血清E-cadherin、IGFBP5在妊娠期糖尿病患者中的水平及其与胰岛素抵抗的关系

目的探讨妊娠期糖尿病患者血清E-钙黏蛋白(E-cadherin)和胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)水平及其与胰岛素抵抗的关系。方法选取2019年5月至2021年5月该院收治的84例妊娠期糖尿病患者作为观察组,根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)将观察组分为胰岛素抵抗组(HOMA-IR>2.69)和无胰岛素抵抗组(HOMA-IR≤2.69)。另选取同期在该院进行健康体检的84例健康孕妇作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象血清E-cadherin、IGFBP5水平;采用Pearson相关分析胰岛素抵抗组血清E-cadherin、IGFBP5水平与HOMA-IR的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清E-cadherin、IGFBP5对妊娠期糖尿病患者发生胰岛素抵抗的诊断价值。结果观察组血清E-cadherin水平低于对照组,血清IGFBP5水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。无胰岛素抵抗组年龄、孕产次、孕周、产前体质量指数、收缩压、舒张压、总胆固醇、甘油三酯与胰岛素抵抗组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);无胰岛素抵抗组HOMA-IR低于胰岛素抵抗组,差异有统计学意义(P<0.05);胰岛素抵抗组血清E-cadherin水平低于无胰岛素抵抗组,血清IGFBP5水平高于无胰岛素抵抗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,胰岛素抵抗组血清E-cadherin水平与HOMA-IR呈负相关(P<0.05),血清IGFBP5水平与HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清E-cadherin、IGFBP5诊断妊娠期糖尿病患者发生胰岛素抵抗的曲线下面积(AUC)分别为0.746、0.811,最佳截断值分别为2325.58、27.67 ng/mL,2项联合检测诊断妊娠期糖尿病患者发生胰岛素抵抗的AUC为0.893。结论妊娠期糖尿病患者血清E-cadherin水平降低,IGFBP5水平升高,2项联合检测对妊娠期糖尿病患者发生胰岛素抵抗具有一定临床诊断价值。

胃癌高发区胃腺癌肿瘤EMT过程与Tspan-5表达分析

目的探讨胃癌高发区胃腺癌肿瘤细胞上皮-间质转化(EMT)过程与Tspan-5表达关系。方法选取2018年5月至2019年12月于莆田市第一医院完成胃腺癌根治术的108例患者作为研究对象,采用免疫组化染色法检测肿瘤组织Tspan-5、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)阳性表达情况。结果Tspan-5阳性表达48.1%(52例)、E-cadherin阳性表达25.0%(27例)、N-cadherin阳性表达56.5%(61例)。Tspan-5、E-cadherin和N-cadherin阳性表达与性别、年龄无关(P>0.05),与肿瘤状态(分期)有关(P<0.05)。随着肿瘤病情的进展,Tspan-5和N-cadherin阳性率升高,而E-cadherin阳性率降低。相关性分析结果显示,Tspan-5阳性率与E-cadherin呈正相关,与N-cadherin呈负相关(P<0.05);E-cadherin阳性率与N-cadherin呈负相关(P<0.05)。结论胃腺癌中Tspan-5的高表达与肿瘤EMT过程密切相关,Tspan-5有可能成为早期临床诊断、干预和预后评估的重要靶点。

Rspo3/Lgr5促进N-钙黏蛋白表达参与小鼠肝损伤

目的本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤。方法采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法以及免疫荧光染色方法测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5的RNA干扰实验以确定Rspo3是否通过作用于Lgr5上调Ncad表达。结果在损伤小鼠肝组织中,Rspo3及其受体Lgr5显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3及Lgr5表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降。结论在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤。

Claudin-5、β-catenin和E-cadherin在胰腺实性-假乳头状瘤中的诊断价值

目的研究紧密连接蛋白Claudin-5、β-catenin和E-cadherin在鉴别胰腺实性假乳头状瘤(SPTP)与胰腺神经内分泌性肿瘤(P-NET)中的意义。方法收集2006-01—2014-06间60例SPTP、48例P-NET病例,回顾性复习临床资料、病理组织学特点,应用免疫组织化学检测NSE、Cg A、Syn、CD56、β-catenin、E-cadherin(ECD)和Claudin-5的表达情况。结果 NSE、Cg A、Syn、CD56免疫标记物在这2组肿瘤中都有不同程度的表达,P-NET组的Cg A阳性率显著高于SPTP组(97.9%:0),Claudin-5在所有SPTP中细胞膜(+),而P-NET均(-);β-catenin在60例SPTP呈细胞核(+),表达率为100%(60/60),在P-NET中呈细胞膜、细胞质(+),其表达率12.5%(6/48);ECD在60例SPTP中细胞膜(-)(0/60),在P-NET中呈细胞膜(+)(48/48,100%)。结论检测Claudin-5、β-catenin和ECD的蛋白表达有助于鉴别胰腺实性假乳头状瘤和神经内分泌肿瘤。

