温为室温。结果杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮质量浓度分别在61．2-122．4mg·L-1（r=0．9998）、10．56—211．2mg·L-1（r=0．9998）、2．85～57．0mg·L-1（r=0．9999）和7．54—150．8mg·L-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为97．0％（RSD=2．5％）、97．1％（RSD=2．3％）、96．8％（RSD=2．1％）和97．4％（RSD=3．4％）。结论此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适于侧柏叶的质量控制。

侧柏叶炮制前后总黄酮的含量变化

目的建立侧柏叶总黄酮的含量测定方法,对侧柏叶、侧柏炭的总黄酮进行定量研究。方法采用紫外分光光度法对侧柏叶总黄酮含量测定方法进行研究。结果采用石油醚脱脂,乙醇加热回流提取侧柏叶中的总黄酮,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色系统的含量测定方法,线性范围0.205～3.28mg,r=0.9997,平均加样回收率为98.96%,RSD=0.85%(n=6),侧柏叶总黄酮含量为4.29%,侧柏炭总黄酮含量为3.15%。结论该含量测定方法操作简便,重现性好。侧柏叶炒炭后总黄酮含量降低。

HPLC法同时测定侧柏叶、侧柏炭中的7种成分

目的建立HPLC法同时测定侧柏叶、侧柏炭中杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮的含有量。方法侧柏叶、侧柏炭提取液的分析采用Welch Ultimate LP-C_（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长330 nm;体积流量1 m L/min。结果杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮的标准曲线均呈良好的线性关系（r〉0.999 5）,平均回收率为97.6%-101.1%,RSD〈1.14%（n=6）。结论该方法简便易行,可用于侧柏叶、侧柏炭的含有量测定。

双柏炎痛喷雾剂薄层色谱鉴别

采用ＴＬＣ法对双柏炎痛喷雾剂中大黄、黄柏、侧柏叶、冰片进行了定性鉴别，方法简单，结果满意。

侧柏叶总黄酮提取物质量标准研究

[目的]建立侧柏叶总黄酮的质量控制标准。[方法]分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法对侧柏叶总黄酮中的总黄酮含量及穗花杉双黄酮的含量进行测定。[结果]在0.002 08～0.020 8 mg/ml范围内槲皮苷浓度与吸光度具有良好的线性关系,R=0.999 3,平均加样回收率为98.00%,RSD为1.98%(n=6);在0.13～1.3μg范围内穗花杉双黄酮浓度与吸光度具有良好的线性关系,R=0.999 7,平均加样回收率为99.266%,RSD为1.46%(n=6);[结论]该方法简便、精确、重现性好,可作为该制剂的质量控制标准。

侧柏炭的HPLC指纹图谱研究

目的:建立侧柏炭的HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用Lichrospher C18色谱柱(250mm×4.6mm5μm),流动相为0.5‰三氟乙酸水溶液-甲醇,梯度洗脱,检测波长375nm。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)版》,计算各被测样品的HPLC指纹图谱的整体相似度。结果:共有14个共有峰,10批被测样品的色谱指纹图谱的整体相似度在0.178～0.963,并得出了侧柏炭的对照指纹图谱。结论:该指纹图谱方法简便、重现性好,可专属性地研究侧柏炭的指纹图谱,为有效地控制该饮片的内在质量提供了科学依据。

侧柏叶炮制机制初探

目的:建立高效液相色谱法,以杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮为指标对侧柏叶和炮制品进行HPLC含量测定,对比侧柏叶炮制前后成分的变化。方法:采用烘法、炒法、炒法进行炮制。含测条件,色谱柱为Welch Ultimate LP-C_18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长为330 nm,流速为1 ml·min^-1,柱温为35℃;进样量为20μl。结果:杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮的标准曲线呈良好的线性关系(r≥0.999 0)平均回收率为97.6%~101.1%,RSD≤1.14%(n=6)。侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮经炮制后含量均降低,而杨梅素、槲皮素、山柰酚的含量相对升高。结论:所建立的HPLC法简便易行,可用于侧柏叶和炮制品的含量测定。含测结果表明,炮制过程存在成分转化过程。