针刺对功能性便秘肠神经-Cajal间质细胞-平滑肌细胞网络影响的实验研究探讨

功能性便秘是功能性肠病的一种,其发病率逐年上升,严重影响生活质量,而针刺治疗功能性便秘在临床上被广泛运用,疗效肯定。近年来许多研究表明,肠神经系统(ENS)、Cajal间质细胞(ICC)、平滑肌细胞(SMC)互相联系,构成肠神经-Cajal间质细胞-平滑肌细胞(ENS-ICC-SMC)网络体系,是胃肠道运动功能的基本单位,参与胃肠运动调节。综观近年来针刺治疗功能性便秘的相关实验文献,分析针刺对功能性便秘ENS-ICC-SMC网络体系相关影响,并指出下一步研究可从该网络超微结构的整体以及GDNF基因启动子区的甲基化修饰状态及其基因转录水平入手,为针刺治疗功能性便秘下一步研究提供方向性的指导。

下调HMGB2表达对肝癌LM3细胞上皮-间质转化的抑制作用及其AKT/mTOR信号通路机制

目的:探讨下调肝癌细胞中高迁移率族框蛋白2 (HMGB2)表达对肝癌细胞生物学行为及上皮-间质转化(EMT)进程的影响,并阐明其作用机制。方法:对数生长期的人肝癌LM3细胞分为阴性对照组和HMGB2 RNA干扰组(HMGB2 siRNA组),分别以Lipofectamin 2000为载体转染无关序列的RNA寡核苷酸(RNA oligo)和敲除HMGB2序列的RNA oligo。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平,分别采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力,采用Western blotting法检测2组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、 N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,HMGB2 siRNA组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),HMGB2 siRNA组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin、mTOR、AKT和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:下调HMGB2的表达可降低肝癌LM3细胞迁移和侵袭能力并抑制EMT,其作用机制可能与参与调节AKT/mTOR通路相关蛋白表达有关。

脂氧素A4对Ⅱ型肺泡上皮细胞-间质转化的抑制作用及其机制

目的 探讨脂氧素A4(lipoxin A4, LXA4)对Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell, ATⅡ)间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及可能机制。方法 将A549细胞分为对照组、转化生长因子β1(transforming growth factor, TGF-β1)组、空质粒+TGF-β1组、pcDNA3.1-Nrf2+TGF-β1组及LXA4+TGF-β1组。TGF-β1组以5 ng/mL TGF-β1干预A549细胞48 h;空质粒+TGF-β1组和pcDNA3.1-Nrf2+TGF-β1组A549细胞先分别转染空质粒或Nrf2过表达质粒,再以5 ng/mL TGF-β1干预48 h;LXA4+TGF-β1组A549细胞先用100 nmol/L LXA4预处理6 h再给予5 ng/mL TGF-β1干预48 h。光镜观察细胞形态变化,免疫印迹及免疫荧光法检测上皮标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)表达;免疫印迹法检测核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)蛋白水平。结果 与对照组相比,TGF-β1组光镜下可见部分A549细胞形态从鹅卵石状变成细长不规则状,呈间质性改变,E-cadherin表达减少(P<0.05)、α-SMA表达增多(P<0.01),Nrf2蛋白水平下调(P<0.05)。与TGF-β1组相比,pcDNA3.1-Nrf2+TGF-β1组A549细胞E-cadherin表达增多(P<0.05)、α-SMA表达减少(P<0.01);LXA4+TGF-β1组A549细胞E-cadherin上调、α-SMA下调以及Nrf2蛋白水平增多(P<0.05)。结论 LXA4可抑制A549细胞发生EMT,其机制与上调Nrf2表达相关。

