苦瓜蛋白MD28对Caco-2细胞胆固醇排出及ABCG5和ABCG8表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白MD28对Caco-2细胞胆固醇排出及其相关基因ABCG5和ABCG8表达的影响,明确苦瓜蛋白MD28的降胆固醇机制。方法Caco-2细胞分为四组:Caco-2细胞对照组、Caco-2细胞模型组、Caco-2细胞模型+苦瓜蛋白MD28处理组和Caco-2细胞+苦瓜蛋白MD28处理组。加相应的处理因素处理后,高效液相色谱法测量细胞内胆固醇含量,油红O染色观察细胞内脂滴,逆转录聚合酶链反应和Western blotting分别检测细胞中ABCG5和ABCG8的mRNA和蛋白表达。结果高效液相色谱测定结果显示,与Caco-2细胞模型组比较,苦瓜蛋白MD28处理的细胞中胆固醇含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。油红O染色显示,加苦瓜蛋白MD28处理组脂质沉积均相应低于没有加苦瓜蛋白MD28处理组。Caco-2细胞模型组ABCG5和ABCG8的mRNA和蛋白水平均有轻微上调,但与Caco-2细胞对照组比较无显著性差异,而经苦瓜蛋白MD28处理后,ABCG5和ABCG8明显上调(P<0.01),且与Caco-2细胞模型组比较差异显著(P<0.05)。结论苦瓜蛋白MD28能够显著上调人结肠腺癌细胞Caco-2中ABCG5和ABCG8的表达,其降低胞内胆固醇作用与增强胞内胆固醇的排出有关。

Caco-2细胞中8-羟基二氢小檗碱和小檗碱对多药耐药基因表达的研究

目的：研究8-羟基二氢小檗碱和小檗碱与多药耐药基因之间的作用。方法：采用MTT比色法测定药物的细胞毒浓度，适时定量PCR测定不同多药耐药基因的表达。结果：在1～100μM浓度范围内，8-羟基二氢小檗碱和小檗碱对Caco-2细胞无毒性作用；8-羟基二氢小檗碱和小檗碱对mdr1和mrp 1的表达作用一致，在25～100μM范围内，小檗碱能明显降低mrp2的mRNA表达，而8-羟基二氢小檗碱对其无明显影响。结论：8-羟基二氢小檗碱与小檗碱对mrp2的基因表达差异较大，其对MRP2蛋白表达的作用以及与基因调控之间的作用关系还有待更进一步的研究。

人胎盘提取物抑制结肠癌细胞的增殖及迁移

目的:探讨人胎盘提取物(human placenta extracts,HPE)对人结肠癌细胞株Caco-2及SW480增殖和迁移能力的影响。方法:用不同质量浓度HPE处理Caco-2和SW480细胞,CCK-8、Ki-67、CFSE法检测细胞增殖活性的变化,Annexin-V/PI及DAPI细胞核染色检测HPE对细胞周期及凋亡的影响,实时荧光定量PCR法检测HPE对细胞中BAX、CDK2及Cyclin A2基因表达的影响,划痕实验检测对细胞迁移能力的影响。建立裸鼠结肠癌移植瘤模型,随机分组分别单独或联合给予HPE和5-氟尿嘧啶(5-Fu),观察裸鼠移植瘤的生长状况。结果:HPE处理组Caco-2及SW480细胞增殖能力低于对照组[(0.82±0.01)vs(0.96±0.02),P<0.01;(0.90±0.03)vs(0.96±0.02),P<0.05],细胞凋亡率高于对照组[(20.47±1.32)%vs(11.01±3.82)%,P<0.01;(20.70±5.19)%vs(8.00±2.69)%,P<0.05];HPE处理组细胞胞质减少、核固缩、BAX基因表达增加[(3.23±1.90)vs(1.00±0.00),(2.25±0.55)vs(1.00±0.00),均P<0.05];细胞停留在细胞DNA复制S期,出现凋亡峰;Caco-2细胞CDK2及Cyclin A2基因表达降低(P<0.05);并且细胞的迁移能力低于对照组[(0.17±0.29)vs(1.50±0.50)mm,P<0.05]。HPE处理组裸鼠移植瘤体积小于对照组、生存率高于单用5-Fu组(P<0.05)。结论:HPE在体内外通过干预结肠癌细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,可能对抑制肿瘤细胞增殖有一定作用。