5-杂氮-2’-脱氧胞苷和5-氟尿嘧啶对食管癌细胞系中E-Cadherin和TIMP3基因甲基化状态及蛋白表达的影响

目的:观察去甲基化药物5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)对食管癌细胞系EC1和EC9706(均存在E-Cadherin甲基化改变和TIMP3基因未发生甲基化改变)中2种基因甲基化状态及蛋白表达的影响。方法:用5-Aza-CdR和5-FU分别作用于EC1和EC9706细胞,应用甲基化特异性PCR检测2种药物处理前后细胞中E-Cadherin基因和TIMP3基因的甲基化状态,应用免疫细胞化学方法检测TIMP3和E-Cadherin蛋白的表达。结果:5-Aza-CdR或5-FU处理后两种食管癌细胞系中TIMP3基因仍为非甲基化;5-Aza-CdR作用后,两种食管癌细胞系中E-Cadherin基因的甲基化状态发生了逆转,而5-FU作用后,E-Cadherin基因的甲基化状态无改变。EC1和EC9706经5-Aza-CdR处理后TIMP3蛋白表达无改变,而经5-FU处理后表达增强(P<0.05),EC1和EC9706经两种药物处理后E-Cadherin蛋白表达均增强(F=116.835、119.628、191.700和210.532,P<0.001)。结论:5-Aza-CdR能够有效逆转EC1和EC9706细胞中E-Cadherin基因甲基化状态,并使其蛋白恢复表达;对TIMP3基因的甲基化状态和蛋白表达影响不大。

5-杂氮-2'-脱氧胞苷诱导裸鼠HepG2种植瘤细胞T-cadherin的表达及其对种植瘤的抑制作用

目的:探讨去甲基化药物5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)在裸鼠体内诱导HepG2细胞T-cadherin的表达,及其对HepG2种植瘤生长的抑制作用.方法:皮下接种法建立HepG2细胞裸鼠种植瘤模型,随机分为实验组(11只)和对照组(10只).实验组裸鼠给予5-Aza-CdR注射,对照组裸鼠注射等量PBS.4wk后处死裸鼠,观察种植瘤的生长情况,用RT-PCR技术及免疫组织化学技术检测T-cadherin mRNA及蛋白的表达.结果:用药4wk后,实验组肿瘤组织的T-cadherin mRNA的表达水平显著高于对照组(t=6.613,P<0.05);对照组HepG2细胞几乎检测不到T-cadherin蛋白表达,而实验组裸鼠种植瘤细胞膜上可检测到T-cadherin蛋白表达;实验组肿瘤的平均体积明显小于对照组肿瘤平均体积(t=2.337,P=0.025).结论:5-Aza-CdR能诱导裸鼠皮下种植HepG2瘤细胞的T-cadherin表达,抑制HepG2种植瘤的生长,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的T-cadherin启动子去甲基化,恢复T-cadherin的表达,从而抑制HepG2种植瘤生长.

5-Aza-CdR对人食管癌细胞株中T-cadherin基因表达和细胞增殖的影响

背景:T-cadherin在肿瘤的发生中可能扮演肿瘤抑制基因的角色,在食管癌等多种肿瘤中的表达明显下降。目的:探讨去甲基化制剂5.氮杂.2'.脱氧胞苷(5.Aza.CdR)对人食管癌细胞株EC109中T-cadherin基因表达和细胞增殖的影响。方法:常规培养人食管癌细胞株EC109,并分为5μmol/L.5.Aza.CdR组和对照组。以甲基化特异性PCR(MSP)法检测T-cadherin基因启动子区甲基化状态,RT.PCR和蛋白质印迹法分别检测T-cadherin mRNA和蛋白表达.MTT法检测EC109细胞增殖。结果:对照组EC109细胞中T-cadherin基因启动子区呈异常甲基化状态,5-Aza-CdR干预可逆转甲基化状态。与对照组相比.5.Aza.CdR组T-cadherin基因mRNA和蛋白表达均显著增高(P<0.01),细胞增殖明显受到抑制。结论:去甲基化制剂5.Aza.CdR通过逆转食管癌细胞中T.cadherin基因启动子区甲基化状态来增强其表达,并抑制肿瘤细胞增殖。