白细胞介素-6对胰腺癌小鼠癌组织的细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)在胰腺癌裸鼠模型癌组织增殖与上皮间质化中的作用,并分析其分子机制。方法 将18只成功构建胰腺癌细胞荷瘤的BALB/c裸鼠模型随机分为模型对照组、IL-6过表达组和免疫球蛋白G(IgG)抗体组,每组6只。模型对照组于肿瘤部位注射生理盐水进行干预,IL-6过表达组于肿瘤部位注射IL-6过表达质粒进行干预,IgG抗体组予肿瘤部位注射IgG抗体进行干预。3组均于末次给药24 h后处死小鼠,并收集胰腺肿瘤组织。对各组肿瘤组织进行离体称重并计算抑瘤率。通过苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺组织的病理学改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组裸鼠肿瘤组织中IL-6、p-STAT3、NF-κB p65和VEGF蛋白的表达水平。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组肿瘤组织中E-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组IL-6、p-STAT3、SOCS3基因的表达水平。结果 3组裸鼠胰腺肿瘤组织的平均瘤重及抑瘤率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,模型对照组肿瘤组织细胞体积增大,癌细胞排列呈巢状;IL-6过表达组可见肿瘤组织轻度纤维化,少量炎症浸润;IgG抗体组可见核分裂象,大量肿瘤细胞坏死,局灶组织纤维化。IL-6过表达组E-cadherin蛋白、SOCS3基因表达水平低于模型对照组和IgG抗体组,而Vimentin、MMP-9、IL-6、p-STAT3、NF-κB p65、VEGF蛋白的表达水平及IL-6、NF-κB p65基因的表达水平高于模型对照组和IgG抗体组,差异均有统计学意义(P<0.05);IgG抗体组Vimentin、MMP-9、IL-6、p-STAT3、NF-κB p65、VEGF蛋白的表达水平及IL-6、NF-κB p65基因的表达水平低于模型对照组,而E-cadherin和SOCS3基因水平高于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-6可以通过p-STAT3和(或)NF-κB p65信号通路调节胰腺癌裸鼠模型肿瘤组织中的相关细胞因子,影响肿瘤组织的增殖及上皮间质化。

卵巢支持-间质细胞瘤的影像表现及临床特征

目的:总结卵巢支持-间质细胞瘤(SLCT)的影像表现及临床特征,提高对本病的认识。方法:回顾性分析本院经手术及病理证实的15例SLCT患者的临床及影像学资料,其中15例均行MR扫描,5例同时行CT扫描。术前均行卵巢肿瘤标记物检测,10例行内分泌激素水平检测。结果:15例均为单侧单发病变,左侧8例,右侧7例,其中实性4例,囊实性11例。MRI表现:平扫实性成分呈等T1稍长T2信号为主,DWI高信号,ADC图信号减低,囊性成分呈长T1长T2信号;增强扫描4例实性肿瘤明显强化,11例囊实性中5例实性成分呈结节样、不规则分隔样或囊壁样明显强化,另6例呈混合强化,其中1例病理为中分化,余5例为中低及低分化。CT表现:实性部分呈软组织密度,液性部分呈水样密度。3例实性肿瘤增强扫描明显强化,2例囊实性肿瘤中1例实性成分明显强化,1例混合强化。激素水平检测结果9例睾酮升高,肿瘤标记物检测结果3例AFP水平升高,3例CA125升高,1例CA199升高。10例患者表现为雄激素刺激相关表现,2例雌激素刺激相关表现,2例为雌雄激素共同作用表现,1例无症状。病理结果2例为高分化SLCT,7例中分化,5例中低分化,1例低分化。结论:卵巢SLCT具有一定的影像及临床特征,呈实性或囊实性肿块,增强扫描实性成分呈明显强化或混合强化,中低或低分化者多呈混合强化;常伴有激素刺激相关表现,以雄激素刺激相关表现多见。

KRT6A介导Wnt/β-catenin信号通路调节上皮-间质转化促进非小细胞肺癌A549细胞抗辐射

目的 探讨KRT6A对非小细胞肺癌A549细胞抗辐射的促进作用,并阐明其作用机制。方法 诱导并建立抗辐射A549(A549-RR)细胞,通过CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术验证细胞构建成功。Western blotting检测A549和A549-RR细胞中KRT6A表达情况。将A549-RR细胞分为敲减对照组(sh-NC组)和敲减KRT6A组(sh-KRT6A组),Western blotting检测KRT6A、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug)以及β-catenin的表达;采用CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况。将A549-RR细胞分为sh-NC组、sh-KRT6A组、敲减KRT6A和过表达对照(shKRT6A+ov-NC组)以及敲减KRT6A和过表达β-catenin (sh-KRT6A+ov-β-catenin组),Western blotting检测β-catenin以及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug的表达;采用CCK-8法、平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况。结果 成功建立了A549-RR细胞,A549-RR细胞中KRT6A表达上调。敲减KRT6A降低A549-RR细胞增殖活性和克隆形成能力,增加细胞凋亡率,上调E-cadherin蛋白表达并下调N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和β-catenin蛋白表达;过表达β-catenin可逆转此作用。结论 KRT6A在A549-RR细胞中表达上调,敲减KRT6A可降低A549-RR细胞的抗辐射能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路诱导的EMT有关。