益生菌对非酒精性脂肪肝相关细胞的作用

目的探讨益生菌对非酒精性脂肪肝相关的肠上皮细胞、肝Kupper细胞和肝实质细胞的作用及其作用机制。方法将人肠上皮细胞Caco-2、大鼠肝Kupper细胞和小鼠肝实质细胞AML12分别分成空白对照组、脂多糖(LPS)组、嗜酸乳杆菌组、LPS+嗜酸乳杆菌组、粪肠球菌组、LPS+粪肠球菌组、双歧杆菌组、LPS+双歧杆菌组,孵育培养6h。分别检测人肠上皮细胞Caco-2紧密连接相关因子表达情况及细胞通透性、大鼠肝Kupper细胞功能表型相关因子和IκB及p-IκB变化水平、小鼠肝实质细胞AML12脂代谢基因水平和脂类吸收情况。结果益生菌可显著抑制由LPS刺激引起的人肠上皮细胞Caco-2紧密连接相关因子Occludin、Claudin-1、JAM、ZO-1表达的下降和细胞通透性的增加;明显抑制LPS刺激引起的大鼠肝Kupper细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-6的增加,同时抑制IL-4、IL-10、IL-13的降低和p-IκB蛋白表达的增加;显著抑制由LPS刺激引起的小鼠肝实质细胞AML12脂代谢基因ACACA、SREBF1、FAS、FABP3、FABP4、DGAT1的上调和脂类吸收的增加。结论益生菌可以通过促进肠上皮细胞紧密连接相关因子的表达,降低细胞通透性,抑制肝Kupper细胞NF-κB通路活性,降低促炎性细胞因子、增加抑炎性细胞因子表达水平,抑制肝实质细胞脂代谢基因表达和脂类吸收等多种途径,保护非酒精性脂肪肝。

小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制研究

目的:研究小柴胡汤在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制。方法:利用MTT实验筛选小柴胡汤在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究小柴胡汤的双向转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定,考察时间对小柴胡汤吸收的影响。结果:汉黄芩苷(wogonoside,WGS)和汉黄芩素(wogonin,WGN)由AP侧到BL侧的Papp分别为(1.23±0.09)×10-6,(1.07±0.89)×10-5,由BL侧到AP侧的Papp分别为(2.12±0.19)×10-6,(7.12±1.02)×10-6,二者的转运率随着时间的增加而增加,WGS和WGN的PappAP→BL/PappBL→AP分别为0.58,1.49。黄芩苷、黄芩素和甘草酸不能透过Caco-2细胞单层。结论:WGS和WGN在Caco-2细胞单层模型中的转运途径可能为被动转运。

延胡索甲素和乙素的人源肠内菌丛生物转化及在人源Caco-2细胞单层模型的吸收转运

目的:研究延胡索甲素(d-corydaline,CDL)和延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)的人源肠内菌丛生物转化,在人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的吸收转运。方法:应用人源肠内菌丛在厌氧、37℃条件下分别与CDL和THP共温孵培养;利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试CDL和THP从绒毛面(AP端)到基底面(BL端)、BL端到AP端双向的转运过程。计算转运参数和表观渗透系数(Papp),并与吸收良好的阳性对照药普萘洛尔和吸收不良的阿替洛尔进行比较。应用高效液相色谱法对CDL和THP进行分析。结果:CDL和THP在人源肠内菌丛温孵体系没有发生生物转化。它们与普萘洛尔在Caco-2细胞单层模型双向转运的Papp皆在1×10-5cm.s-1数量级;在0～180 min,转运效率与转运时间呈正相关。结论:CDL和THP在人源肠内菌丛温孵体系中稳定;在Caco-2细胞单层模型的转运机制可能为被动扩散。

羌活中二氢呋喃类香豆素在人源肠Caco-2细胞单层模型的吸收转运研究

目的研究紫花前胡苷元（NAN1）、紫花前胡苷（ND）、前胡苷V（DEV）和羌活苷（FDE）4个线型二氢呋哺香豆素类化合物存人源肠Caco-2细胞单层模型中的吸收特性。方法利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试4个香豆素类化合物从绒毛面（AP端）到基底面（BL端）、BL端到AP端2个方向的转运过程。应用偶联紫外检测器的高效液相色潜法对上述4个香豆素进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数（Papp），并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较。结果NANI双向转运的Papp值在1×10^6cm／s数量级，介于在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的普荼洛尔和难吸收的阿替洛尔的Papp值之间。ND、DEV和FDE的Papp值与阿替洛尔的Papp值皆在1×10^7cm／s数量级。4个香豆素在25～100μmol／L的转运效率与浓度呈正相关。结论4个线型二氢呋哺类香豆素可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内，NANI属于中等吸收的化合物：ND、DEV和FDE属于难吸收的化合物。

高效液相色谱法考察芒果苷在Caco-2细胞上的转运特征

目的:建立芒果苷的高效液相色谱测定法,研究其在Caco-2细胞上的转运特征。方法:利用MTT实验筛选出芒果苷在Caco-2细胞中的安全浓度,然后用Caco-2细胞单层模型研究芒果苷的转运特征。采用HPLC法检测药物浓度,考察时间、药物浓度、P-糖蛋白抑制剂对芒果苷在Caco-2细胞上转运的影响。结果:芒果苷在Caco-2细胞单层膜上的转运量具有一定的浓度和时间依赖性,P-糖蛋白抑制剂维拉帕米和环孢素A能够增加芒果苷跨膜转运量。结论:芒果苷在Caco-2细胞上转运表现为被动扩散且有外转运蛋白参与芒果苷跨膜转运。