5-脱氧杂氮胞苷诱导肝癌细胞E-Cadherin表达增强

目的 :研究 5 -脱氧杂氮胞苷对肝癌细胞株SMMC - 772 1中E -Cadherin基因表达的影响及其机理。方法 :肝癌细胞株SMMC - 772 1用 5 -脱氧杂氮胞苷处理 ,处理前后采用流式细胞仪检测E -Cadherin基因的蛋白表达 ,观察克隆形成及裸鼠致瘤性的变化。结果 :经 5 -脱氧杂氮胞苷处理后 ,肝癌细胞株SMMC - 772 1中E -Cadherin蛋白表达增加了 43.1% ,克隆小而少 ,裸鼠致瘤性降低。结论 :E -Cadherin基因蛋白表达增高可能与DNA甲基转移酶抑制剂 5 -脱氧杂氮胞苷抑制了E -Cad herin启动子区域的高甲基化有关 ,并在一定程度上恢复了其抑癌功能。

结肠癌T-cadherin表达水平分析与5-Aza-CdR对其表达和结肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

背景与目的:结肠癌是临床常见恶性肿瘤,探讨抑癌蛋白T-cadherin在结肠癌中的表达情况及其与患者临床病理学特征的关系,并分析5-Aza-CdR对T-cadherin表达和结肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:收集福建医科大学附属第二医院2015—2016年40例手术切除的结肠癌组织及癌旁组织新鲜样本,并经过病理学检查验证,分别提取总RNA和总蛋白质。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分析T-cadherin mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)分析T-cadherin蛋白水平,并分析T-cadherin的mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。进一步以人结肠癌细胞系HT-29为研究对象,采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理HT-29细胞,分别采用RTFQ-PCR和Western blot分析T-cadherin表达变化,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)分析细胞增殖,采用Transwell实验验证细胞侵袭能力,采用流式细胞术分析细胞凋亡。结果:T-cadherin在结肠癌组织的蛋白水平和mRNA表达均明显低于癌旁组织,其mRNA表达与淋巴结转移(F=5.316,P=0.0093)和分化程度(F=5.807,P=0.0064)明显相关,而与其他病理变量(包括性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤浸润深度)无明显相关。药物5-Aza-CdR可以显著上调HT-29细胞中T-cadherin的表达水平,抑制HT-29细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡。结论:T-cadherin表达可能与结肠癌恶性程度密切相关,药物5-Aza-CdR处理可上调结肠癌细胞T-cadherin的表达,并抑制结肠癌细胞的增殖、迁移,促进结肠癌细胞凋亡,提示T-cadherin可能是结肠癌患者使用甲基化抑制剂5-Aza-CdR治疗的靶点。

肺腺癌组织HDAC1、HDAC5和E-cadherin表达及相关性研究

目的检测组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、组蛋白去乙酰化酶5(HDAC5)和上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)在肺腺癌组织中的表达,并分析三者表达的相关性。方法采用免疫组化SP法检测93例肺腺癌组织和48例癌旁组织中HDAC1、HDAC5和E-cadherin的表达情况。分析三者表达与肺腺癌临床病理特征的关系,以及三者表达的相关性。结果肺腺癌组织中HDAC1的阳性表达率为58.06%,高于癌旁组织的20.83%,差异有统计学意义(P<0.05);癌旁组织中HDAC5和E-cadherin的阳性表达率分别为66.67%、68.75%,均高于肺腺癌组织的48.39%、45.16%,差异有统计学意义(P<0.05)。HDAC1和E-cadherin表达与年龄有关(P<0.05),E-cadherin表达还与分化程度有关(P<0.05);HDAC5表达与肺腺癌临床病理特征均无关(P>0.05)。HDAC1分别与HDAC5、E-cadherin表达呈负相关(r=-0.224、r=-0.236,P<0.05);HDAC5与E-cadherin表达无明显相关性(r=0.159,P>0.05)。结论在肺腺癌组织中联合检测HDAC1、HDAC5和E-cadherin可能对判断预后、合理选择药物有一定指导意义。