卵巢支持-间质细胞肿瘤的临床及影像学特征

目的探讨卵巢支持-间质细胞肿瘤(SLCT)的临床及影像学特征,以提高对本病的诊断准确率。方法选取在本院经手术和病理证实的11例SLCT患者资料,分析其临床和影像学(MRI/CT)特征。结果11例患者中3例表现为男性化特征,2例为去女性化特征,5例为雌激素过多的女性化特征,1例无症状。5例血清睾酮升高。所有肿瘤均为单侧,边界清楚。9例为实性或实性为主肿瘤,1例为囊实性肿瘤,1例为囊性肿瘤。MRI检查显示肿瘤实性部分T_(1)WI呈稍不均匀等或稍低信号,T_(2)WI呈稍高信号,DWI呈高信号,ADC值减低,增强扫描实性部分明显强化呈高信号,部分显示肿瘤边缘丰富血管影。CT平扫显示实性部分呈软组织密度影,增强扫描显示富血供明显强化。结论卵巢SLCT的MRI/CT表现具有一定特征性,结合临床表现和血清睾酮升高的特点,有助于术前诊断和合理治疗。

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

卵巢支持-间质细胞瘤临床病理学及分子遗传学特征分析

目的 探讨卵巢支持-间质细胞瘤(SLCT)的临床病理学特征及分子遗传学特征。方法 回顾郑州大学第一附属医院收治的13例SLCT患者的临床病理资料,Sanger测序检测DICER1热点区域体细胞突变(第24、25外显子相关位点),完善随访资料,分析DICER1突变与SLCT临床病理特征的相关性,并检索相关文献。结果 SLCT中位数年龄24岁,首发临床症状为月经失调、盆腔包块或下腹胀痛;镜下见管状、条索状及肉瘤样等区域,免疫组化表达CR、WT-1、Inhibin-α、SF-1等。预后随访中30.8%(4/13)患者复发,76.9%(10/13)检测到DICER1基因突变,且DICER1基因突变在年龄上差异有统计学意义(P<0.05),在组织学分化程度、肿瘤是否复发上差异无统计学意义(P>0.05),有异源性分化者DICER1突变率可能高。结论 SLCT形态多样,诊断需要结合临床特点、免疫组化及DICER1基因检测。DICER1突变多发生于年轻患者,与组织学分化、肿瘤是否复发的关系需进一步研究。

非小细胞肺癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达及对上皮间质转化进程的影响

目的探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-363-3p(miR-363-3p)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4)表达及对上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法收集行手术切除的84例非小细胞肺癌患者的癌及其癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌及癌旁组织miR-363-3p、SOX4 mRNA表达,免疫组化SP法检测癌及癌旁组织中E-cadherin、Vimentin表达。比较不同病理特征患者癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达,采用Spearman秩相关分析癌组织miR-363-3p、SOX4 mRNA表达与E-cadherin、Vimentin相关性。使用相对超危险度比(RERI)、归因比(AP)、交互作用指数(SI)分析miR-363-3p、SOX4参与EMT进程的交互作用。结果癌组织中miR-363-3p表达低于癌旁组织,SOX4 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05);癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达与性别、年龄、吸烟史、肿瘤最大径无关(P均>0.05),与分化程度、TNM分期有关(P均<0.05);癌组织E-cadherin阳性表达率低于癌旁组织,Vimentin阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05);癌组织miR-363-3p与E-cadherin表达呈正相关(r=0.491,P<0.05),与Vimentin表达呈负相关(r=-0.506,P<0.05);癌组织SOX4 mRNA与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.527,P<0.05),与Vimentin表达呈正相关(r=0.463,P<0.05)。癌组织miR-363-3p、SOX4对EMT进程存在负向交互作用(RERI=29.639,AP=70.91,SI=3.656)。结论非小细胞肺癌组织中miR-363-3p、SOX4异常表达与EMT有关,且二者对EMT进程存在负向交互作用。

ISLR通过活化PI3K-AKT通路促进上皮-间质转化影响骨肉瘤细胞恶性进展研究

目的 研究含免疫球蛋白超家族亮氨酸丰富重复蛋白(immunoglobulin superfamily containing leucine-rich repeat protein,ISLR)参与骨肉瘤细胞恶性进展的作用及其潜在调节机制。方法 通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤组织和细胞中ISLR mRNA水平。通过转染ISLR短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列或阴性对照shRNA(negative-control shRNA,NC shRNA)序列至U2OS细胞,后用磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3 kinase,PI3K)激活剂740 Y-P处理细胞。通过CCK-8法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力和细胞凋亡率。蛋白印迹实验(Western blot)检测ISLR蛋白、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白[上皮钙黏蛋白(epitheia-cadherin,E-cadherin)、神经钙黏蛋白(nerve-cadherin,N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin),Snail]、PI3K/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路相关蛋白、细胞凋亡相关蛋白[半胱天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)]和肿瘤增殖标志物Ki67蛋白表达。采用慢病毒转染的U2OS细胞注射裸鼠构建异种移植瘤模型,监测肿瘤生长情况。结果 与癌旁组织(1.01±0.02)相比,骨肉瘤组织(5.14±1.63)中ISLR mRNA水平显著上调,差异具有统计学意义(t=-14.332,P<0.001)。与正常人成骨细胞hFOB1.19(1.01±0.01)相比,骨肉瘤细胞MG63(3.05±0.57),U2OS(4.55±0.79),HOS(2.46±0.41),Saos-2(2.62±0.44)和143B(3.62±0.51)中ISLR mRNA相对表达均显著升高,差异具有统计学意义(t=4.883,8.473,3.471,3.854,6.247,均P<0.05)。与对照组和NC shRNA组比较沉默ISLR明显抑制了U2OS细胞增殖(t=6.593,6.835)及侵袭(t=8.621,8.448),促进细胞凋亡(t=25.505,25.574),差异具有统计学意义(均P<0.05)。沉默ISLR明显促进U2OS细胞中Caspase-3活性(t=13.489,13.366)及Bax蛋白(t=8.628,8.524)表达,抑制Bcl-2蛋白(t=10.948,10.775)表达,差异具有统计学意义(均P<0.05)。沉默ISLR显著促进EMT相关蛋白E-cadherin(t=15.168,15.087)表达,抑制N-cadherin(t=10.220,10.058),Vimentin(t=8.303,8.164)和Snail(t=9.211,9.384)蛋白表达,降低PI3K/AKT通路关键蛋白PI3K和AKT磷酸化水平(t=17.441,14.452),差异具有统计学意义(均P<0.05)。740 Y-P处理可逆转ISLR沉默对U2OS细胞的影响。裸鼠体内实验显示敲低ISLR显著抑制了肿瘤生长。结论 ISLR可能通过激活PI3K/AKT通路促进骨肉瘤EMT及细胞增殖、侵袭,抑制细胞凋亡,从而促进骨肉瘤进展。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响

目的:探讨白屈菜红碱(CHE)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的抑制作用,阐明其相关作用机制。方法:体外培养SKOV3细胞,分为对照组和2.5、5.0、10.0、20.0及40.0μmol·L^(-1)CHE组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率。体外培养SKOV3细胞,分为对照组、转移生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组,采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Westren blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平,免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度。结果:MTT法,与对照组比较,5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L^(-1)CHE组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移率明显升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞迁移率明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。Westren blotting法,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光染色,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin荧光强度明显降低,N-cadherin荧光强度明显升高;与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin荧光强度明显升高,N-cadherin荧光强度明显降低。结论:CHE能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