人血管内皮钙黏蛋白5单克隆抗体的制备及应用

目的制备并鉴定人血管内皮钙黏蛋白5(VECDH5)的单克隆抗体(m Ab)。方法用重组原核人VECDH5蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合;间接ELISA筛选阳性克隆,得到稳定分泌抗VECDH5抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定其效价;Western blot法、流式细胞术、免疫荧光细胞化学染色、免疫组织化学染色鉴定其特异性及抗原表位。结果制备并获得1株可分泌特异性抗VECDH5的杂交瘤细胞株(2C11)。ELISA测定腹水效价高达1∶10 000。多种方法均证实该抗体能特异性识别人VECDH5蛋白,并可在上述不同方法中应用。经抗原表位鉴定,研究制备的2C11识别的氨基酸序列为LDREVVPWYNLTVEA。结论成功制备了亲和力高、特异型好的抗人VECDH5的m Ab。

CDK5与EMT相关蛋白在头颈部鳞状细胞癌中异常表达的相关性研究

目的：探讨头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）及上皮间充质转化（EMT）相关蛋白N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达，以及CDK5的表达与患者预后的关系。方法免疫组化方法检测55例HNSCC患者癌组织中CDK5及EMT相关蛋白的表达情况；分析不同临床病理特征患者CDK5及EMT相关蛋白表达的差异，CDK5与EMT相关蛋白表达的相关性，以及CDK5表达与患者生存之间的关系。结果 CDK5高表达率在有淋巴结转移患者中高于无淋巴结转移患者（91.67%vs 30.23%, P〈0.05），在T3~T4期患者中高于T1~T2期患者（85%vs 20%, P〈0.05）；有淋巴结转移患者N-cadherin、Vimentin高表达率高于无淋巴结转移的患者（75.00%vs 6.98%；91.67%vs 27.91%,均P〈0.05），E-cadherin高表达率低于无淋巴结转移的患者（8.33%vs 86.05%, P〈0.05）；CDK5与N-cadherin、Vimentin表达呈正相关，与E-cadherin表达呈负相关（rs分别为0.512、0.443、-0.363，均P〈0.01）；CDK5高表达患者3年生存率低于低表达患者（37.5%vs 87.0%，Log-rankχ2=12.678，P〈0.01）。结论 CDK5及EMT相关蛋白在转移性HNSCC中异常表达；CDK5的表达状态对预测HNSCC患者的预后有一定价值。

慢病毒介导E型钙黏附蛋白表达抑制对胃癌SGC-7901细胞5-氟尿嘧啶作用的影响

目的观察慢病毒介导的基因干扰对胃癌SGC-7901细胞中E型钙黏附蛋白(E-cadherin)表达抑制效果,及E-cadherin基因抑制对5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用的影响。方法设计E-cadherin基因干扰序列,构建慢病毒载体,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,RT-PCR方法测定E-cadherin、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax) m RNA表达,Western blot法测定E-cadherin蛋白表达。结果慢病毒介导的E-cadherin干扰能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中E-cadherin的基因和蛋白表达水平(P <0. 05)。E-cadherin表达被抑制后,胃癌SGC-7901细胞对5-Fu增殖抑制显著下降,感染前后半数抑制浓度(IC50)分别为1. 27 mg·L^(-1)和2. 35 mg·L^(-1),细胞凋亡率的显著下降(P <0. 05)。E-cadherin表达被抑制后,Bcl-2 m RNA表达增高,Bax m RNA表达下降。5-Fu诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡时,Bcl-2 m RNA表达增高,Bax m RNA表达下降。结论慢病毒介导的E-cadherin基因干扰能有效抑制E-cadherin在胃癌SGC-7901细胞中的表达,并降低细胞对5-Fu作用的敏感性,其机制可能与Bcl-2、Bax基因表达改变有关。