白芍总苷对肠缺血再灌注大鼠Cajal间质细胞凋亡和血清炎症因子的影响

目的探讨白芍总苷对肠缺血再灌注大鼠间质细胞凋亡和血清炎症因子的影响。方法选取40只SD大鼠,雌雄参半,随机分10只为假手术组,假手术组大鼠在21~22℃下,湿度50%的环境下用新鲜干燥的饲料进行随时采食喂养。剩余30只大鼠通过手术建立肠缺血再灌注模型。建模成功后的30只SD大鼠随机分为肠缺血再灌注模型组、大黄素对照组、白芍总苷组,每组10只。假手术组、肠缺血再灌注模型组在再灌注前30 min时经股动脉注射10 mL/kg生理盐水,大黄素对照组在再灌注前30 min时40 mg/kg剂量灌胃,白芍总苷组在再灌注前30 min时50 mg/kg剂量灌胃,连续给药4周。使用HE染色法对大鼠肠组织进行观察分析。采用Western blot法检测C-Kit蛋白,采用RT-PCR检测C-Kit mRNA表达;使用散射比浊法检测血清中炎症因子、一氧化氮(NO)、内毒素水平。结果假手术组大鼠C-Kit蛋白、C-Kit mRNA表达高于肠缺血再灌注模型组、白芍总苷组(P<0.05);肠缺血再灌注模型组大鼠C-Kit蛋白、C-Kit mRNA表达低于假手术组、大黄素对照组、白芍总苷组(P<0.05);大黄素对照组C-Kit蛋白、C-Kit mRNA表达高于肠缺血再灌注模型组,低于假手术组、白芍总苷组(P<0.05);白芍总苷组C-Kit蛋白、C-Kit mRNA表达低于假手术组,高于肠缺血再灌注模型组(P<0.05)。假手术组大鼠NO、内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-8(IL-8)、白介素-6(IL-6)水平低于肠缺血再灌注模型组、白芍总苷组(P<0.05);肠缺血再灌注模型组大鼠NO、内毒素、TNF-α、IL-8、IL-6水平高于假手术组、白芍总苷组(P<0.05);大黄素对照组NO、内毒素、TNF-α、IL-8、IL-6水平高于假手术组、白芍总苷组,低于肠缺血再灌注模型组(P<0.05);白芍总苷组大鼠NO、内毒素、TNF-α、IL-8、IL-6水平高于于假手术组,低于肠缺血再灌注模型组大鼠(P<0.05);肠缺血再灌注模型组大鼠Cajal间质细胞凋亡率(24、48、72 h)高于假手术组、白芍总苷组大鼠(P<0.05);大黄素对照组大鼠Cajal间质细胞凋亡率(24、48、72 h)高于假手术组、白芍总苷组,低于肠缺血再灌注模型组(P<0.05);假手术组Cajal间质细胞凋亡率(24、48、72 h)高于白芍总苷组大鼠(P<0.05)。结论白芍总苷能够改善肠缺血再灌注大鼠机体炎症情况,抑制Cajal间质细胞凋亡。

卵巢支持-间质细胞瘤的影像学表现分析并文献复习

卵巢支持-间质细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor,SLCT)又称为男性母细胞瘤,属于卵巢恶性肿瘤的性索间质瘤亚组,约占所有恶性卵巢肿瘤的7%[1]。其发病率低,临床症状与影像学表现在盆腔卵巢肿瘤中不典型,关于该病的影像学报道较少,易出现误诊[2]。现结合3例我院收治的经病理证实的卵巢SLCT患者资料,对其MRI、临床及病理特征进行分析,以提高对该病的认识和临床诊断水平。

基于Cajal间质细胞治疗慢传输型便秘患者的研究进展

慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)是功能性便秘的一种常见类型,以结肠蠕动缓慢、肠道内容物排出延迟为特点,常伴有排便次数少、排便困难等症状。研究表明,STC的发生与Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的异常改变有关。本文通过总结ICCs的分类、标志物、功能及其与STC的关系发现ICCs的数量和功能异常可影响STC患者的症状。此外,本文还总结了STC的不同治疗措施如微生态制剂、中医药、物理疗法和分子治疗对ICCs的潜在影响,并提供了STC患者治疗的新思路。笔者认为,ICCs可作为STC患者治疗的潜在靶标,未来研究应当关注ICCs在STC发病机制中的作用,开发特异性治疗手段,并评估干细胞疗法和基因疗法等新兴策略在临床中应用的可能性,为STC患者提供新的治疗选择。

circPVT1靶向调控miR-195-5p/SOX9轴影响结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化

目的:探究环状RNA浆细胞瘤变体易位1(circPVT1)靶向调控微小RNA-195-5p(miR-195-5p)/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养人正常结肠上皮细胞NCM-460、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)至对数期,将SW480细胞分为对照组(正常培养SW480细胞不进行转染)、空载质粒组(转染空载质粒)、circPVT1沉默组[转染circPVT1小干扰RNA(siRNA)质粒]、miR-195-5p过表达组[转染miR-195-5p模拟物(mimics)质粒]、SOX9沉默组(转染SOX9 siRNA质粒)、circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组(转染circPVT1 siRNA和miR-195-5p siRNA质粒)。各组转染相应质粒后培养48 h。荧光定量PCR法检测NCM-460细胞、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)和各组SW480细胞circPVT1、miR-195-5p、SOX9 mRNA的表达;噻唑蓝和流式细胞仪分别检测各组SW480细胞增殖和凋亡;蛋白印迹法检测各组SW480细胞SOX9、凋亡和EMT相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9的靶向关系。结果:与NCM-460细胞比较,SW480细胞、HCT116细胞、HCT29细胞、LOVO细胞、SW620细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达显著升高,miR-195-5p表达显著降低(P<0.05);其中,SW480细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达最高,miR-195-5p表达最低;故选择SW480细胞进行后续实验。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组circPVT1、SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低,miR-195-5p表达显著升高(P<0.05);miR-195-5p过表达组miR-195-5p表达显著升高,SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);SOX9沉默组SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组、miR-195-5p过表达组、SOX9沉默组细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与circPVT1沉默组比较,circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组miR-195-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低,SOX9 mRNA及蛋白、细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9存在靶向调控关系。结论:沉默circPVT1可以靶向上调miR-195-5p表达,抑制SOX9表达,进而抑制SW480细胞增殖和EMT进程,促进其凋亡。

二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转化的影响

目的研究二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)增殖、迁移及上皮间质转化的影响。方法选择永生化人LEC(HLEB-3细胞)作为细胞来源;将细胞融合度80%的人LEC置于含10 mg·L^(-1)TGF-β_(2)的DMEM低糖培养基中培养24 h作为对照组,经TGF-β_(2)处理再加入不同浓度二甲双胍进一步作用后的细胞作为实验组。处理后在倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化。采用CCK-8实验检测细胞毒性,计算细胞存活率,Western blot法检测细胞中辅助激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)、大肿瘤抑制因子1(LATS1)、波型蛋白(Vimentin)的表达,实时荧光定量PCR检测YAP1、LATS1、哺乳动物STE20样激酶1(MST1)、Vimentin、E-钙黏蛋白mRNA的表达。结果二甲双胍细胞毒性检测结果显示,当二甲双胍浓度大于15.0 mmol·L^(-1)时,人LEC的存活率明显降低,表明二甲双胍浓度对LEC存活影响较大,因此选择15.0 mmol·L^(-1)进行后续实验。二甲双胍对TGF-β_(2)诱导的人LEC增殖有显著的抑制作用,且呈明显的剂量依赖性(均为P<0.001)。15.0 mmol·L^(-1)二甲双胍作用于人LEC 24 h后细胞中YAP1和Vimentin蛋白相对表达量均低于对照组(均为P<0.05);LATS1蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。15.0 mmol·L^(-1)二甲双胍作用于人LEC 24 h后细胞中YAP1和Vimentin mRNA相对表达量均低于对照组,LATS1、MST1、E-钙黏蛋白mRNA相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论二甲双胍在体外能够对TGF-β_(2)诱导的人LEC增殖、迁移及上皮间质转化产生抑制作用,同时可下调YAP1和Vimentin mRNA的表达,上调LATS1、MST1、E-钙黏蛋白mRNA的表达;该作用机制可能与其激活Hippo信号通路有关。

近5年中医药调控Cajal间质细胞增殖治疗慢性传输型便秘的研究进展

慢性传输型便秘(STC)是由于肠道蠕动减慢、粪便传输迟缓所致的便秘,主要表现为排便困难、排便次数减少、排便不尽感,同时伴有腹胀、腹痛等症状,是一种较为普遍的便秘类型,其发病机制尚未被完全阐述。Cajal间质细胞(ICC)作为消化道传导慢波信号的基础,与STC密切相关,是近年来研究的热点。ICC的数量、分布、功能、结构的改变均会影响胃肠道运动,其中ICC的减少是引起STC发病的主要原因。中医药通过辨证论治干预与ICC增殖有关的信号通路,调节ICC数目,调控自噬,抗凋亡,促进胃肠道蠕动,缓解便秘症状。文章对实验研究的信号通路与单味中药、中药复方及针灸推拿方面的治疗机制进行综述,以望为临床治疗STC提供思路。