人可溶性粘附素5截短体的克隆、表达及生物活性测定

目的:克隆和转染人可溶性粘附素5截短体(sCadherin5△),并检测其生物活性。方法:RT-PCR扩增Cadher-in5△cDNA,并克隆入pMSCV逆转录病毒载体,构建pMSCV/sCadherin5△,转化感受态大肠杆菌XL-blue菌株,提取、纯化和酶切质粒,测序分析sCadherin5△,转染NIH3T3细胞,mRNA和蛋白质水平检测NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,MTT方法检测sCadherin5△生物活性。结果:PCR产物约为1128bp,构建了pMSCV/sCadherin5△质粒载体,序列测定的结果与GeneBank中Cadherin5胞膜外区121bp至1248bp之间的序列一致。pMSCV/sCadherin5△转染的NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,sCadherin5△抑制HUVEC细胞体外增殖。结论:克隆、表达和分泌了具有生物活性的人sCadherin5△。

启动子甲基化状况对唾液腺恶性多形性腺瘤体外细胞系细胞E-cadherin表达的影响

目的:通过体外改变人唾液腺恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma,MPA)细胞系细胞E-cadherin基因启动子甲基化情况,探讨启动子甲基化对E-cadherin表达的影响。方法:采用合适浓度的5-Aza-Cd R和TGF-β1处理MPA细胞系SM-AP4和SM-AP1细胞,分别使用蛋白免疫印迹法、亚硫酸盐测序法、实时荧光定量PCR检测用药前、后E-cadherin蛋白表达、E-cadherin基因启动子甲基化状况、m RNA表达;同时采用划痕实验、Transwell小室检测用药前、后细胞迁移能力的变化。应用SPSS13.0软件包对数据进行独立样本t检验。结果:经5-Aza-Cd R处理后,SM-AP4细胞E-cadherin启动子区甲基化率显著降低(P<0.01),E-cadherin蛋白和m RNA表达显著升高(P<0.05),相应的细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。而经TGF-β1处理后的SM-AP1细胞表达Vimentin蛋白,E-cadherin启动子区甲基化率显著升高(P<0.01),E-cadherin蛋白和m RNA表达显著降低(P<0.05),相应的细胞迁移能力显著提高(P<0.05)。结论 :DNA甲基化是调节MPA体外细胞系细胞中E-cadherin表达的重要机制之一,E-cadherin表达升高对MPA细胞转移具有潜在的抑制作用。

HPV16E6 siRNA联合5-Aza-CdR对宫颈癌SiHa细胞中E-钙黏蛋白表达和基因甲基化的影响

目的:探讨HPV16E6 siRNA联合5-Aza-CdR(5-aza-2'-deoxycytidine,5-氮-2'-脱氧胞苷,又称地西他滨)对宫颈癌SiHa细胞中E-钙黏蛋白表达和基因甲基化的影响。方法:采用SiHa细胞构建的HPV16E6 沉默细胞株及5-Aza-CdR细胞株,检测细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达,以及E-cadherin甲基化状态。采用细胞黏附、Transwell体外侵袭、迁移实验检测5-Aza-CdR和siRNA E6对SiHa细胞黏附、侵袭迁移的影响。结果: 5-Aza-CdR+siRNA E6组较5-Aza-CdR组、siRNA E6组中E-cadherin mRNA 及蛋白表达均上升,细胞的黏附率、侵袭抑制率和迁移抑制率均升高;5-Aza-CdR+siRNA E6组较5-Aza-CdR组、siRNA E6组中E-cadherin基因启动子区甲基化指数明显下降。结论: HPV16E6 siRNA联合5-Aza-CdR可显著引起宫颈癌细胞中E-cadherin 基因低甲基化,并可导致E-cadherin mRNA 及蛋白的表达水平明显上调,肿瘤细胞黏附能力升高,侵袭迁移能力下降,两者在一定程度起到协同作用。

E-cadherin在白血病细胞的表达及机制

目的:检测E-cadherin在白血病细胞的表达并探讨其机制,最终阐明E-cadherin介导的造血细胞与骨髓基质间的黏附改变在白血病发生中的作用。方法:应用半定量RT-PCR方法检测98例白血病患者和23例正常骨髓移植供者骨髓单个核细胞的E-cadherin相对表达水平,应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各种类型白血病细胞系E-cadherin的表达。用去甲基化试剂5-Aza-CdR处理E-cadherin完全甲基化的白血病细胞系U937,MSP、RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光标记法检测诱导后的E-cadherin表达水平。结果:和正常人相比,98例白血病患者E-cadherin表达降低或缺失,非配对t检验进行统计学分析,P<0.05,差异显著;所有白血病细胞系E-cadherin表达缺失或降低,并且其基因处于完全甲基化状态或以甲基化为主的不完全甲基化状态。在合适的5-Aza-CdR作用浓度诱导下,部分细胞在mRNA和蛋白水平恢复E-cadherin表达。结论:白血病细胞E-cadherin表达降低或缺失,其基因的甲基化是重要机制,去甲基化处理可以使部分细胞重新表达E-cadherin。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞株SGC-7901的作用

目的：探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞SGC-7901作用，及对抑癌基因PTEN和E—cadherin（E—cad）表达的影响。方法：应用MTT、流式细胞术、RT-PCR方法检测5-Aza-CdR和紫杉醇单用和联用后对细胞的增殖抑制、周期分布、凋亡率．以及对抑癌基因PTEN和E—cad mRNA表达的改变。结果：紫杉醇和5-Aza—CdR可抑制胃腺癌细胞的生长，呈浓度依赖性。联合作用后，协同效应明显。紫杉醇可以使细胞阻滞在G2／M期．而5-Aza—CdR可以使细胞阻滞在S期，联合作用后，细胞同时阻滞在S和G2／M周期，凋亡率也增加。紫杉醇对抑癌基因PTEN，E—cad mRNA的表达与对照组相比差异无显著性，5-Aza—CdR可使其重新表达，两药联合作用后．PTEN和E—cad的表达量增多。结论：5-Aza—CdR可增强紫杉醇对胃癌细胞的增殖抑制作用；5-Aza-CdR可以使胃癌细胞阻滞在S期．而紫杉醇使细胞阻滞在G2／M期．两药联合应用后．胃癌细胞在这两个周期的分布以及凋亡率都明显高于单药的应用；5-Aza-CdR可以使胃癌细胞中的抑癌基因PTEN mRNA和E—cad mRNA重新表达。而紫杉醇则不能．但能促进5-Aza—CdR对抑癌基因的重新表达作用。

TIMP3、E-Cadherin基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中的甲基化及蛋白表达

目的:观察食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-Cadherin基因甲基化的水平及蛋白表达,以及去甲基化药物5-Aza-CdR对其的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫细胞化学的方法,分别检测体外培养的食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-Cadherin基因甲基化水平及蛋白表达.用5μmol/L5-Aza-CdR处理两种细胞系后,用同样的方法检测其甲基化水平及蛋白表达,观察药物的影响.结果:TIMP3基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中均表现为非甲基化,蛋白呈现弱表达;而E-Cadherin基因在EC1中发生甲基化,E C9706中发生半甲基化,蛋白表达均缺失.5-Aza-CdR作用后的两种细胞系中,TIMP3基因仍为非甲基化,而蛋白表达似有所曾强;但E-Cadherin基因甲基化得到了逆转,蛋白表达由原来的不表达,转变为强表达.结论:5-Aza-CdR能够有效逆转E-Cadherin基因甲基化,并使其蛋白恢复表达;TIMP3基因的失活似与甲基化机制无关,5-Aza-CdR对其蛋白表达的恢复作用微弱.

Stat5在甲状腺癌中的表达及其与上皮间质转化的关系

目的:研究信号转导和转录活化因子5(Stat5)和上皮间质转化(EMT)标志物E-cadherin、Vimen-tin在甲状腺癌中的表达及相关性分析。方法:采用免疫组织化学SP法检测149例甲状腺石蜡标本(包括甲状腺癌126例和结节性甲状腺肿23例)中Stat5、E-cadherin、Vimentin的表达,并结合主要临床病理参数进行相关分析。结果:Stat5、Vimentin在甲状腺癌组织中的阳性率分别为85.71%、77.78%,明显高于结节性甲状腺肿中的阳性率26.09%、8.70%(P<0.05),甲状腺癌组织中E-cadherin的阳性率为25.40%,低于结节性甲状腺肿中的阳性率86.96%(P<0.05);3种蛋白的表达与性别、年龄无明显相关性(P>0.05),而与淋巴结转移、病理分型相关(P<0.05);Stat5和E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.335,P=0.000),Stat5与Vimenin的表达呈正相关(r=0.218,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中存在Stat5高表达及EMT,提示Stat5可能参与了甲状腺癌的EMT过程,从而促进甲状腺癌的侵袭转移。